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실험Q&A - 전체 (오늘 4건) 질문/투표/프로토콜 등록
Q. 오토클레이브 압력 빠지고 온도 상승
안녕하세요 오토클레이브 작동 중 온도가 다 올라가기 전에 압력이 빠지고 압력이 다 빠지고 나서 온도가 올라가는 건 왜 그런가요?? 일단 강제종료시켰는데 뭔가 잘못한 걸까요?
회원작성글 빵실이  |  02.09
Q. DNA sequencing 결과에 관해 문의드립니다
각각 Dna의 1-86번째(up) / 87-321번째 (down)단백질 서열까지만 pcr해서 얻은 insert를 pmCherry-C1에 ligation한 결과입니다.  Sequencing을 맡겼고, multialign으로 원래 DNA의 Fasta 서열과 비교한 것인데, 900번대 뒤부터 한두개의 오류가 발생합니다. 원래 sequencing시 읽어주는 promoter 시작점에서 뒤쪽 900-1000번대 부터는 오류가 발생할 수 있다는 것을 알고 있긴 하지만 혹시 그대로 사용해도 문제점은 없을지 염려되어 문의남깁니다...!  
회원작성글 인생막삼  |  02.09
Q. ss배지에서는 그람양성균 안자라는 거 맞죠? 자꾸 포도상구균이 자랍니다ㅠ 첨부파일
안녕하세요 실험 중인데 ss배지에서 자꾸 포도상구균이 자랍니다.. 처음에는 제가 실수로 배지만들 때 오토클레이브에 돌려서 그런 줄 알고 그냥 끓이기만 해서 배지 만들었는데 여기에서도 자라네요...뭐가 문제일까요 스톡이 잘못된건지ㅠ배지사진도 첨부할게요..
회원작성글 초보원생  |  02.09
Q. ELISA dilution 결정..
안녕하세요, ELISA를 처음 시작하는 초보 석사생입니다.   1)보려고 하는 단백질의 평균 혈중 농도: 80~100ng/ml  2)ELISA detection range: ~1200pg/ml 3)사용량: 50ul   이런 상황일때 얼마로 dilution 해야할까요? 계산법 좀 알려주세요 ㅜㅜ   80ng/ml -> 80,000pg/ml -> 1:1000 dilution -> 80pg/ml 사용량 50ul 이므로, 80pg/ml X 50=4000pg/ml 이렇게 계산하는 것으로 이해하고 있었는데... dilution rate가 너무 증가하는 것 같아 이상해서요ㅠㅠ    꼭 도와주세요!! 미리 감사드립니다.
회원작성글 척척석사_  |  02.09
Q. 대장암 모델의 대장 위치에 따른 차이
안녕하세요. 대장암 모델을 연구하고 있는데, 처음이다 보니 다른 연구자 분들의 의견이 듣고 싶어 질문하게 되었습니다.   제가 AOM/DSS 로 유도된 마우스를 희생하여 조직병리와 단백질 분석을 수행하려고 합니다. 대장 위치 proximal, mid, distal colon에 따라 단백질 분석 결과가 달라지는지 궁금합니다. 대장암 모델은 처음이라,, 조직병리는 암 발생이 가장 많이 된 부위를 분석하면 될 것 같은데, 단백질은 확신이 들지 않네요. 의견 부탁 드립니다. 감사합니다.
회원작성글 조미  |  02.08
Q. (아미노산 코돈표)이 table은 왜 이런식으로 표기한건가요..? 첨부파일
질문에 앞서 실험보다 문헌에 관련된 내용인 점 사과드립니다. translated RNA가 아미노산을 구성하기때문에 코돈표를 보면 일부를 제외하고 RNA 기준 (T->U)으로 3 letter를 표기하는 것을 일반적으로 봐왔는데요 첨부된 표는 제2의문자 중 G에 해당하는 열만 U로 표기하지 않고 T로 표기한 것을 볼 수 있었습니다. (ex. 시스테인, UGU -> TGT) 또한 제 3의문자 행도 U가 아닌 T로 적혀있었는데요 검색하였을때도 이런 표는 찾지 못하였습니다. 단순 실수일수도 있지만 제가 모르는 이유가 있어서 이렇게 표기했을 수도 있다는 생각이 들기도 합니다 (식물육종관련서적). 이학관련 질의 커뮤니티 아는곳이 없어 bric에 질의 올립니다...
회원작성글 RBR  |  02.08
Q. qRT-PCR , triplicate(replicate)에 대해서
  안녕하세요. qRT-PCR를 공부하다 의문점이 생겨 질문드립니다. 그림을 보면서 질문 드리는게 빨라 그림을 먼저 제시합니다. (5개의 샘플, 6개의 유전자(5개유전자 +GAPDH))   이 논문에서는 WT(정상인)과 환자4분(FD-1,FD-2,FD-3,FD-4)으로 부터 유래한 세포를 배양하여 qRT-PCR를 진행한 디자인 입니다.  이 논문에서는 qRT-PCR는 triplicate으로 진행했다고 하였으며 SEM(N=3)을 했다고 나와 있습니다.    1. 제가 이해하기로는 1,2,3번 컬럼의 WT이 모두 하나의 세포 배양plate에서 추출한 RNA로 이해했는데 맞나요? 즉 qRT-PCR당 5개의 세포배양을 준비해야하 하고 N=3이니 총 15개의 세포배양을 해야한다 라고 이해했는데 맞나 모르겠습니다. 1번의 경우 (The data are expressed as means +- SEM(n=3).)     2. 사실 위의 개념이 햇갈린 이유는, 다른 논문에서는 triplicate로 qRT-PCR로 진행했다고 하면서 mean+sd 의 그래프를 제시합니다. 이 경우는  1,2,3번 컬럼에서 WT이긴 하지만 하나의 세포배양 plate가 아닌 3개의 서로 다른 plate로 한번에 qRT-PCR진행한것 같습니다 맞나요? 2번의 경우 (Experiments were conducted in triplicate (mean ± SD).)       3. 제가 위에 제시한 개념이 모두 맞다면 1번과 2번 경우 모두 기술적 차이는 없는것 인가요? 2번의 방법으로 제시해도 괜찮은지 그 qPCR 오차에서.. 그런부분이 좀 신경쓰입니다. 물론 실험디자인상 실험가격도 고려해야할 중요한 요소 이지만요    감사합니다.   
회원작성글 대학원지망생  |  02.08
Q. 인체에서 환원이 미치는 영향
산화,환원에 대해 학습하다가 흔히 산화는 인체에 노화를 일으킨다는 말과 말리 환원은 어떤 역할을 하는지 접해본적이 없는것 같아 찾아보았습니다. 드물게 환원스트레스에 대한 내용을 찾아볼 수 있었으나 정확한 매커니즘도 없고 과학적인 내용보다는 병원 홍보성 자료, 위키백과의 자료라 신뢰도가 부족하다 생각합니다. 그런데 논문 사이트 등에서 키워드를 중심으로 아무리 찾아봐도 정확한 자료를 찾기가 힘드네요...혹시 인체에서 환원에 의해 발생하는 현상을 알고 계시다면 알려주실 수 있으신가요? 감사합니다
회원작성글 김규연  |  02.08
Q. 항생제 농도&종류 고민입니다
안녕하세요. 개미 체표면 미생물상 조사 전 변인통제를 위해 수용액 상태로 희석한 항생제를 개미 표면에 도포한 후 사육을 시작하려 하는데, 고민입니다.   1. Ampicillin, Rifampin, Kanamycin 중에 가장 범용성이면서 수용액으로 사용하기 적절한 게 뭘까요? 이것부터 너무 고민입니다.   2. 농도는 약 얼마 정도가 괜찮을까요? 개미가 소형종이라 농도 조절이 중요함은 알고 있는데, 어느 정도로 해야 할지가 막막하네요. (1% 리팜핀을 개미 표면에 처리한 논문은 있었는데, 그게 수용액인지 다른 용매에 녹은 건지 알수가 없네요.) 단위는 g/mL로 부탁드립니다.   3. ampicillin은 그람음성과 양성 모두 범용성이고, 리팜핀은 그람양성에 효과적인 것으로 알고 있는데, 수용액 상에서 두 항생제를 섞어서 개미 체표면에 도료하면 문제가 될까요?
회원작성글 jaehunjeon...  |  02.08
Q. Tet on 에서 Doxycycline 처리 조건에 대해 문의드립니다
HEK293T에 Tet promoter가 있는 Plasmid를 Transfection 시켰습니다 Doxycyline - induced GOI system 인데 Tet on에서 Doxycycline 처리 시간이 논문마다 24h과 48h으로 나뉘어져 문의드리게 되었습니다.   1) Tet on에서 보통 mammalian cell에 dox를 24h처리하는지 48h처리하는지 궁금합니다   2) Tet system에 대해 적힌 paper에서는 stable cell line에는 48h, Transient Txn cell에는 24h Dox를 처리하던데 두 cell 이 처리시간이 달라지는 이유가 궁금합니다. (애초에 둘이 다르게 처리해주는 것이 맞는지 궁금합니다!)
회원작성글 인생막삼  |  02.08
실험Q&A - 답변 (오늘 16건)
Q. qRT-PCR , triplicate(replicate)에 대해서
  안녕하세요. qRT-PCR를 공부하다 의문점이 생겨 질문드립니다. 그림을 보면서 질문 드리는게 빨라 그림을 먼저 제시합니다. (5개의 샘플, 6개의 유전자(5개유전자 +GAPDH))   이 논문에서는 WT(정상인)과 환자4분(FD-1,FD-2,FD-3,FD-4)으로 부터 유래한 세포를 배양하여 qRT-PCR를 진행한 디자인 입니다.  이 논문에서는 qRT-PCR는 triplicate으로 진행했다고 하였으며 SEM(N=3)을 했다고 나와 있습니다.    1. 제가 이해하기로는 1,2,3번 컬럼의 WT이 모두 하나의 세포 배양plate에서 추출한 RNA로 이해했는데 맞나요? 즉 qRT-PCR당 5개의 세포배양을 준비해야하 하고 N=3이니 총 15개의 세포배양을 해야한다 라고 이해했는데 맞나 모르겠습니다. 1번의 경우 (The data are expressed as means +- SEM(n=3).)     2. 사실 위의 개념이 햇갈린 이유는, 다른 논문에서는 triplicate로 qRT-PCR로 진행했다고 하면서 mean+sd 의 그래프를 제시합니다. 이 경우는  1,2,3번 컬럼에서 WT이긴 하지만 하나의 세포배양 plate가 아닌 3개의 서로 다른 plate로 한번에 qRT-PCR진행한것 같습니다 맞나요? 2번의 경우 (Experiments were conducted in triplicate (mean ± SD).)       3. 제가 위에 제시한 개념이 모두 맞다면 1번과 2번 경우 모두 기술적 차이는 없는것 인가요? 2번의 방법으로 제시해도 괜찮은지 그 qPCR 오차에서.. 그런부분이 좀 신경쓰입니다. 물론 실험디자인상 실험가격도 고려해야할 중요한 요소 이지만요    감사합니다.   
회원작성글 대학원지망생  |  02.08
Q. ELISA dilution 결정..
안녕하세요, ELISA를 처음 시작하는 초보 석사생입니다.   1)보려고 하는 단백질의 평균 혈중 농도: 80~100ng/ml  2)ELISA detection range: ~1200pg/ml 3)사용량: 50ul   이런 상황일때 얼마로 dilution 해야할까요? 계산법 좀 알려주세요 ㅜㅜ   80ng/ml -> 80,000pg/ml -> 1:1000 dilution -> 80pg/ml 사용량 50ul 이므로, 80pg/ml X 50=4000pg/ml 이렇게 계산하는 것으로 이해하고 있었는데... dilution rate가 너무 증가하는 것 같아 이상해서요ㅠㅠ    꼭 도와주세요!! 미리 감사드립니다.
회원작성글 척척석사_  |  02.09
Q. (아미노산 코돈표)이 table은 왜 이런식으로 표기한건가요..? 첨부파일
질문에 앞서 실험보다 문헌에 관련된 내용인 점 사과드립니다. translated RNA가 아미노산을 구성하기때문에 코돈표를 보면 일부를 제외하고 RNA 기준 (T->U)으로 3 letter를 표기하는 것을 일반적으로 봐왔는데요 첨부된 표는 제2의문자 중 G에 해당하는 열만 U로 표기하지 않고 T로 표기한 것을 볼 수 있었습니다. (ex. 시스테인, UGU -> TGT) 또한 제 3의문자 행도 U가 아닌 T로 적혀있었는데요 검색하였을때도 이런 표는 찾지 못하였습니다. 단순 실수일수도 있지만 제가 모르는 이유가 있어서 이렇게 표기했을 수도 있다는 생각이 들기도 합니다 (식물육종관련서적). 이학관련 질의 커뮤니티 아는곳이 없어 bric에 질의 올립니다...
회원작성글 RBR  |  02.08
Q. DNA sequencing 결과에 관해 문의드립니다
각각 Dna의 1-86번째(up) / 87-321번째 (down)단백질 서열까지만 pcr해서 얻은 insert를 pmCherry-C1에 ligation한 결과입니다.  Sequencing을 맡겼고, multialign으로 원래 DNA의 Fasta 서열과 비교한 것인데, 900번대 뒤부터 한두개의 오류가 발생합니다. 원래 sequencing시 읽어주는 promoter 시작점에서 뒤쪽 900-1000번대 부터는 오류가 발생할 수 있다는 것을 알고 있긴 하지만 혹시 그대로 사용해도 문제점은 없을지 염려되어 문의남깁니다...!  
회원작성글 인생막삼  |  02.09
Q. 세포에 오일 샘플 처리 방법
안녕하세요 ! 선배님들 식물 종자유에서 세포 실험중 입니다. 항염증 (NO 생성 억제) 실험을 진행하고 있는데 샘플이 오일이라 DMSO에 녹여 사용하고 있습니다. 농도별로 샘플처리를 하였는데요, 결과가 자꾸 거꾸로 나옵니다. 저농도에서 NO 억제가 가장 좋게 나옵니다. 그리고 결과의 오차가 엄청납니다. 이유가 무엇인지 너무 궁금합니다. 오일샘플이라 잘 섞이지 않아서 오차가 큰건지.. 저농도에서 왜 활성이 더 좋은건지.. ㅠ 지금 반복실험중인데 할때마다 엉망이네요.  논문도 찾아봤으나 저같이 거꾸로 나오는 결과는 없고, 어떤 용매에 희석했는지도 나오질 않아 너무 답답해서 여쭙니다
회원작성글 쿠이크이  |  02.07
Q. 센트리퓨지 추천
안녕하세요,    연구실에서 20년 넘게 사용해온 centrifuge가 요즘 비실비실해서 새로 구매하려고 고민 중입니다.  단백질 정제가 많은 연구실이고 주로 French Press로 세포를 깬 후 spin down하는데 활용하던 쎈돌이(centrifuge의 애칭이죠^^;)라 35-ml tube 8개를 넣어 15000 rpm으로 30분 정도 돌리는데 주로 사용해왔습니다. 한일 과학 제품이었고요.  요즘 국산 쎈돌이를 보니 라보젠과 한일, 두 회사로 나뉘는 것 같습니다. 가격은 한일이 사알짝 더 비싸긴 한데 거의 차이 없고 오래 쓸 장비여서 좋은 걸로 구매하고 싶은데요. 실제 활용하시는 분들의 경험과 추천을 듣고 싶습니다.    1) 라보젠 제품 어떤가요? 저희가 견적 받은 제품은 1736R과 2236R입니다  2) 한일은 어떤가요? 받은 견적은 Supra R22와 R17 입니다.    미리 감사합니다!
회원작성글 집중해서일하고놀때놀..  |  01.24
Q. ss배지에서는 그람양성균 안자라는 거 맞죠? 자꾸 포도상구균이 자랍니다ㅠ 첨부파일
안녕하세요 실험 중인데 ss배지에서 자꾸 포도상구균이 자랍니다.. 처음에는 제가 실수로 배지만들 때 오토클레이브에 돌려서 그런 줄 알고 그냥 끓이기만 해서 배지 만들었는데 여기에서도 자라네요...뭐가 문제일까요 스톡이 잘못된건지ㅠ배지사진도 첨부할게요..
회원작성글 초보원생  |  02.09
Q. 대장암 모델의 대장 위치에 따른 차이
안녕하세요. 대장암 모델을 연구하고 있는데, 처음이다 보니 다른 연구자 분들의 의견이 듣고 싶어 질문하게 되었습니다.   제가 AOM/DSS 로 유도된 마우스를 희생하여 조직병리와 단백질 분석을 수행하려고 합니다. 대장 위치 proximal, mid, distal colon에 따라 단백질 분석 결과가 달라지는지 궁금합니다. 대장암 모델은 처음이라,, 조직병리는 암 발생이 가장 많이 된 부위를 분석하면 될 것 같은데, 단백질은 확신이 들지 않네요. 의견 부탁 드립니다. 감사합니다.
회원작성글 조미  |  02.08
Q. ELISA kit dilution
안녕하세요, 저는 ELISA kit로 ELISA를 준비 중 입니다. Mouse plasma로 ELISA를 진행할 것인데, Blood로 ELISA외에 해야 할 것이 많아서 ELISA에 필요한 plasma 양 만큼을 미리 소분해놓으려고 합니다.   ELISA를 하기 위해서는, sample의 농도에 따라 적정 수준까지 희석해야 하는 것으로 알고 있습니다.   그런데.. ELSIA가 처음이고 같은 연구실에 알려줄 선생님도 없다보니, 얼마만큼을 dilution해야 되는건지.. 얼마만큼을 미리 소분해놓아야 되는 건지 감이 아예 잡히지 않아서요 ㅠㅠ   1)ELISA Kit에서 나오는 dilution 메뉴얼에 보면, 샘플의 농도를 파악하고 예측하여 Dilution을 해라 라고 나오던데.. 혹시 적절한 농도를 파악하는 팁이 있을까요..? 메뉴얼에 나오는 diltion에서 제일 적은 비율을 먼저 해보는게 좋을까요? 2)GFAP, S100B, pro-BNP, ES(Endostatin) 이렇게 4개를 보려고 하는데, 혹시 해당 Ab들은 잘 검출되는 Ab일까요? 검출이 잘 될수록 dilution 비율을 크게 잡아도 된다고 해서요...   꼭 좀 도와주세요 ㅠㅠㅠ
회원작성글 척척석사_  |  01.19
Q. cloning 과정 ampicilin plate
ligation 후 E.coli competent cell 에 transformation을 진행 후 ampicilin plate에서 키운 후 overnight 된 뒤 plate를 확인해보면 콜로니가 골고루 plate에 뜨는게 아니라 가운데 콜로니 하나에 주변에 콜로니가 모여서 뜨는 현상이 나타납니다. 냄새도 오염된거 같은 냄새가 나고요. competent cell이 문제인가 싶어 바꾸서 진행해도 똑같은 현상이 일어나서 질문드립니다. 제가 ligation 시 vector와 insert의 농도를 잘못 계산하여 진행해서 이런 현상이 발생하는것인지, 아니면 실험과정에서 오염이 발생해서 이러한 현상이 나타나는것인지 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 분자생물학도  |  02.06
공지사항
2022년 실험Q&A 우수회원 안내
중고등학생의 과학실험주제나 방법 및 숙제에 대한 질문 자제 요청
실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
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