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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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Q. 세포독성 흡광도
현재 세포독성실험만 10번은 진행했는데 흡광도가 자꾸 0.7~1.3 정도로 나옵니다ㅠ L929셀을 96well plate에 1×10⁵개/well씩 깔고 다음날 검액 교체했습니다. 그리고 24시간 후에 EZ-cytox(WST assay) 10ul 처리해서 1시간 동안 CO2 incubator에 넣어뒀다가 흡광도 측정하는데요.. 사수분은 항상 흡광도가 0.9~1.1 사이로 나왔고 실험실 프로토콜 상으로도 그 정도 범위에 들어가는 흡광도로 나와야 하는데 저는 암만 해도 그 정도로 안나오네요ㅠ 몇 번이나 실험 말아먹는 중인데 어떻게 해야 흡광도값이 일정하게 나올까요ㅠㅠ
회원작성글 젤리빔  |  02.01
Q. protoplast counting 방법 첨부파일
protoplast를 추출하고 hemocytometer로 계산하고 있습니다. 계산해야하는 샘플의 양이 많아서 현미경을 오래 보고 있기 힘들더라구요. 혹시 세포를 넣은 hemocytometer 사진을 찍고, 다른 프로그램으로 자동 계수하는 방법이 있을까요? Image J 나 기타 프로그램으로 할 수 있는 방법 알려주시면 감사하겠습니다!
회원작성글 감자역병  |  02.01
Q. 세포동결 할 때 vial 안으로 들어가는 액체 질소
cryo vial을 사용중인데, 동결 시 바이알을 꽉 잠그고 -80도에 보관 후, 액체질소(liquid nitrogen)로 옮깁니다. 동결 후 풀면 세포 상태가 너무 안좋고 붙어있는 셀 양도 별로 없어 질문남깁니다 ㅠㅠ  1. 동결을 풀기위해 액체질소에서 꺼내면 vial안에 액체질소가 들어서 부글부글 끓는 것이 보입니다. 정상인가요..? 그리고 꽉 닫았던 뚜껑들도 뚜껑이 얼어 다 헐렁헐렁해져서 살짝만 힘줘도 열려버립니다...  2. 안에 액체질소가 들어가더라도 세포는 사용이 가능한가요?? 액체질소에 닿으면 세포에 타격이 가나요.. 3. 안에 들어간 액체질소를 빼주고 사용해도 된다면, 뚜껑을 열지않고 엎드리기만해도 액체질소가 빠져나오던데 이렇게 빼주면되나요 아니면 꺼내자마자 뚜껑을 살짝 열어 빼주면 되나요..?   * 저는 액체질소에서 빼내서 실험실로 가져가 바로 37도에 녹입니다. 닫힌상태에서도 증발이 된다면 녹이는 과정이나 들고옮기는 과정에서 다 날라가지않나요..?? 근데도 세포가 이상해서 ㅠㅠㅠ 
회원작성글 마징가도리  |  02.01
Q. normal cell line
안녕하세요. 석사 1년차에 접어들게된 초보 연구자 입니다. 최근에 암연구를 하게 되어 현재 breast, liver, pancreas, stomach cancer에 대해 연구를 하게 되었는데 normal cell line을 한국세포주은행에서 얻을수가 없더라구요.  제가 찾은 cell line은  breast: MCF-10, MCF-10A, MCF-12A, MCF-12F, HBL-100, 184A1, 184A5 liver: Fa2N-4 pancreas: H6c7 stomach: HGaEpC 이렇게 있는데 다른 normal cell line이어도 괜찮습니다. cell line 분양 해주실 수 있다면 연락 부탁드립니다. jmk95@naver.com 010-6899-1058
회원작성글 newbee  |  02.01
Q. vero/hslam cell counting 질문
vero/h 가지고 실험해보는 학생입니다.  6well 96well 에 각각 깔아 plaque assay를 할려고 하는데  6well에는 4x10^5  96well에는 1.5x10^4 으로 well당 깔라고 알려주셨는데 cell counting해보니 1ml당 3.5x10^6이 나왔습니다 DMEM을 섞어 농도를 맞춰주는데 각각 몇씩 추가해주어야 알맞은 농도가 나올까요?.. 계산하는 법도 알려주시면 감사합니다..   초보적인 질문이라 죄송해요 ㅠㅠ
회원작성글 클로나  |  02.01
Q. 동물세포 관찰이나 사진촬영을 위한 염색 방법
안녕하세요. 인간유래 피부세포로 세포 증식활성 실험중입니다. 보통 Cell counting kit-8로 세포 증식능 데이터를 내는데 대조군과 비교가능한 사진도 같이 찍습니다. 사용하는 현미경은 일반 세포 관찰용 현미경인데 배율에 따라 사진도 잘찍힙니다. 문제는 세포가 좀 더 또렷하게 보이게끔 세포를 염색시켜서 사진을 찍으려고 하는데 이 때 사용할수있는 세포 염색약이 있을까요? 찾아보니 trypan blue로 동물세포 염색을 한다는데 이 염색약은 죽은세포를 염색시킨다고 하더라구요 형광은 사용이 안되어서 형광을 제외한 세포 염색법이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다 아래처럼 세포 사진을 찍을수있는 방법은 무엇인지 알수있을까요?
회원작성글 yeaharrr  |  01.31
Q. cell morphology 관련 질문 드립니다. 첨부파일
cell line은 HaCaT 이고, 1XPBS로 washing 후, media(DMEM) change 직후 사진입니다. RNA isolation 을 진행하기 위해 12-well plate에 seeding 해 둔 상황인데, media change 하기 직전까지는 괜찮았던 cell이 저렇게 되니 당황스럽네요ㅠㅠ 왼쪽 부분이 제가 평소에 아는 HaCaT morphology이고, 오른쪽 부분은 마치 cell이 터진 것처럼 물방울이 cell 주위에 형성된 저는 처음 보는 비정상적인 모습입니다. 혹시 이런 비슷한 경우를 경험하신 분이 있나요? 있으시다면 원인이 무엇인가요?ㅠㅠ 나름 HaCaT cell culture를 컨탐 없이 해왔어서, 원인을 정확히 모르겠습니다ㅠ
회원작성글 shinhwa  |  01.31
Q. 세포주 가능한 계대배양 횟수 확인방법
한국세포주은행에서 세포주를 검색하면 passage number까지 알 수 있다고 들었는데 culture method와 culture morphology까지만 보입니다.. 미천한 학부생에게 가르침을 주십시오
회원작성글 앞구르기  |  01.31
Q. Gibco사 cell freezing media 사용하시는 분들 질문있습니다.
안녕하세요.    cell stock 배지로 이번에 처음 Gibco 사의 Cell freezing medium을 구입하였습니다. (Cat# 12648010)   이전에 lonza 회사꺼를 썼는데 단종되서.. 바꿔보았는데요.    이전 사용했던 것과는 다르게 이건 보관온도가 -20도 이고 사용할 때 4도에서 thawing하여 사용하라고 하더라구요.   그런데 할 때마다 녹이기 번거로울것 같아서 혹시 4도에 계속 보관해도 되는지 질문드립니다. 
회원작성글 LMC  |  01.31
Q. cell divide
안녕하세요. cell 실험을 하는 학생입니다. 현재 cell을 계속 키우고 있는 상태 (stock으로부터 계대는 2번 한 상태) 입니다. 제가 궁금한점은. (seeding할 용도) 100파이의 한 플레이트를 12개정도로 divide해도 상관 없는건가요? (passage num을 낮추기 위해서요) 또 stock으로부터 꺼내진 cell을 몇번 정도 계대를 해주어야 seeding 이 가능한건지 알고싶습니다
회원작성글 똑똑해지자  |  01.31
Q. cell stock 시점 질문
계대 후 cell stock을 하려고 하는데 어느정도 cell이 차야 stock하는게 좋나요? cell들은 다 붙었는데 아직 뜨문뜨문해보입니다. 지난번 계대에서는 꽉 채울 때까지 있다가 계대한건데 꽉 채워야 stock하기도 좋나요?  또 이번에는 penicilin을 첨가한 media로 배양하였는데 그럼 기준이 또 달라질까요? 답해주시는 선생님들 항상 감사합니다. 
회원작성글 앞구르기  |  01.30
Q. 세포해동
학부생입니다. ㅜㅜ오늘 교수님이 세포 해동 하시는걸 보여주셨는데, 너무 훅 지나가서 스스로 정리 해봤습니다. 이상하거나 틀린 부분이 있나요? 1. HaCa T 8&9 cell을 tank에서 꺼낸다 2. water bath에 packing이 물에 잠기지 않게 cell을 녹여준다 3. media 소분 해주기50ml 4. HaCa T세포 와 media를 15ml 튜브에 1:3 or 1:4로 넣는다 - cell stock 안에 보존액과 불순물을 washing 하기 위해 (배지 만들기)DMEM 에 fbs 10퍼 항생제 1퍼 45:5:0.5 4. 세포를 푼 15ml 튜브를 centrifuge 돌린다. 1분 1500rpm 5. 그동안 배양할 dish에 해동날자와 세포이름 계대횟수를 적어준다. 6. 15ml 튜브를 suction 하여 cell만 남긴다.(거품부터제거한다) 7. pellet에 media를 넣어 섞어준다. 8. dish에 9ml media 를 넣는다 9. 7에서 섞은 cell들을 1ml dish에 옮긴다 10. 뚜껑에 튀지않게 잘 섞어준다
회원작성글 몽몽뭉뭉  |  01.27
Q. cell split 시 자주 media change 해주는 것이 좋은가요?
cell split 시 overnight이나 6시간 정도 incubator에 놓은 뒤 떠있는 불순물을 제거하려고 media change를 해주고, 다음 계대나 실험 전까지 incubator에서 배양하는 것으로 알고 있습니다.  목요일에 cell split 하였고, overnight 후 금요일 아침에 media change를 해주었는데, 토요일이나 일요일에 다시 media change를 해주는 것이 좋나요? 다음주에 당장 cell을 쓰지는 않고, 당분간은 계속 계대할 것 같습니다. 미천한 학부생에게 가르침을 주십시오
회원작성글 앞구르기  |  01.27
Q. cell counting 하는법
세포 형광 염색 없이 cell counting 하는 경우는 없나요? 찾아보니까 imagej로 쉽게 counting 하는법은 많이 나오는데 형광 염색된 cell만 있고 실험 전 cell density를 맞출때 세포 수를 확인하는 방법이 따로 있는건가요?
회원작성글 멍게  |  01.27
Q. 첫 cell culture 첨부파일
안녕하세요 cell culture 처음 해보는 학부생입니다.  HEK 293 cell을 처음 연습용으로 키우고 있습니다. passage 14때 media 색깔이 노란색으로 변해서 media 교체만 해줬고 다음날 확인해보니 육안으로 둥둥 떠다니는게 보였습니다. 현미경으로 보니 저건데, 단순히 contamination된건지, 아니면 다른 뭔가 있는 건지, 저게 뭔지 알고 싶습니다... 감사합니다. 
회원작성글 빵싷  |  01.26
Q. 골수 그람염색시험시 배양배지
안녕하세요   골수 (bone marrow) 그람염색을 진행하는데, 프로토콜에 고체 배지에서 배양한 콜로니를 사용한다고 되어있습니다. 어떤 배지를 사용해서 몇일 정도 배양이 필요한가요?   콜로니따서 바로 슬라이드 글라스에 바르고 염색시약과정 진행하면 되는건가요?   답변부탁드립니다...!  
회원작성글 척척척척  |  01.26
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