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BioLab 이은열 교수
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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
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Q. 혈청검사 시 got gpt 첨부파일
안녕하세요 논문을 공부하는 학부생입니다  이 논문에서는 어떤성분이(rg-2)의 항암효과를 나타내는 논문인데  이 혈청검사를 통해 무엇을 나타내는지 모르겠어요 논문 번역을 봐서는 이 성분이 독성이 없다는 것을 나타내는 것 같은데  그거뿐인지 궁금하기도 하고요  첨부그림은 유방암세포를 누드마우스에 이식시켜서 종양으로 키운다음  그 쥐의 혈청을 조사해서 나타낸 그래프입니다   
회원작성글 쿠키크림  |  09.26
Q. Autophagy는 질병에 있어서 좋은건가요 나쁜건가요?
안녕하세요 너무 기초적인 질문일수도 있기는 한데 실험을 하다가 헷갈려서 질문드립니다 ㅠ 저는 어떤 toxic한 물질을 처리하고 치료제를 주었을 때 autophagy가 증가함으로써 toxic 물질이 감소하고 치료효과를 보인다 라는 가설을 가지고 실험을 하고 있습니다 그런데 어떤 논문에서는 질병에서 autophagy가 증가하는 양상을 보이므로 치료제를 써서 autophagy를 억제시킨다 라고 이야기를 하더라구요 그래서 이autophagy를 어떻게 해석해야 하는지 궁금합니다 .. 저는 실험에서 autophagy 마커로 lc3를 보구요 치료제에 의해 Toxic 물질이 감소한 것을 western으로 확인한 후 lc3를 보았을 때 증가할 것이라는 예상결과를 가지고 실험하고 있습니다 . 다른 논문을 공부하다가 거기서는 또 lc3가 감소한게 좋은 것이라고 하길래 이해가 안가서 질문 드립니다 .... 답변 부탁드립니다
회원작성글 2밍  |  09.25
Q. ihc염색시 보이는 그림 질문 첨부파일
안녕하세요 논문공부를하고있는 학부생입니다  다름아니라 d,e,f그림을 보려고 하는데  실험은 종양조직을 가지고 세포사멸에대해 분석한건데 ihc그림에서 d에서 rb가 인산화 덜된것은 관찰이 되어서 e그래프에 저렇게 나온게 이해가 되는데  d그림에서 p-ampk가 분명 육안으로 4-oht, rg2를처리하면 줄어든것처럼 보이는데 그래프에서는 늘어났다고 보여서 제가 보는법이 틀렸나 질문드립니다. 
회원작성글 쿠키크림  |  09.22
Q. annecxin v apoptosis assay 첨부파일
안녕하세요  annecxin v를 이용한 apoptosis assay에서요 flowcytometry를 진행한다음 그래프에서 기준선을 잇는게 임의로 지정하는건지 궁금합니다. 사진의 빨간색 박스로 되어있는부분이 기준선입니다. 지금 annecxin v의 기준선은 10^4에 되어있는데요 다른 논문의 결과를 보면 10으로 되어있어서요...
회원작성글 까오낫  |  09.19
Q. HT22 cell에서 Glutamate 세포 사멸 유도 질문!
안녕하세요. 이제 석사 2학기 되는 대학원생입니다. 작년부터 올해까지 HT22 세포에 Glutamate로 세포 독성을 유도하고 있는데 계속 잘 안풀려서 여기에 질문 드립니다.   상황을 간략하게 설명드리면, glutamate는 sigma Cat.no 46912 제품을 사용하고 있습니다. HT22cell (LM001-05배지 사용)로 96-well, 60mm 모두 유도 해보았고, 여러 시도끝에 10mM이라는 농도도 잡았습니다. (처리할때는 serum free에 녹여서 10배 높은 농도로 처리합니다. (ex) final : 10mM이면, Treat : 100mM))   하지만 늘 Glutamate를 새로 만들고, 만드는 방식도 Glutamate양과 분자량 비율대로 계산해서 녹이고, 필터하고, 처리하는 방식인데 어떤날은 세포를 50% 죽이고, 어떤날은 10%도 안죽이고.... 하....   실험실 선배님들과도 이야기를 해보았지만 도저히 이유를 모르겠어서 올려봅니다. 혹시 제가 못보는 부분이 있다면 가르침 부탁드립니다...   긴 글 읽어주셔서 감사합니다!!   질문 요약 1. Glutamate의 HT22cell 사멸유도에서 주의해야할 점이 있나요? 2. 늘 같은 방식으로 Glutamate를 만들고 처리해도 유도되는 cell death의 %가 다른걸까요..?
회원작성글 두둘기  |  09.07
Q. Flow cytometry 관련 궁금한 점이 있습니다!
Apoptosis 유도 효과를 보기 위하여 Annexin V5/ PI staining을 진행하려고 합니다.  일단 샘플은 총 3개이고,  보정을 하기 위해 Non-staining, PI staining, Annexin V staining 을 따로 준비하고 PI + Annexin staining을 처리한 control, 물질 처리군 2개를 준비하였습니다.  Non, PI staining의 gain값 세팅 후에 Annexin V gain값 세팅 중 PI값을 좀 낮추고 PI + Annexin staining (control, 물질처리군 2개)은 무조건 gain값이 일정한 상태에서 찍는게 맞는거죠? 
회원작성글 카스테랑  |  08.25
Q. HEK293 cell 100pi dish에 배양 후 lysis했을 때 얻어지는 protein 양
안녕하세요 제가 분석화학 전공이라 세포를 키우는 쪽에 대해서는 잘 알지를 못하는데 HEK293 cell로부터 protein을 뽑아낸 후 digestion을 해야하는 상황입니다. 혹시 100 pi dish에 배양했을 때 lysis 후 대략 어느 정도의 protein이 얻어질까요..?   ㅜㅜㅜ 답변 주시면 정말 감사하겠습니다
회원작성글 요옹요옹  |  08.23
Q. Bcl-w
안녕하세요, Bcl-family에 대해 연구하고 있는 학생 입니다. ABT-263을 가지고 실험 중인데요 왜 Bcl-w는 사람들이 잘 연구하지 않을 까요,,? Bcl-2 and Bcl-xL은 많이 알려져 있는데 그만큼 Bcl-w는 많이 없습니다. 특이점이 있나요,,? 혹시 anti-apoptotic에 대해 연구중인 분들 답변해주시면 정말 감사하겠습니다.
회원작성글 나다니95  |  08.01
Q. u0126처리시 ROS 증가? 감소? 의문입니다. 첨부파일
안녕하십니까 1. U0126은 항산화 물질로 작용한다고 알고있었습니다. 하지만 밑에 논문에서 가져온 자료를 보면 U0126을 처리한 군에서 형광 세기가 강하게 나온걸로 보아 ROS가 대조군에비해 증가한걸 알수있는데요.. 그림 자료는 MCF7세포에 처리한 상황입니다.. U0126이 왜 이런 결과를 나타낸건지 알려주시면 감사하겠습니다.   2.그리고 NAC(N-acetyl cystein)과 U0126, LY294002를 처리시 ROS가 증가된다면 그 작용기전을 알려주시면 감사하겠습니다.   논문:Ginsenoside-Rg2 affects cell growth via regulating ROS-mediated AMPK activation and cell cycle in MCF-7 cells 
회원작성글 까오낫  |  07.25
Q. western blot 실험
한달차 학부연구생입니다. HCT116 Cell 에서 물질처리에 의한 Apoptosis에 대한 Western blot 실험을 진행하였습니다. P53, MDM2를 확인하였고 P53에선 변화가없었으며 MDM2에선 물질처리에 의해 감소하였습니다.  Control을 확인하였으나 과도한 Stripping으로 제대로 확인이 불가하였습니다. 그래서 P-P53(S15)와 P14ARF를 확인하였고 P-P53은 물질처리에 의해 감소하였다고 보이며 P14ARF는 원인은 모르나 밴드가 detection되지않아  Control을 찍어볼 예정입니다.    gene들이 제가 생각하던 것과 다르게 나타나서 너무 당황스럽습니다. Control을 제대로 확인할 수 없으니 실험을 다시 진행하는것이 맞는것인가요?
회원작성글 OPQ  |  07.23
Q. Primary chicken 근육줄기세포(Muscle stem cell) 상태 좀 봐주실 분 계신가요? 첨부파일
안녕하세요,   Primary chicken의 뒷다리 살에서 Isolation 후 preplating을 거쳐서 근육줄기세포를 획득한 후, 세포증식 및 세포분화 실험을 하고 있는 연구원입니다.   제가 알기로 해당 cell은 쭉쭉 길게 뻗는 cell shape이 이상적이라고 하는데, 제가 키우는 cell은 조금 잘려져 있는 모양이어서, 주위에 도움을 요청해보니 apoptosis 혹은 necrosis가 많이 일어났으며, 이는 세포 배양 시 오염 발생으로 인한 것으로 추정된다고 조언받았습니다. p/s. 세포배양액 : Ham'sF10 media + 20% FBS + 1% penicillin/streptomycin + 5 ng/ml FGF2 (성장인자)   1) 이러한 상태가 apoptosis/necrosis가 맞나요? 2) 사용 시약들은 all fresh하게 사용했으며, 실험시 늘 라텍스장갑과 알코올 소독을 습관화하고 있습니다. 그렇다면 인큐베이터 내부 오염이 가장 크게 생각되는 게 맞을까요?   전문가분들이 세포 상태를 봐주시면 크나큰 영광이겠습니다.   감사합니다.
회원작성글 하우아이  |  07.22
Q. elution buffer pH변화
안녕하세요, 단백질 정제하는 석사 1학기입니다. 제가 elution buffer 조성을 바꿨더니 sample buffer가 노란색이 되며 산성을 띄는것 같습니다. 기존 elution buffer 조성은 20mM Tris(pH 7.5), 150mM NaCl, 5mM MgCl2, 0.5mM DTT, 300mM Imidazole에서 20mM Tris(pH 7.0), 150mM KCl, 10mM MgCl2, 0.5mM DTT, 5% Glycerol, 300mM Imidazole로 바꿨습니다. 현재 하루 지난 elution buffer가 완전 갈색으로 바뀌었는데, 어떤 화학반응이 일어났는지 자문좀 구할 수 있을까요?ㅠㅠ Imidazole과 DTT와의 반응인건지, MgCl2와의 반응인건지 잘 모르겠습니다...
회원작성글 동성애는후천성  |  07.22
Q. LDH assay를 진행하려고 합니다
LDH assay를 진행하려고 합니다 (THERMO 제품으로)   처음해보는 실험인데, 이게 색깔의 변화를 보고 흡광도를 재는 실험이더라고요   제가 96well plate에서 키워서 진행을 하려고 하는데,   이럴경우 그러면 메디아의 색상이 중요한것 같아서    페놀레드를 뺀 메디아를 사용하는 것이 맞는지 문의 드립니다.   그리고 High Glucose, Sodium Pyruvate, L-Glutamine, Phenol Red가 원래 사용하는 메디아의 메인 조성입니다.   여기서 Phenol Red를 빼면 High Glucose, HEPES, L-Glutamine 구성으로 된 메디아 밖에 없는데 셀에 특별한 영향을 줄까요?  
회원작성글 호랑이라  |  07.20
Q. 암 관련 연구중인데 세포주 분양이 가능한지....
세포주 분양이 혹시 가능하신 실험실이 계신지... 계시면 혹시 세포주 분양을 해주실 수 있는지.. 알고 싶습니다.  breast cancer cell line, BT474, MCF-10A, BT-549 이중 한개라도 상관없으니 분양 가능하신 분은 답변 부탁드립니다. 
회원작성글 dental pha..  |  07.18
Q. active motif nuclear extraction kit
안녕하세요. 만들어 쓰는 버퍼로는 세포질-핵 분리가 잘 되지 않아 active motif 사의 핵 추출 키트를 주문했는데요, 이 키트 효율 괜찮나요? 예전에 다른 회사의 키트를 써봤을 때는 아예 분리가 안 되어서 이 회사 것도 분리가 잘 되지 않을까봐 걱정입니다.. 참고로 western blot으로 NF-kB 보고 있습니다.
회원작성글 <^^>  |  07.11
Q. desalting yield
desalting yield가 100% 넘어가는 원인에는 어떤게 있나요?
회원작성글 도리도리곰도리  |  07.11
Q. cell harvest cell 손실
안녕하세요 석사 1학기 대학원생입니다. Western blot 실험 준비중에 계속 cell 손실이 납니다.. Cancer Cell 깔고 24h 키운 후 약을 칩니다. 1, 2, 3, 4, 5, 6번이고 뒷번호로 갈수록 약을 늘려서 몇시간동안 키운뒤 cell harvest 합니다. 1, 2, 3번 cell들은 아주 잘 모여요. 그러나 4, 5, 6번 cell은 거의 안모입니다... 물론 cell 수는 모두 비슷합니다. 현미경으로 관찰 한 후 harvest해요.   cell harvest 과정은   1. media를 5ml tube에 담는다. 2. pbs washing 후 pbs도 5ml tube에 담는다. 3. TE를 넣고 2~3분 보관. 4. 5ml에 든 media +pbs를 well에 넣고 팁으로 cell을 모은다. 5. 다시 5ml 튜브에 넣는다. 6. centrifuge 1800rpm 3min  이때 너무 세게 돌려서 셀이 터져서 그런가 싶어 1700rpm으로 했으나 cell이 잘 안모여요... 약을 적게 친 애들은 여전히 잘 모이구요.  7. 펠렛 확인후 sup suction 8. pbs 1ml로 resuspention 9. centrifuge 13,300rpm 1min  혹시나 싶어 여기서 시간을 2~3min으로 늘려도 안모입니다.. 여기서는 거의 안보여요. 약을 적게 친 애들은 너무 잘 모입니다... 10. pbs suction   어느 부분이 문제일까요ㅠㅠㅠㅠ 박사님이 주신 protocol에서는 죽은 cell 까지 모을때는 1800rpm 으로 돌리랬는대 왜...약을 많이 친 애들은 안모일까요ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 헤우니  |  06.30
Q. apoptosis 관련 western blot 질문드립니다
안녕하세요 현재 암세포에 물질을 처치해 apoptosis 관련 밴드를 띄우고 있는 대학생입니다.  다름이 아니라, 제가 암세포에서 물질을 처치한 후 단백질 수거를 하기 전에 control 과 물질처치군을 확인했는데 확실히 물질처치군이 셀의 수가 적어보였습니다.(debris는 둘 다 비슷했습니다) 그리고 cell counting을 했을 때도 확실히물질처치군의 세포 수가 적었습니다.  하지만 cleaved parp 밴드를 띄우면 계속 control에서 apoptosis가 더 잘 일어난 것처럼 control이 더 진하게 나옵니다.  이런 경우 있던 분 있으신가요 ㅠ?
회원작성글 익명09  |  05.28
Q. Annexin V / PI or 7aad apoptosis 실험 질문입니다.
안녕하세요? 처음 질문 올려보는 석사 1년차 대학원생입니다. 다름이아니라 제가 FACS를 통한 Apoptosis 실험을 시작하고 있는데 도저히 답을 얻을 수 없어서 질문을 드립니다... 우선 cell line을 이용하여 Annexin V/PI or 7AAD staining을 하고 있습니다. 다만 약물을 treatment하지 않은 DMSO만 처리한 control cell 에서도 FITC staining이 확연하게 관찰되고, 심지어 DMSO를 처리하지 않은 live cell에서도   Annexin V-FITC가 염색이 됩니다... FACS기기는 Beckman Coulter cytoflex를 사용하고 있으며 Annexin-V 및 Annexin-V binding buffer, cell staining buffer는 모두 Biolegend 제품을 사용하고 있습니다. adhesion cell을 수거할 때 Trypsin을 이용하여 harvest하는데 harvest직후 측정해보면 dead cell population이 심각하지는 않지만, cell staining buffer로 2회 wash 후 Ab를 처리하여 측정하면 FSC SSC에서 Dead cell population이 Live cell, Dead cell 모두에서 동일하게 측정됩니다ㅠㅠ cell line을 바꿔도 비슷하게 측정되어, 왜 live cell에서도 Annexin V-FITC positive하게 나오는지 해결 방법은 어떻게 해야하는지 여쭤봅니다.. 가능한 모든 경우의 수를 측정해보았지만 해결이 되지 않습니다ㅠㅠ 고수님들의 조언 부탁드립니다...   사진은 순서대로 어디서나 두개의 population을 보이는 cell line들.. unstaining 대비 모두 FITC positive 하게 나타나는  cell 들 마지막으로 Live cell에서도 모두 positive하게 나타나는 cell 들 입니다ㅠㅠ  
회원작성글 Jellyjaele..  |  04.12
Q. cell wall 관련 실험
cell wall을 잠깐 물리적으로든 효소로든 열어서 약물이 들어가게 하고 다시 닫히게 하는 그런 방법은 아직 없나요…? lysis enzyme을 써버리면 세포가 그냥 죽어버리고.. 다른 방법은 없을까요
회원작성글 미유미유  |  04.07
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