현재 세포독성실험만 10번은 진행했는데 흡광도가 자꾸 0.7~1.3 정도로 나옵니다ㅠ L929셀을 96well plate에 1×10⁵개/well씩 깔고 다음날 검액 교체했습니다. 그리고 24시간 후에 EZ-cytox(WST assay) 10ul 처리해서 1시간 동안 CO2 incubator에 넣어뒀다가 흡광도 측정하는데요.. 사수분은 항상 흡광도가 0.9~1.1 사이로 나왔고 실험실 프로토콜 상으로도 그 정도 범위에 들어가는 흡광도로 나와야 하는데 저는 암만 해도 그 정도로 안나오네요ㅠ 몇 번이나 실험 말아먹는 중인데 어떻게 해야 흡광도값이 일정하게 나올까요ㅠㅠ

제목과 같이 assay를 하려고 할 때 staining solution volume과 wash 해주는 용액의 volume을 똑같이 해야한다는데 따로 이유가 있는건가요?

protoplast를 추출하고 hemocytometer로 계산하고 있습니다. 계산해야하는 샘플의 양이 많아서 현미경을 오래 보고 있기 힘들더라구요. 혹시 세포를 넣은 hemocytometer 사진을 찍고, 다른 프로그램으로 자동 계수하는 방법이 있을까요? Image J 나 기타 프로그램으로 할 수 있는 방법 알려주시면 감사하겠습니다!

cryo vial을 사용중인데, 동결 시 바이알을 꽉 잠그고 -80도에 보관 후, 액체질소(liquid nitrogen)로 옮깁니다. 동결 후 풀면 세포 상태가 너무 안좋고 붙어있는 셀 양도 별로 없어 질문남깁니다 ㅠㅠ  1. 동결을 풀기위해 액체질소에서 꺼내면 vial안에 액체질소가 들어서 부글부글 끓는 것이 보입니다. 정상인가요..? 그리고 꽉 닫았던 뚜껑들도 뚜껑이 얼어 다 헐렁헐렁해져서 살짝만 힘줘도 열려버립니다...  2. 안에 액체질소가 들어가더라도 세포는 사용이 가능한가요?? 액체질소에 닿으면 세포에 타격이 가나요.. 3. 안에 들어간 액체질소를 빼주고 사용해도 된다면, 뚜껑을 열지않고 엎드리기만해도 액체질소가 빠져나오던데 이렇게 빼주면되나요 아니면 꺼내자마자 뚜껑을 살짝 열어 빼주면 되나요..?   * 저는 액체질소에서 빼내서 실험실로 가져가 바로 37도에 녹입니다. 닫힌상태에서도 증발이 된다면 녹이는 과정이나 들고옮기는 과정에서 다 날라가지않나요..?? 근데도 세포가 이상해서 ㅠㅠㅠ 

안녕하세요. 석사 1년차에 접어들게된 초보 연구자 입니다. 최근에 암연구를 하게 되어 현재 breast, liver, pancreas, stomach cancer에 대해 연구를 하게 되었는데 normal cell line을 한국세포주은행에서 얻을수가 없더라구요.  제가 찾은 cell line은  breast: MCF-10, MCF-10A, MCF-12A, MCF-12F, HBL-100, 184A1, 184A5 liver: Fa2N-4 pancreas: H6c7 stomach: HGaEpC 이렇게 있는데 다른 normal cell line이어도 괜찮습니다. cell line 분양 해주실 수 있다면 연락 부탁드립니다. jmk95@naver.com 010-6899-1058

vero/h 가지고 실험해보는 학생입니다.  6well 96well 에 각각 깔아 plaque assay를 할려고 하는데  6well에는 4x10^5  96well에는 1.5x10^4 으로 well당 깔라고 알려주셨는데 cell counting해보니 1ml당 3.5x10^6이 나왔습니다 DMEM을 섞어 농도를 맞춰주는데 각각 몇씩 추가해주어야 알맞은 농도가 나올까요?.. 계산하는 법도 알려주시면 감사합니다..   초보적인 질문이라 죄송해요 ㅠㅠ

안녕하세요. 인간유래 피부세포로 세포 증식활성 실험중입니다. 보통 Cell counting kit-8로 세포 증식능 데이터를 내는데 대조군과 비교가능한 사진도 같이 찍습니다. 사용하는 현미경은 일반 세포 관찰용 현미경인데 배율에 따라 사진도 잘찍힙니다. 문제는 세포가 좀 더 또렷하게 보이게끔 세포를 염색시켜서 사진을 찍으려고 하는데 이 때 사용할수있는 세포 염색약이 있을까요? 찾아보니 trypan blue로 동물세포 염색을 한다는데 이 염색약은 죽은세포를 염색시킨다고 하더라구요 형광은 사용이 안되어서 형광을 제외한 세포 염색법이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다 아래처럼 세포 사진을 찍을수있는 방법은 무엇인지 알수있을까요?

분자량은 460인 powder를 DW에 녹여 100mM의 stock solution을 1mL 만들려고 한다면 얼마의 powder를 DW 1mL에 넣어야하나요?

cell line은 HaCaT 이고, 1XPBS로 washing 후, media(DMEM) change 직후 사진입니다. RNA isolation 을 진행하기 위해 12-well plate에 seeding 해 둔 상황인데, media change 하기 직전까지는 괜찮았던 cell이 저렇게 되니 당황스럽네요ㅠㅠ 왼쪽 부분이 제가 평소에 아는 HaCaT morphology이고, 오른쪽 부분은 마치 cell이 터진 것처럼 물방울이 cell 주위에 형성된 저는 처음 보는 비정상적인 모습입니다. 혹시 이런 비슷한 경우를 경험하신 분이 있나요? 있으시다면 원인이 무엇인가요?ㅠㅠ 나름 HaCaT cell culture를 컨탐 없이 해왔어서, 원인을 정확히 모르겠습니다ㅠ

한국세포주은행에서 세포주를 검색하면 passage number까지 알 수 있다고 들었는데 culture method와 culture morphology까지만 보입니다.. 미천한 학부생에게 가르침을 주십시오

안녕하세요.    cell stock 배지로 이번에 처음 Gibco 사의 Cell freezing medium을 구입하였습니다. (Cat# 12648010)   이전에 lonza 회사꺼를 썼는데 단종되서.. 바꿔보았는데요.    이전 사용했던 것과는 다르게 이건 보관온도가 -20도 이고 사용할 때 4도에서 thawing하여 사용하라고 하더라구요.   그런데 할 때마다 녹이기 번거로울것 같아서 혹시 4도에 계속 보관해도 되는지 질문드립니다. 

안녕하세요. cell 실험을 하는 학생입니다. 현재 cell을 계속 키우고 있는 상태 (stock으로부터 계대는 2번 한 상태) 입니다. 제가 궁금한점은. (seeding할 용도) 100파이의 한 플레이트를 12개정도로 divide해도 상관 없는건가요? (passage num을 낮추기 위해서요) 또 stock으로부터 꺼내진 cell을 몇번 정도 계대를 해주어야 seeding 이 가능한건지 알고싶습니다

안녕하세요. 동물실험에 대해 공부하고 있는 대학생입니다.    대부분 논문에서 누드 마우스에 cancer cell을 피하투여해서 종양을 만들어 성장 시킨후, 약물을 투여합니다.    그런데, 이 약물을 투여할 때 피하투여 방식을 사용하게 되면 종양과 사이의 거리에 따라 약물이 작용하는 정도가 달라진다고 생각되는데, 대부분의 논문에서는 단지, 피하투여를 사용하였다. 이런 말만 쓰여 있어서 질문 드립니다.  약물을 피하투여 할 때, 대부분 어떤 방식으로 피하투여 위치를 정하시는지 궁금합니다..  관련 논문이나 참고할 만한 논문도 공유 부탁드립니다!! 감사합니다. 

CCD-986sk로 UV에 의한 노화 연구 계획중인데 UVB irradiation시 CCD-986sk 배지의 FBS를 제거하고 UV를 조사하는 이유가 뭔가요ㅠㅠ너무 기본적인거 물어보는거같아서 민망한데 찾아봐도 안나오고 어떻게 찾아봐야할지도 모르겠고 도와주새요,,,,ㅠㅠ

안녕하세요. 요즘 실험 열심히 배우고 있는 학생입니다, ㅜㅜ 제가 골세포 분화 실험은 처음해보는데, 연구실에 연구원이 저 한명이라 물어볼 곳이 없어 여기 질문 올립니다.   보통 분화 실험 할 때 조건을 간단하게 적으면 - 24well plate - 5*10^4 cell seeding - 24hr 후 분화유도배지로 교체 - 2~3일 마다 배지 교체하며 2주정도 배양 이렇던데 그러면 저 정도 cell양이면 3일만 지나도 full density가 될텐데 2주동안 계속 subculture 없이 배지만 갈아주면 cell이 미어터지지 않나요? 원래 분화실험 할 때 그 정도로 full density로 진행 하는것인가요...?    기초적인 질문이지만 따듯한 답변 부탁 드립니다,ㅜㅜㅜ  

계대 후 cell stock을 하려고 하는데 어느정도 cell이 차야 stock하는게 좋나요? cell들은 다 붙었는데 아직 뜨문뜨문해보입니다. 지난번 계대에서는 꽉 채울 때까지 있다가 계대한건데 꽉 채워야 stock하기도 좋나요?  또 이번에는 penicilin을 첨가한 media로 배양하였는데 그럼 기준이 또 달라질까요? 답해주시는 선생님들 항상 감사합니다.