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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
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Q. SDS-PAGE 끌림현상(reducing Vs non-reducing)
안녕하세요!   단백질을 SDS-PAGE로 확인하고 있고, complex 형태를 이루는 부분이 있기 때문에 reducing과 non-reducing 샘플을 항상 비교하고 있습니다. Column work을 한 후에 보고 있는데, 최근 affininty 후에 샘플에서 끌림현상이 확인되고 있습니다. 정확하게는 affinity column 후, reducing과 non-reducing 샘플을 1개의 pre-made(commercial gel) gel에 loading을 하는데, 'non-reducing' 샘플에서만 끌림 현상이 확인되고, reducing 샘플은 깨끗하게 나오고 있습니다.  혹시 어떤 원인이 있을지 궁금합니다. 답변 주신 분들게 미리 감사 인사 드립니다.
회원작성글 sein  |  11.30
Q. 미토콘드리아로의 전위 관련 해석이 안됩니다ㅠ 첨부파일
제가 가지고 있는 단백질의 서열에서 미토콘드리아로의 transmit을 해주는 서열이 있는지 확인하기 위해서 구글에서 찾아진 예측 프로그램을 돌려보았습니다! 아래 사진같은 결과가 나온다면, GO-term: C: mitochondria outer membrane 을 보았을 때, outermembrane 쪽으로 가게 해주는 signal peptide가 있다고 해석해도 되는 것인가요?
회원작성글 jjnli  |  11.27
Q. protein 농도 만들기
human recombinant IFN-γ와 같은 protein을 사서 실험을 하려고 할때 사진에서처럼 농도(20ng/ml, 767U/ml 등등) 이렇게 만드려면 계산을 어떻게 해서 만들어야 하나요?ㅠㅠㅠ 1mg으로 오면 이걸 1ml에 녹여서 1mg/ml로 만들고 희석하면 ng/ml로 만드는게 맞나요? 근데 U/ml은 어떻게 할지 모르겠어요...unit?정보도 안나와있고
회원작성글 개똥이야  |  11.25
Q. SDS-PAGE 밴드 휘어짐
최근 한달 사이에 PAGE를 내리면 두번째 사진처럼 양 끝쪽 밴드들이 더 많이 내려가 ∩ 모양으로 결과가 나오고 있습니다. 젤 퍼센트도 같거나 비슷하고, 버퍼도 동일하고, 러닝할 때 전압과 시간도 동일합니다. 유일하게 달라진 건 샘플버퍼를 새로 만들어서 썼다는건데 혹시 샘플버퍼 때문에 이런 문제가 생길 수 있나요? 체감상 샘플버퍼 바꾼 이후로 이런 문제가 생기는 것 같긴 하네요   정상일 때. 두달전까지만 해도 전부 이런식으로 잘 내려왔어요 최근에는 다 이렇게 양 끝이 휘어서 내려오고 있습니다  
회원작성글 ckk  |  11.25
Q. (그래프 있음, 질문 2개) 정량 곡선인 Standard curve 그렸을 때의 농도끼리 간격에 대한 질문이요. 첨부파일
질문 1) standard curve를 그렸을 때, 데이터가 너무 멀리 떨어져 있으면 좋지 않다고 하는데요. 그 이유를 모르겠어요. 질문 2) 예전에 R²값이 0.99 이상 되지 않았을 때, 데이터 1개를 빼서 0.99 이상으로 만들었었는데 모든 Standard 값이 다 들어간 상태로 정량해야 한다고 했었고요. 0.99 이상으로 만들기만 하면 되는 것이 아닌가요? 답변 부탁드립니다. 감사합니다.
회원작성글 아스널  |  11.24
Q. 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하나요?
안녕하세요? 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하는지에 대해서  https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=253751&ksr=1&FindText=%ED%94%8C%EB%9D%BC%EC%8A%A4%EB%AF%B8%EB%93%9C%20%ED%9E%88%EC%8A%A4%ED%86%A4 에서 논문을 찾아 주신 것 같은데 (http://www.nature.com/gt/journal/vaop/ncurrent/full/gt2011127a.html)  이 링크가 깨졌습니다. 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하는지에 대해서 논문을 알 수 있을지요? 감사합니다.
회원작성글 땡땡이  |  11.23
Q. ITC 측정 가능 여부
폴리머와 계면활성제간의 binding 양론을 보고자 ITC 측정을 하고 싶은데, 주로 생물쪽 연구에서 많이 쓰이는 기기다 보니 이런 용도로 쓰면 컨탬이나 고장 우려때문에 조금 꺼려하시는 분이 많으신 것 같습니다 ㅠㅜㅜ 혹시 이런쪽으로 ITC 기기 측정할 수 있는 곳 추천해주실수있으실까요ㅜㅜ 또, hexadecane 용매를 쓰는데 ITC 기기 측정에 큰 문제없을까요 답변해주시면 정말 감사하겠습니다!.
회원작성글 BRRIICCC  |  11.21
Q. 단백질 정량분석 실험 결과 질문드립니다.
y = 0.0408x + 0.0127입니다.  sample 값은 0.3688, 0.3954 입니다. 1. sample 농도 값 구하는 방법 2. 50 ug 일 때 필요한 ul은 얼마인지? 자세한 과정과 함께 알려주시면 감사하겠습니다!
회원작성글 펭귄뒤적  |  11.21
Q. PI3Ka와 PIK3CA는 서로 다른가요?
브릭에 글을 처음 써봅니다.... 기초적인 질문일 수도 있지만.... PI3Ka (Phosphatidylinositol 3-kinase alpha)와 PIK3CA (Phosphatidylinositol-4,5-Bisphosphate 3-Kinase Catalytic Subunit Alpha)는 다른 것인가요?    논문마다 다르게 사용하고 위키피디아 페이지도 따로 있던데 (https://en.wikipedia.org/wiki/Phosphoinositide_3-kinase , https://en.wikipedia.org/wiki/P110%CE%B1) 제가 혹시라도 다른 물질인데 같다고 착각하고 있을까봐 질문을 드립니다. kinase kinase kinase를 3K로 줄여도 되고 K3로 줄여도 되는 것이지요? 여쭤볼 곳이 없어서 여기에 여쭙게 되었네요 ㅠ 간단한 질문 죄송합니다, 감사합니다.   (두 위키 페이지를 자세히 읽어보니 PIK3CA는 유전자 이름이고 PI3Ka(또는 p110-α)는 단백질 이름이라고 이해하면 될까요?)
회원작성글 무민2  |  11.20
Q. 단백질 인산화 분석 업체 (LC-MS) 추천해 주세요
안녕하세요. 마우스 뇌 조직에 특정 단백질의 인산화를 분석하려 하는데, 시판되는 해당 단백질의 인산화 항체가 없어, LC-MS를 통해 인산화 분석하려 합니다. 이러한 실험을 대행해주는 실험실이나 업체를 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 bluehawk  |  11.18
Q. BAY 11-7082 action mechanism on NF-kappa B
안녕하십니까 아무리 구글링 해서 뒤져봐도 모르겠어서 질문 올립니다. ㅜㅜ BAY 11-7082라는 compound가 NF-kappaB를 inhibition하는 것은 알고 있는데 NF-kappaB를 구체적으로 어떻게 inhibition 하는지 모르겠습니다. 그니까 NF-kappa B의 구조에 어떻게 어디에 BAY가 들러붙어서 억제하는지 모르겠습니다. 
회원작성글 남홀  |  11.15
Q. 클로로필 필터지 무게
 안녕하세요. 질문이 있어서 글을 남깁니다.   다름이 아니라 식물플랑크톤의 거대분자조성 실험 중 일부 샘플의 필터지를 half로 잘라 무게를 측정하여 둘로 나누게 되었습니다. 그런데 이런 경우 필터지의 무게가 정확히 반이 아닌 0.004-0.01 정도의 오차가 발생할 수 있나요? 전체 필터지의 무게보다 반으로 나눈 필터지의 두 무게를 더한 값이 더 가볍게 측정되었습니다.   혹시 샘플을 재냉동후 해동하여 시간의 차이를 두고 무게를 측정했을 경우 값의 오차가 생길 수도 있는것인가요?
회원작성글 말랑복숭아  |  11.14
Q. SDS-PAGE에서 size marker의 밴드 수가 설명서보다 많이 떴습니다...어떻게 해석해야 하나요?
간단하게 SDS-PAGE 실험을 했는데요...size marker의 band를 봤는데 설명서에 있는 정보와 band 수가 다르게 나왔습니다... 설명서대로라면 12개 band가 나와야 하는데 실제로는 더 많이 나왔습니다. 그러면 각 band에 대한 분자량을 알 수 없는건가요...? 혹시 band가 번졌다거나 size marker가 아닌 다른 단백질이 band로 나타난건 아닐까요...? band가 많이 나온 이유와 해석 방법을 알고 싶습니다ㅜㅜ 실험은 185V 35분간 전기영동, 약 70분간의 염색과 2시간의 탈색을 진행했습니다. 1번 레인이 AccuLadder™ 3-color Prestained Protein size marker (Broad) (bioneer.co.kr) 이 링크의 size marker를 썼구요. 2번부터는 침과 우유, BSA 등등을 넣었습니다.    
회원작성글 rnjstjddnj..  |  11.13
Q. transcription factor에 대한 IF assay
안녕하세요 transcription factor에 대한 IF 수행중입니다. target protein은 NFATc2(NFAT1)이구요 inactivation 상태에서 cytosol에 존재하고 activation 되면 핵으로 이동하는데 이것을 관찰하고자 IF를 수행 했습니다. 그런데 이상하게 모든 세포에서 핵이 진하게 염색이 되는 문제가 있어서 어떻게 troubleshooting을 해야할 지 몰라 질문 남깁니다. fixing은 4% paraformaldehide로 10min 하고, PBS wash 후에 0.2% triton X-100 5min간 수행합니다. 그래서 cytosol에만 존재하는 protein으로 동일하게 실험 해봤더니 마찬가지로 모든 세포 핵에서 검출되네요.... 답변부탁드립니다ㅜㅜ
회원작성글 mol min  |  11.10
Q. 효소 특성(pH 안정성) 결과에 대해 질문드립니다. 첨부파일
효소 특성 실험을 진행하던 중, pH 안정성 결과가 이상하다고 생각되어 여러번 다시 해보았지만 같은 결과가 나와서 질문드립니다. pH 안정성(2.5-12)까지 0.5 단위로 버퍼를 만들어서 4도에서 24시간 보관 후 희석하여 활성을 측정하였습니다. (최적 pH는 결과가 정상적으로 나와 활성 측정방법이 틀린 것 같지는 않습니다.) 그런데 pH 3.5 부근에서 활성이 높아지는 현상이 계속 나타났습니다.  혹시 버퍼의 영향인가 싶어 다른 버퍼로도 확인해보았는데 비슷한 결과가 나타났습니다. 비슷한 결과가 있나 다른 논문들을 찾아보았지만 찾기 힘들어 고견 여쭙니다.. 실험이 잘못된 것이라면 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 기적  |  11.07
Q. 혈액에서 적혈구를 간단하게 filtration 하는법이 있을까요?
크기배제 크로마토그래피 처럼 특정 fabric이나 membrane을 이용해 피를 흘려보냈을때/스며들게 했을때 적혈구를 최대한 필터링 하는게 가능할까요? 있다면 어떤 소재를 쓰나요? 시간은 수시간 걸려도 상관없습니다. 별도의 약물처리/ 전기등의 에너지원없이 하는 방법을 원합니다. 완벽히 거르지 못해도 좋아요  
회원작성글 wooooong  |  11.06
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