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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Viability
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Q. 농도계산
함량이 30mg인 약물을 100mM으로 stock시키려면 약물 3g넣고 용매에 녹이면 될까요..??
회원작성글 엄청난초짜  |  09.18
Q. 같은 cell수, 다른 O.D 차이 (MTT 실험)
RAW 264.7 cells로 MTT 실험 중에 있습니다. 24well 에 seeding 을 할 때,  40 generation의  cell로 1*10^6으로  셀을 깔았을 때, O.D 값이 1.5 정도 나왔다면, 15 generation의 cell로 같은 농도로 깔았는데 O.D 값이 0.8 정도 나옵니다.  같은 농도인데도 달라지는 이유가 뭘까요?   참고로 15 generation은 계대배양을 2번 정도 만 진행한 상태 입니다. 아직 안정화가 되지 않아 그런 걸까요?
회원작성글 nowthinkin..  |  09.17
Q. beta-amyloid 실온 보관
안녕하세요,, 전문가님들,,, beta-amyloid 1-42로 MTT 실험을 해야 하는데 만약에 Aβ stock이 냉동보관이 아닌 실온에 오랫동안 보관이 되어있었다면 Aβ의 활성도가 많이 떨어진 상태일까요..? 약 6일 정도 실온에 나와있었던 상태입니다.. 혹시 관련 논문이나 해당 내용에 대해 아시는 분 계시면 답변 부탁 드립니다,,ㅠ
회원작성글 tntn  |  09.13
Q. MTT 결과 해석 O.D값 해석해 봤는데 여러분의 의견은 어떠신지../ 반복, 재현성 확인 첨부파일
MTT 셀시험 엑셀로 O.D값 정리한 값입니다. 재현성을 확인하기 위해서, 4번 24well plate로 cell viability를 확인을 하는 것을 총 두번 진행했습니다.(그림은 4개 plate O.D 값과 % of normal 이며, 두번 재현성 확인을 한것중에 한번만 확인한 값 입니다. 둘다 경향성이 같아, 하나의 값만 올렸습니다.) 1번 plate (가장 왼쪽의 O.D 값과 % of normal) 값을 보면 다른 plate대비 높은 것을 확인할 수 있습니다. 이유를 생각해보니,  seeding 과정에서 cell suspension을 충분히 섞지 않아서, 셀이 뭉친 부분이 있어 셀의 농도가 다른 plate대비 높게 제작이 되었거나, 그 이유가 아니면 treatment 과정에서 가장 먼저 샘플+배지가 접하게 되긴 하는데,, 그래봤자 다른 plate와 treatement 2초 차이인데,,  시딩의 문제가 가장 큰 이유일까요? 근데 여태껏 시딩의 문제가 없었고, 4plate 재현성을 확인해보니 똑같히 첫번째 plate가 cell viabilty가 높습니다...
회원작성글 nowthinkin..  |  09.08
Q. Raw 264.7 cell viability 첨부파일
Luteolin을 1,5,10μM로 희석해서 사용하였고 메디아로 녹였습니다. NO에서는 경향이 나오는데 MTT에서는 무슨 이유인지 계속 cell이 죽거나 독성이 나오는데 이유를 모르겠습니다ㅜㅜ 그래프는 LPS가 100이며 그 기준으로 독성퍼센트가 나오도록 만들었습니다 현재 그래프에서는 LPS조차 완벽하게 100까지 올라가지 않는 것으로 보이는데 파이펫팅의 문제인 것 같기도 하고 용매나 LPS의 문제 같기도 하지만,, 함께 같이 진행한 모든 플레이트는 MTT가 저렇게 같은 경향으로 나타납니다 같은 실수를 하고 있는 것 같은데 잘 모르겠어요ㅠㅠ 사용하는 배지의 FBS 함량도 바꿔보았고, LPS도 새로 만들어서 사용했으며, 스탁도 최근 것 중 상태가 좋은 것으로 풀었는데 계속 독성이 나오네요
회원작성글 머드라  |  09.04
Q. cell seeding 이게 맞나요?
Cell seeding 시 세포수를 구하는 것에 대한 질문입니다. 학부생이라 이걸 제대로 이해한 건지 아닌지 확신이 들지 않아서요. 예시)1. 96well plate에 1x10^4cell을 seeding 할 겁니다. 저희는 96well을 전부 쓰지 않을 거고 96well 중에 7well에만 seeding을 할 예정입니다. 그러면 필요한 cell의 개수를 구할 때 96x10^4, 7x10^4중 어떤 식으로 계산해야 하나요? 2. 필요한 cell의 부피를 구하고자 합니다. 1ml당 10^3개의 세포가 있다고 가정합니다. 비례식을 세워보면 ?(96인지 7인지 모름)x10^4:xml=1x10^3:1ml이죠? 여기서 x값을 구하면 총 필요한 cell의 부피가 나오게 됩니다. 그리고 배양액의 부피도 구해야 하는데 7well(각 100ul)이니 700ul가 필요한 것이 맞나요...?  3. 필요한 세포 부피가 3ml, 필요한 배양액 700ul라고 가정한다면 세포와 배양액을 섞어놓은 tube에 배양액 700ul까지 더 넣어서 잘 희석한다음 seeding을 하면 되는 것인가요?   
회원작성글 오이  |  09.02
Q. sh-sy5y mtt assay 보라색 포마즌 딸려올라와요 첨부파일
안녕하세요. SH-SY5Y cell로 cell viability를 확인하고자 MTT assay 실험을 하고있습니다. 문제는 보라색 포마즌까지는 잘 형성하였는데, mtt 시약을 제거할시에 포마즌이 딸려올라갑니다 ㅠㅠ (벽면에 대고 하는데도 빨려올라와요) mtt 반응시간은 3시간하고, 육안으로도 포마즌이 떠있는게 보입니다. SH-SY5Y cell에 아무것도 처리하지 않고 24시간, 48시간을 길러 O.D값을 측정하려고하는데, 포마즌이 딸려 올라가서 측정이 정확히 되지 않습니다. plate에 시딩했을 시에 잘 붙어있는데도 불구하고 포마즌이 딸려올라옵니다 ㅠㅠ 96well spl 제품 30096 사용 중입니다. mtt는 10x mtt ( 5mg/ml)를 만들어 1x로 희석(0.5mg/ml)해서 사용합니다. 어디서 문제점이 있을까요..ㅠㅠ 세포가 문제가 있는 걸까요,, plate 코팅이 문제일까요. 선생님들 도와주세요..
회원작성글 힝아  |  09.01
Q. CCK8 assay관련 질문
Drug처리하고 cell viability를 cck8 assay를 통해 측정하려 합니다. 약은 dmso에 넣어 녹였습니다. 지금 2^5~2^-3까지 media에 희석해서 1ml만든 후 cell에 처리하였습니다. 그리고 비교대상으로 dmso를 처리하려하는데, 이때 만약 drug 2^5, 1ml만드는데 약물을 12ul사용했다면 비교대상으로 세포에 dmso를 처리할 때도 12ul를 넣어줘야되는지, 아니면 dmso도 2^5짜리 만들어서 세포에 처리해야되는지 잘 모르겠습니다. 주변에 물어볼 사람이 없어서요...알려주실 수 있을까요?
회원작성글 인생힘들다  |  08.30
Q. MTT assay Proliferation과 cytotoxicity 질문
안녕하세요. 도통 모르겠어서 선배님들의 의견을 구하고자 글올립니다. 항암 치료제 연구 과제를 진행하기 위해 먼저 기존에 알려진 대조화합물로 MTT assay 진행중에 있습니다. Reference 논문에서는 해당 대조화합물이 증식억제효과가 있어서 고농도에서 최대 50% 증식 억제효과가 있다고 보고되어 있습니다. (그래프 결과도 있구요..) 하지만, 직접 실험을 진행해보니 viability가 13%정도로 감소되고 실제 세포를 봤을 때도 죽은 세포가 많았습니다. 해당 논문이랑 실험조건을 동일하게 진행하였는데, 왜 결과가 다르게 나올까요..? (Final DMSO 0.4%, cell 2000cell, 약물 처리 후 96h incubation) 다만, 차이가 있다면 실험 kit가 다르긴 합니다. 제 생각에는 이 부분이 영향을 주진 않을 것으로 생각되는데.. 혹시 이 키트 차이로 이런 결과가 나오는 걸까요? reference 논문 : CellTiter Glo 진행한 실험 : MTT Assay  
회원작성글 나라라랑  |  08.29
Q. 1μmol에서 200μmol로 희석
1μmol에서 200μmol로 희석하려면 어떻게 희석을 해야할까요ㅜㅜ
회원작성글 머드라  |  08.27
Q. MTT assay 및 96 well plate seeding
HEI-OC1에 약물처리 12시간 후, Hydrogen peroixde(H₂O₂)를 고농도로 1h만 처리하여 MTT 2h 을 통해 cell viability를 확인하고 있습니다. 약물이 H₂O₂에 대한 효과가 있는것으로 예상되는데, 값이 일정하지 않아 질문드립니다. 1. 약물에 대한 효과가 보일 때/보이지 않을 때엔 어떤것이 문제점인지 2. seeding에 문제가 있다고 한다면, 96well plate에 seeding할 때 어떻게 해야하는지 궁금합니다! - plate와 90도로 빠르게 seeding하고 마지막 4방향으로 살살 흔들어주기 - well 벽면에 처음엔 천천히~(well의 1/3정도 찼을땐) 빠르게 seeding하고 크게 T자로 천천히 흔들어주기 이와 같은 방식으로 seeding을 했는데도 간혹 차이를 보이는 경우가 있어 질문드립니다
회원작성글 눌  |  08.25
Q. Raw 264.7 NO assay
안녕하세요 실험초짜입니다ㅜㅜ NO 실험을 진행했고 Luteolin으로 진행을 했는데 항염증 실험이어서 농도가 높아질수록 NO는 감소해야한다고 알고 있습니다 하지만 LPS가 100퍼센트라고 했을 때 가장 낮은 농도에서 40퍼센트밖에 올라오지 않는데 이유를 모르겠습니다ㅜㅜ
회원작성글 머드라  |  08.25
Q. MTT assay
제가 ab211091제품의 MTT kit를 사용하려고 합니다. 그런데 reagent와 solvent 두 가지 용액이 있는데 조성이 안 적혀 있어서,,, 문의합니다. Protocol에는 1. Cell seeding 2. Treatment 3. Discard media and add SFM and add mtt reagent 4. Add solvent 인데요,,, 그냥 cell culture media에 mtt reagent 넣고 suction후에 solvent넣으면 안되나요…? 조성이 안적혀 있어서,, 모르겠습니다. Kit쓰시는 분 있으신가여??
회원작성글 나다니95  |  08.22
Q. MTT assay protocol
안녕하세요. 물질의 보호효과를 보기위해서 pretreat 개념으로 약물 처리 후 독성을 쳐서 cell viabilty를 확인하고자 mtt assay를 진행 중에 있습니다. 여러 프로토콜을 찾아보다가 저희 실험실에서 사용되어온 프로토콜이랑 달라 여쭤봅니다. 저는 cell seeding 24hr뒤 약물 처리 시간 지난다음 독성물질 24hr을 처리한 뒤 MTT 시약을 처리하는 데요. MTT 시약 5mg/ml 을 pbs에 녹인 후 1/10 dilution(0.5mg/ml) 된 mtt 시약을 처리합니다. 대부분의 프로토콜에서는 미디어 제거 후 페놀레드가 없는 미디어 90ul+mtt시약(5mg/ml) 10ul 처리하던데 저희 방에서는 페놀레드가 없는 미디어 대신 pbs에 희석하여 처리하는데 괜찮은 걸까요? cell culture medium에 희석해서 사용해야하나요? 정리하자면 저희방에서는 0.25g/50ml (10xmTT시약)이라 칭하고 1x로 희석하여서 바로 처리하는데 그 희석 용액이 pbs인데 맞는 건가 해서요. ㅠㅠ cell culture medium을 사용해야한다면 MEM gibco 제품 사용하고있는데 혹시나 MEM phenol red 없는 제품 사용하시는 분 계시면 답변 부탁드리겠습니다.
회원작성글 힝아  |  08.10
Q. live imaging
APC gene mutation 된 MACF10를 ctl 10A와 비교하여  b-catenin 의 nuclear translocation을 confocal로 live image 찍으려고 합니다. cell이 살아 있는 상태여야해서 fix는 안될 것 같은데 Ab가 nucleus안까지 들어갈까요? cell에는 damage 주지않으면서  Ab를 넣는 방법 뭐가 있을까요?   의견 부탁드립니다.
회원작성글 새슬  |  08.08
Q. melanoma cell culture 중에 찍은 사진입니다 첨부파일
흰색 가느다란 줄 같은게 보이는데 문제가 있는건가요? 배지를 갈아줘야하나요?
회원작성글 단치  |  08.06
Q. cell density 와 시약의 독성관련문의
96 well plate에 같은 양의 cell을 seeding 하고 농도를 다르게 해서 시약을 처리하였습니다.  plate를 한개는 10,000 cells/well, 다른 한개는 100,000 cells/well로 10배 차이나게 해서 두 plate를 깔고 시약의 처리농도는 각 plate마다 같게 하였고 24시간 처리 후 CCK-8 assay를 하였습니다. 시약의 농도가 높아질 수록 viability가 감소경향을 보이는 것 같기는한데요,  문제는 cell이 10배 높게 seeding 된 plate에서 viability 감소경향이 더 가파릅니다.  10,000 cells per well plate에서는 비처리군과 가장 높은 처리군의 차이가 10%가 안되는데, 100,000 cells per well plate에서는 30% 정도 차이가 날정도로 가파르게 감소합니다.  제가 생각할때는 cell이 10배나 차이가나는데 만약 시약에 독성이 있다고 하더라도 cell이 더 적은 쪽에서 급격한 감소를 보일 것이라고 생각했는데 그반대라 오히려 납득이 안되서요..   이런경우가 가능할지.. 혹시 아신다면 왜 그런지 알려주실 수 있으실까요..  
회원작성글 판돌판돌  |  08.04
Q. LIVE/DEAD™ Cell Imaging Kit 염색 문제 첨부파일
LIVE/DEAD™ Cell Imaging Kit 이용하여 셀 염색 진행하고 있습니다.   petri dish에 cell suspension (DMEM) + 염색약  -- 1:1 15분 염색 후 관찰하는데, live/dead 색이 동시에 보이는 세포가 존재해서요.   dead cell 같은 경우에, raw data에서 너무 보이지 않아 형광 이미지가 잘 보이도록 스케일을 조절해준 결과입니다. 그 스케일을 live cell의 이미지에도 적용했습니다! (HaCaT cell 입니다!)
회원작성글 motherscof..  |  07.28
Q. H2O2 세포 보호능 볼때 CTL 의 생존률이 계속 달라지는 이유
현재 SW1353 세포에 H2O2 와 샘플을 처리해서 샘플의 H2O2에 대한 보호능을 보고 있습니다. 그런데 문제가, 같은 농도의 H2O2를 같은 시간 처리해도 CTL 군에서 어떨땐 20% 정도의 생존률이 나오다가 어떨땐 40% 대의 생존률이 나오는 등 재현성이 잘 안나타나네요. 이런식이면 샘플의 효능 측정도 일정하지 않을텐데 말이죠. 이런경우를 겪어보신 분이나 원인을 알고 계신 분이 계실까요?
회원작성글 AGCT  |  07.27
Q. microplate reader로 흡광도 측정시
CCK-8을 이용한 cell viability 측정에서 microplate reader기로 흡광도를 측정하는데요. 적정 CCK-8 incubation time을 정해야 해서 연달아 찍어봐야 하는데 이럴때 뚜껑을 씌우고 reading 하면 안될까요? 이 실험만 하면 잠깐 열고 찍어도 되겠는데, 불행히도 같은 plate 내에 다른 실험군이 있어서 몇일 더 culture 해야 해서 가급적이면 뚜껑을 안열고 싶네유.. ㅠㅠ    
회원작성글 오구오구  |  07.27
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