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Q. 세포에 오일 샘플 처리 방법
안녕하세요 ! 선배님들 식물 종자유에서 세포 실험중 입니다. 항염증 (NO 생성 억제) 실험을 진행하고 있는데 샘플이 오일이라 DMSO에 녹여 사용하고 있습니다. 농도별로 샘플처리를 하였는데요, 결과가 자꾸 거꾸로 나옵니다. 저농도에서 NO 억제가 가장 좋게 나옵니다. 그리고 결과의 오차가 엄청납니다. 이유가 무엇인지 너무 궁금합니다. 오일샘플이라 잘 섞이지 않아서 오차가 큰건지.. 저농도에서 왜 활성이 더 좋은건지.. ㅠ 지금 반복실험중인데 할때마다 엉망이네요.  논문도 찾아봤으나 저같이 거꾸로 나오는 결과는 없고, 어떤 용매에 희석했는지도 나오질 않아 너무 답답해서 여쭙니다
회원작성글 쿠이크이  |  02.07
Q. 마우스 종양 생성 후 피하투여 관련 질문드립니다.
안녕하세요. 동물실험에 대해 공부하고 있는 대학생입니다.    대부분 논문에서 누드 마우스에 cancer cell을 피하투여해서 종양을 만들어 성장 시킨후, 약물을 투여합니다.    그런데, 이 약물을 투여할 때 피하투여 방식을 사용하게 되면 종양과 사이의 거리에 따라 약물이 작용하는 정도가 달라진다고 생각되는데, 대부분의 논문에서는 단지, 피하투여를 사용하였다. 이런 말만 쓰여 있어서 질문 드립니다.  약물을 피하투여 할 때, 대부분 어떤 방식으로 피하투여 위치를 정하시는지 궁금합니다..  관련 논문이나 참고할 만한 논문도 공유 부탁드립니다!! 감사합니다. 
회원작성글 익명09  |  01.31
Q. ATP bioassay 과정에서의 stability에 관해 질문있습니다!!
cell을이용한 atp bio assay를 계획중입니다! cell이 죽게 되면 atp가 세포질로 나와 급격하게 분해가 이루어진다고 알고 있습니다.   cell viability 측정을 위해 cell lysis buffer를 통해 세포 내 atp를 추출하여 atp를 측정하고 하는데 이 때 추출된 atp도 급격한 분해가 이루어져서 측정에 영향을 미치는지 궁금합니다.
회원작성글 aqwasd  |  01.27
Q. ATP bioassay에 관해 질문이 있습니다!!
안녕하세요 지금 학부 4학년으로 대학원 진학을 앞두고 실험실 학부연구생으로 있습니다. 저희 실험실이 바이러스를 주로 다루고 있어서 ATP bioassay를 처음으로 구축하고자 합니다. 키트는 thermo ATP determination kit(A22066)을 추천받았습니다. ATP 측정을 위해서는 cell 안으로 luciferin과 luficerase가 들어가거나 cell을 lysis해서 luciferin과 luficerase가 반응을 해야 발광을 측정할 수 있다고 생각이 드는데요.  현재 제조사의 protocol을 읽어보니 그런 과정에 대한 설명이 없는거 같아 질문드립니다. kit content) 1. D-luciferin 2. Luciferase: Tris-acetate, ammonium sulfate, glycerol, ethylene glycol 3. Dithiothreitol(DDT) 4. ATP 5. 20X reaction buffer: Tricine buffer, MgSO4, EDTA, sodium azide   이렇게 조성이 되어있는데요 혹시 content 중에 cell 용해나 막 유입에 관한 재료가 있는건지 아니면 제가 방법 자체를 잘못 이해하고 있는건지 궁금합니다!
회원작성글 aqwasd  |  01.21
Q. Ez cytox 흡광도
ez cytox 권장od값이 450nm인데 570nm로 찍었습니다. ㅜㅠ 결과 차이가 많이 클까요?
회원작성글 길을잘못든노예  |  01.06
Q. 알츠하이머실험관련 oligomerization실험 방법 문의 입니다.
sh-sy5y 세포로 oligomer화 시켜서  샘플 투여후 효능확인 실험을 하려고 계획중에 있습니다.  제가 제대론 계획을 하였는지 궁금하여 여쭙니다! 1. 먼저 cell seeding-> differentiation-> oligomerization-> cell viability순이 맞을까요?  2. 세포독성은 분화 올리고머화와 상과없이 진행하는것인지 아님 올리고머화 시킨후에 보는것이 맞을지...(이게 가장 큰 고민입니다) 3. aggregation 시킨 다는것이 알츠하이머 실험에서 어떤 의미를 뜻하는것일가요ㅠ?.... 4. oligomer화 시킨후엔 보통 어떤 실험법으로 확인을 하시나요...?ㅠ 알츠하이머 실험에 관련해선 석사때 해보지도 못한 주제인데..회사에선 알아서 진행해보라고 하셔서,, 한달동안 고민하고 ....ㅠㅠㅠㅠ혼자 하려는데 너무 막막해서 올립니다 ㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 지망이  |  01.04
Q. MTT assay 중에 cell seeding
안녕하세요 이번학기 첫학기를 마치고 개인과제와 실험실 과제등을 수행하면서 물질 screening 업무를 하고있는데   MTT 처리과정에서 계산오차로 96well 5x10^3 깔려야하는게 8x10^4으로 깔려버렸습니다.  seeding 오차가 커서 걱정인데 plate를 버리고 다시하는게 좋을까요 아니면 screening이니까 그냥 해보고 ros때 잘하면 될까요 ㅜㅜ  
회원작성글 길을잘못든노예  |  2022.12.29
Q. Amyloid beta 투여하여 cell viability실험을 하려고합니다.
안녕하세요  알츠하이머 관련 실험중에 있습니다.  Amyloid beta 투여하여 cell viability실험을 하려고합니다. amyloid beta는 rpeptide에서 구매하였는데요 HFIP 전처리가 되지 않은 것으로 구매 하였습니다( 전처리가 된게 있는줄 모르고 구매해버렸어요ㅠㅠ 회사에서 혼자 프로토콜 셋업하고 하려니,,,진짜 머리가 ㅠㅠ참고로 전 석사입니다..) HFIP에 녹일때 (HFIP는 액체 상태로 왔습니다) peptide의 분자량에 맞춰서 몰농도 계산후 녹이면 될까요...?  실험순서로는 HFIP에 녹인후 -> speed vaccum-> D.W혹은 DMSO에 녹이기( 논문에는 DMSO에 녹이라고되어있는데 독성이있는데 괜찬을까요..?)
회원작성글 지망이  |  2022.12.29
Q. LDH assay 진행시 cell only의 cytotoxicity
안녕하세요. 현재 LDH assay를 진행하고 있는 연구원입니다. LDH assay를 처음 진행해보는데 low control 에서 cytotoxicity가 나와서 의아해서 질문드립니다. 1. 10X lysis Buffer (=tritonX, high control) 를 처리한 control 2. Cell only 3. blank  4. 농도별 transfection 실험군   이렇게 지정하여 triplication 으로 실험을 진행하였는데, cell only에서 cytotoxicity가 보여서 의아해서 질문드립니다. 1. cell only에서 왜 cytotoxicity가 보이는지, 2. cell only에서 cyrotoxicity 를 최소화하려면 well desing을 어떻게 재설정해야할지   알려주시면 감사하겠습니다....    promega의 CytoTox96 Non-Radioactive cytotoxicity Assay 제품을 사용했고, 프로토콜에 적힌대로 진행하였습니다.  
회원작성글 ninegold  |  2022.12.19
Q. 샘플 처리 전 pbs 워싱
Cell을 seeding 하고 나서 24 시간 뒤에 샘플을 처리하는데,  샘플 처리 전에 PBS 워싱을 하는 것이 더 좋을까요? 
회원작성글 오이가싫어  |  2022.12.08
Q. EO이 DMEM에 잘 녹이는 방법
안녕하세요    ESSENTIAL OIL(=EO)로 실험을 진행중인 대학원생입니다. EO와 DMEM을 녹이려고 하니 잘 녹지가 않습니다. 관련 논문을 찾아봐도 자세히 어떠하다 나와있지도 않습니다.     DMEM은 수용성일테고, EO은 지용성일텐데 그렇다고 계면활성제를 임의로 넣을수도 없고 어떻게 해야할까요?    
회원작성글 AD석사생  |  2022.12.08
Q. Working volume
Cell을 카운트 해서 500 ul 씩 6 well에 넣을때,  6 well에 working volume이 보통 2 ml이라고 알고 있는데,  혹시 6 well에 순수 media를 2 ml 넣고 cell을 500 ul씩 분주해도 되나요? 
회원작성글 오이가싫어  |  2022.12.06
Q. MTT assay에서 IC50값 차이
안녕하세요. 셀 실험관련하여 궁금한점이 있어 질문드립니다. 저희는 실험실에서 보통 암세포주를 이용하여 MTT assay를 진행하고 프리즘을 이용해 IC50값을 구합니다. 제가 진행한 실험에서 A (free drug, 제형아님)와 B (약물이 포함된 제형)의 IC50값이 각각 2673 nM, 1544 nM이 나왔는데 값으로만 볼때는 1.7배 차이로 차이가 얼마 나지 않아 보였습니다. 그런데 통계분석을 돌려보니 유의미한 차이가 있다고 나왔습니다. (저는 당연히 유의미한 차이가 나타나지않겠지...라고 생각했습니다) 교수님께서는 cell 실험했을 때 IC50값이 10배정도 차이나는 거는 큰차이가 없는거다 그정도 차이는 괜찮다라고 하셨는데 통계분석해보니 차이가 있다고 나와서 어떻게 해석을 해야할지 의문입니다...   보통 셀실험진행하고 비교군 두개정도 IC50값 비교를 할때, 몇 배정도 차이가 나야 이정도는 진짜 차이가 나는거다 라고 판단할수있는건가요?? 열배정도 차이는 정말 별차이 없는건가요? 답변주시면 감사하겠습니다ㅠ
회원작성글 대학원의 노예ㅠ  |  2022.12.05
Q. 동물세포주 보관온도에 대한 정보를 공유부탁드립니다.
동물세포주 보관시 LN2 탱크 Vapor 상태로 보관을 하게되는데요 LN2 탱크의 제조사도 -180ºC로 Vapor공간의 온도가 유지된다고 설명하고 관리되어오고 있는 기준도 -180ºC로 관리를 하고 있습니다. 세포주 용기 제조사에서는 오염이나 기타 문제로 인해 Cryogenic vial을  액체질내 내에 보관은 권장하지 않으며, 액체질소탱크 제조사 역시 액체질소내에 제품 보관하는 것을 권장하지 않습니다. 그렇다면 동물세포주 보관온도는 몇ºC에서 보관하는것이 좋은지, 그에 따른 근거 기준은 무엇인지 궁금합니다. 알고계신분이 계시다면 알려주세요. 많은도움이될것같습니다. 감사합니다.
회원작성글 ASJN  |  2022.11.24
Q. amyloid beta oligomerization
안녕하세요 amyloid beta peptide (1-42) 을 가지고 cytotoxicity를 실험하는데 혹시 조언을 구할수있을가요 ㅠㅠ 일단 data sheet에 따르면 0.1M acetic acid에 녹인 후, PBS나 다른 buffer로 희석해서 사용하라고 되어있습니당 amyloid beta는 일단 oligomer한 structure로 만들어준 후,  cell에 treat해야 할거 같은데, acetic acid에 녹인 후에는 어떤 방법으로 oligomerization시켜야하는지 사용해보신 분 또는 비슷한 실험을 해보신 분 있따면 조언을 구하고 싶습니다 ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 Astroglia  |  2022.11.15
Q. 세포에 dexamethasone 처리하려고 하는데 녹지 않아요ㅠㅠ
안녕하세요 c2c12 세포에 dexamethasone (sigma D1756G) 처리하려고 하는데 잘 녹지 않아 걱정입니다ㅠ 먼저 1M stock in DMSO, ETOH로 해서 잘 녹였습니다. 농도 희석은 PBS로 진행하였는데 이때 잘 녹지 않고 덩어리지면서 떠다니더라구요.. 저와 같은 실험을 하시거나 이런 경우에 어떻게 하셨는지 너무 궁금합니다ㅠㅠ알려주시면 정말 감사하겠습니다!
회원작성글 ㄹㄹ  |  2022.11.15
Q. ELISA reader 기 파장좀 질문드려요
assay 키트 설명서에서 파장 450-500nm, reference 파장은 650nm 로 측정한다고 되어있습니다.. 리더기에는 reference 파장을 세팅하는게 없는거 같습니다만...그냥 파장범위로만 놓고 측정하여도 될까요?~  
회원작성글 pretty  |  2022.11.08
Q. 0.2% DMSO 농도에 약물 녹이기
0.2% DMSO 만드는 법과 여기에 약물(powder) 녹이는 방법 알려주세요.
회원작성글 SoliDeo  |  2022.11.07
Q. 항염활성에서 Positive control 질문입니다.
  식물 추출물로 항염활성 레시피대로 처음 실험을 하였는데 궁금한 점이 생겨서 글을 올렸습니다. LPS로 염증 유도하여 NO생성 함량 측정하면서 Positive control로 Quercetin 25uM로 사용하였는데 여기서 농도 설정의 기준이 무엇인지 궁금해졌습니다.. 퀘르세틴이 플라보노이드 화합물 중 하나로 염증 반응에서 중요한 역할을 하는 효소와 유사한 작용을 함으로써 항염활성이 있다 학술지에서 확인했습니다. 근데 농도는 왜 25uM으로 보통 사용되는지 궁금합니다.. 학술 검색해서 잘 안나오네요..ㅠㅠ 잘아시는 분들 답변 부탁드립니다..
회원작성글 Roming  |  2022.11.03
Q. cck-8 assay 질문 있습니다.
hacat cell에 물질을 쳐서 독성평가를 할 예정인데 궁금한점이 있습니다.. 맨 처음에 96well에 DMEM+FBS 배지의 세포를 깔고 24hr 뒤 물질을 칠 예정인데, 보통 약물을 칠 때 다른 성장인자의 효능을 배제하기 위해 FBS없이 free medium상태에서 보지 않습니까 그렇다면 약물을 치기 전에 wash를 3번 정도 해서 FBS성분을 없앤 뒤 free media+약물 의 배지로 교체를 해줘야 하나요? 이 과정 동안 세포에 데미지가 가거나 loss가 생길 것 같아 질문드립니다. 아니면, 처음부터 세포를 seeding할 때에 FBS가 없는 배지 상태로 깔아야 하나요.. 최대한 suction 과정은 피하고 싶어서 질문드립니다. 다르게 생각하면, 약물의 독성평가이니 FBS유무는 실험적으로 무시해도 될 만한지 혼란스럽네요 조언 부탁드립니다 감사합니다 ^^
회원작성글 12312  |  2022.10.24
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