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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Differentiation/Proliferation
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Q. MC3T3-E1 분화 질문드립니다!
안녕하세요. 요즘 실험 열심히 배우고 있는 학생입니다, ㅜㅜ 제가 골세포 분화 실험은 처음해보는데, 연구실에 연구원이 저 한명이라 물어볼 곳이 없어 여기 질문 올립니다.   보통 분화 실험 할 때 조건을 간단하게 적으면 - 24well plate - 5*10^4 cell seeding - 24hr 후 분화유도배지로 교체 - 2~3일 마다 배지 교체하며 2주정도 배양 이렇던데 그러면 저 정도 cell양이면 3일만 지나도 full density가 될텐데 2주동안 계속 subculture 없이 배지만 갈아주면 cell이 미어터지지 않나요? 원래 분화실험 할 때 그 정도로 full density로 진행 하는것인가요...?    기초적인 질문이지만 따듯한 답변 부탁 드립니다,ㅜㅜㅜ  
회원작성글 띵똥땅  |  01.30
Q. CFSE staining 도와주세요ㅠㅠ
epithelial cell line 이용해서 CFSE staining 하고 있는데요.. 보통 CFSE를 T cell에 stimulation 주고 proliferation 되면 peak가 여러개로 뜨는 걸로 알고있는데 분명 cfse staining 후 peak는 잘 뜨는데 culture 후에 peak가 intensity가 낮은 쪽으로 이동은 하는데 여러개로 나눠지지가 않습니다.. 이게 세포 특징으로 생각해야하는건지.. 아니면 T cell 처럼 stimulation 주는게 없어서 그런건지 잘 모르겠는데 일반적으로 epithelial cell은 잘 이용 안하시는거 같더라구요 혹시 cfse는 T cell이 아닌 다른 세포에서는 사용하면 안되는 건가요?
회원작성글 ahhhy  |  01.11
Q. amyloid beta aggeration시켜서 sulforaphane 효능 보는 실험중입니다.
amyloid beta aggeration시켜서 브로콜리내   sulforaphane 효능 보는 실험중입니다.  세포는 Sh-Sy5Y cell로 실험중이고 실험 주제는 알츠하이머입니다. amyloid beta를 세포에 투여해서 알츠하이머 유발을 하여 샘플 투여시 효능을 보는 실험으로 알고 있는데    왜 Amyloid beta aggeration을 시켜야 하는건지 아무리 찾아도 없어서요 ㅠㅠ ㅠ 석사졸업후 회사에서 실험을 셋업하면서 하는데 벤처라...디스커션 할 사람도 없어서 혼자 끙끙대며 하는중입니다 ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 지망이  |  2022.12.22
Q. 6 well seeding할 때 well 가장자리로 cell이 몰립니다
현재 실험 셋팅 중에 여러 조건을 잡고 있습니다. 일단 주 목적은 cell 분화여서 6 well plate에 seeding 후 80% 정도가 되는 양과 시간을 정하는 중인데 seeding을 하면 꼭 중간 부분은 가장자리(테두리)보다 양이 적습니다.. 중간부분은 80% 정도 찼다고 보여지면 테두리쪽은 100% 이상, 거의 몇 배 이상 가득가득합니다. 제가 골고루 퍼지라고 흔들어서 그런가 싶어서 한번은 안해봤는데 그래도 똑같았습니다.. 이런 경험 있으신 분들 계실까요?ㅠㅠ   + 6 well에는 1 ml 넣고 48시간 배양하고,  48시간 이후에 눈으로 봤을 땐 마르진 않았습니다. 혹시 1 ml가 너무 적은 양인가요?
회원작성글 예비대학원생s  |  2022.11.30
Q. cell differentiation media
osteogenic cell 분화 하려고 하는데, 선배가 stock을 working농도 ( 10mM beta- glycophosphate)로 희석하신걸 주시고는 분화 media 50ml 만들어서 쓰라고 하는데 대체 희석한걸 얼마나 넣어야 하는 걸까요?
회원작성글 바이오학과  |  2022.11.14
Q. MC3T3-E1 cell에서 처음보는 양상이 나타나며 세포가 자꾸 죽는데 같은 현상 겪어보신분 계실까요?ㅜㅜ
현재 MC3T3-E1 세포를 이용하여 ALP activity와 ARS Staining을 위해 분화를 시키고 있는데 분화과정 중 (분화물질 처리 기준) 약 3~4일차부터 다음과 같은 현상이 나타나서 애를 먹고 있습니다.   셀 테두리 부분이 well에서 육안으로 관찰시 곰팡이가 피는 것처럼 하얗게 테두리가 생기고 (위 사진) 현미경으로 관찰시 다음과 같이 세포가 죽는 양상이 나타납니다 (아래 사진) 분화 조건은 24well 에 7*10^4/well로 seeding 후 2일 뒤 분화물질 & 샘플 처리를 들어가고 3일에 한번씩 교체를 해줍니다. 배양배지 & 분화배지 & 분화물질 전부 교체 및 세포 교체를 진행해보았는데도 동일한 현상이 발생하고 분화물질을 치지 않은 control well에서도 비슷한 현상(세포가 죽는 현상)이 나타납니다. 이전에는 잘되었었다가 갑자기 이런 현상이 발생하여 어려움을 겪고 있습니다 ㅠㅠ   혹시 동일하거나 비슷한 현상을 겪어보셨던 분들께 조언을 구하고 싶습니다ㅠㅠ
회원작성글 juls  |  2022.11.07
Q. EdU는 어디서만 염색되는건가요
원래 EdU가 DNA proliferation을 볼려고 염색하는것으로 알고 있었는데 EdU를 staining할 때 세포가 있는 곳이라면 다 염색이 되는건가요? 예를 들면 muscle cell이나 stem cell 같은곳에서는 염색이 안되나요?
회원작성글 브르르르릭  |  2022.10.16
Q. 아스테리스크 없을 때 해석법 첨부파일
안녕하세요, 대학원에 막 입학하여 논문을 읽던 중에 궁금증이 생겨 질문드립니다. 그림에서 볼 수 있듯이 Mg을 처리했을 때 컨트롤, Mg minus periosteum과 비교하여 유의미하게 증가함을 확인할 수 있는데요, 원래 맨 처음에 있던 연구실에서는 이런걸 해석 할 때 아스테리스크가 있는 집단만 비교하라고 배웠었거든요.. 없는 경우는 아얘 비교가 불가능하다라구요 그런데 오늘 선배님께서 얘기 해주셨을 때 컨트롤과 Mg minus periosteum간에 아스테리스크가 없으니 차이가 없다고 봐도 된다며 이래서 periosteum이 골형성에 중요한 역할을 한다고 해석을 해주시더라구요.. 뭔가 직접적으로 물어보기가 그래서 여기저기 찾는중인데 잘 나오지 않네요 ㅠㅠ 결론적으로 아스테리스크가 없을 때 해석법이 아얘 비교를 하면 안되는건가요, 아니면 서로 차이가 없음이라고 해석을 해도 되는걸까요?
회원작성글 angello108..  |  2022.09.27
Q. 3T3L1 분양 가능하신분 계실까요.. [부산 양산 김해 경남 창원]
안녕하세요 부산인근에 거주하고 있는 대학원생입니다. 이번에 3T3-L1 cell을 분화시켜야하는데 저희 랩실이 가지고있던 cell morphology를 보니까 ATCC랑 많이 다르드라구요 ㅠ 검색해보니 3T3L1 분화시 p10 넘어가면 안된다고 하던데 저희 랩실은 이미 한참 넘은 것 같아요... 교수님 퇴직도 얼마 안남으셔서 cell을 구매하지도 못하는 상황입니다.. 혹시 3T3-L1 분양 받을 수 있을까요...ㅜㅜ     https://open.kakao.com/o/sFplpGDe 커피나 밥한끼 사례하겠습니다. 혹시 가능하신분 계신다면 오픈카톡으로 꼭 연락주세요 감사합니다..
회원작성글 앨  |  2022.09.25
Q. 세포 증식성과 우태아혈청에 관해서
고등학생이라 아는 게 많이 없습니다 ㅠ 수준 낮은 질문이지만 설명 부탁드립니다.   1. 세포 증식성이 정확히 무엇인가요? 증식=세포 분열일 거고, 살아있는 세포라면 거의 모든 세포가 분열하지 않나요? 그런데 증식성이 있는 세포 없는 세포로 구분해서 말하는 이유는 뭔가요? 증식이 활발한 정도의 차이인가요? 아니면 세포 증식 보조를 해주지 않아도 스스로 증식하는 세포와 우태혈청으로 보조 해줘야만 증식하는 세포인가요?   2. 우태혈청은 세포 증식을 돕는다고 하는데, 증식성이 없는 세포는 우태혈청이 있어도 증식을 못 하는 건가요? 어떤 세포든 간에 우태혈청만 있으면 증식을 할 수 있는 건가요?       닭 배자 텔로미어 관찰 연구에서, 생식기관 세포와 신장 세포만 텔로미어의 길이가 계속 복구되는 걸 봤습니다. 논문에서는 아마 사구체 세포의 특성 같다며 추가 연구가 필요하다고 했는데, 벌써 17년이 지난 논문이더라고요. 메산지움 세포의 증식 및 증식 억제에 관한 이야기가 많고 우태혈청에서 메산지움 세포가 증식한다는 이야기도 봤습니다. 그럼 이걸로 메산지움 세포의 증식성을 설명할 수 있는 건가요...(아닌 것 같아서 찜찜;;)  
회원작성글 저으앵  |  2022.09.17
Q. 3T3-L1 세포 분화 시 Insulin
안녕하세요. 3T3-L1 세포 분화 실험을 하고 있는 연구원입니다. ATCC의 3T3-L1 세포 분화 프로토콜을 보면 분화 시, human insulin이 아닌 bovine insulin을 사용해야 한다고 나와있는데 혹시 이유를 아시는 분 있을까요?
회원작성글 윤꽁꽁  |  2022.09.14
Q. [논문 요청] 긴급
논문 요청드립니다. Semin Cell Dev Biol 2022;S1084-9521(22)00018-0. The tubulin code in platelet biogenesis baeyh4030@naver.com
회원작성글 그냥 그냥  |  2022.09.05
Q. hSkmC 분화 중 세포 죽음
lonza 에서 구매한 hSkmC 세포를 분화시켜야 하는데 자꾸 분화배지로 바꾸고서 48h뒤에 세포가 다 떠서 죽습니다.. 분화배지는 cell application의 skeletal muscle differentation media를 구매해서 사용하고 있습니다ㅠㅠ 왜그런지 잘 모르겠어요ㅠㅠ confluence는 60~70%정도에서 분화유도 하고 있습니다. 혹시 dish에 collagen coating을 하지 않아서일까요..?
회원작성글 별헤는밥  |  2022.08.22
Q. cell differentiation media change cell loss
세포 분화중에 분화 배지 교체할 때 cell loss가 일어나는데 이게 자연스러운 현상인가요..? 좀 많이 loss가 되는 것 같아서요..
회원작성글 별헤는밥  |  2022.08.14
Q. cell differentiation confluence
skeletal muscle cell인데요, cell이 고루게 퍼져있는건 아닌 것 같은데 이상태로 분화시키면 안되나요?
회원작성글 별헤는밥  |  2022.08.11
Q. starvation할때도 cell 증식하나요?
brdu를 하려고 하는데 1*10^4cell/100ul로 시딩을 해주고 있습니다. seeding 24시간 후에 starvation 24시간하고 treatment를 24시간을 하고 brdu를 합니다.  교수님께서 1*10^4cell/100ul로 시딩하면 실험하는 3일동안 너무 많이 증식하지 않을까 걱정하시더라구요. 근데 시딩 후 24시간후에 보면 20%정도 confluency 합니다.  starvation할때 medium에 1%의 penicillin streptomycin듣어가 있는 medium을 분주하고있습니다. treatment할때도 이 starvation medium에 처리하고 분주하고 있습니다. FBS가 들어가지 않은채로 2일이상있는 건데 cell 증식 할 수 있나요? 아니면 seeding후에 cell이 60% confluency하면 starvation을 하는게 맞을까요?  
회원작성글 oneday  |  2022.08.10
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