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 카테고리: 전체 > Cell Biology
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Q. cell culture 이물질 형성 첨부파일
cell을 culture하는데 어느 순간부터 이물질이 보이기 시작했습니다.  바닥에 붙어있기도 하고 떠다니기도 하고 cell에 붙어 있기도 합니다.  cell viability에 직접적인 영향을 미치는 것 같지는 않지만 cell에 붙어 있는 것들이 성장을 저해시키는 듯합니다.  혹여 컨탐일까 싶어서 따로 분리해서 일주일 가량 배양했지만 크기가 커지거나 수가 늘지는 않았습니다.  coating도 필요한 경우 sterile water를 이용했습니다.  의심가는 것은 DMSO 상태가 좀 이상하긴 하지만 같은 DMSO를 사용하는 다른 분들은 이상이 없어서 이 문제는 아닌 듯합니다.  대체 이게 뭐고 어떻게 없애야 하나요??
회원작성글 Jgee  |  12.06
Q. 처리 물질 적정 농도 구하기
세포실험시 특정 range에서 세포독성이 없다는 것을 MTT assay를 통해 안 후 다음 step으로 처리 물질의 적정 농도를 어떻게 구해야하나요?
회원작성글 SoliDeo  |  12.06
Q. 조직 특이적 프로모터 관련 질문
분열하는 세포 특이적인 프로모터와 GUS gene(reporter gene)을 fusion해서 plant에 introducing하면 분열하는 세포만 염색이 될까요? ProCYCB1;4:GUS
회원작성글 Wowo  |  12.06
Q. MTT assay에서 IC50값 차이
안녕하세요. 셀 실험관련하여 궁금한점이 있어 질문드립니다. 저희는 실험실에서 보통 암세포주를 이용하여 MTT assay를 진행하고 프리즘을 이용해 IC50값을 구합니다. 제가 진행한 실험에서 A (free drug, 제형아님)와 B (약물이 포함된 제형)의 IC50값이 각각 2673 nM, 1544 nM이 나왔는데 값으로만 볼때는 1.7배 차이로 차이가 얼마 나지 않아 보였습니다. 그런데 통계분석을 돌려보니 유의미한 차이가 있다고 나왔습니다. (저는 당연히 유의미한 차이가 나타나지않겠지...라고 생각했습니다) 교수님께서는 cell 실험했을 때 IC50값이 10배정도 차이나는 거는 큰차이가 없는거다 그정도 차이는 괜찮다라고 하셨는데 통계분석해보니 차이가 있다고 나와서 어떻게 해석을 해야할지 의문입니다...   보통 셀실험진행하고 비교군 두개정도 IC50값 비교를 할때, 몇 배정도 차이가 나야 이정도는 진짜 차이가 나는거다 라고 판단할수있는건가요?? 열배정도 차이는 정말 별차이 없는건가요? 답변주시면 감사하겠습니다ㅠ
회원작성글 대학원의 노예ㅠ  |  12.05
Q. 주화세포에 바이러스 접종시
바이러스에 감염된 조직에서 추출한 액을 희석하고 주화세포에 접종하여 CPE를 관찰 하려고 할 때 난에서는 난황물질이 독성을 나타내어 CTE를 나타낼 수 있다고 하는데요 그렇다면 난황을 제거하는 방법이 따로 있을까요?
회원작성글 수산생명의학과  |  12.05
Q. Cell seeding시 media
Cell seeding 할 때 셀 카운트를 한 후에 예를 들어, 1 곱하기 10의 5승으로 cell을 seeding 하려고 합니다.  그럼, 6 well plate 내 media는 1 ml를 넣어야 하는지 2 ml를 넣어야 하는지 모르겠습니다.  sample은 seeding 후 24시간 뒤에 처리하는 데, 이때는 media를 모두 석션하고 새로운 배지 2 ml을 넣은 뒤 처리합니다. (정확한 농도로 처리하기 위하여) 
회원작성글 오이가싫어  |  12.05
Q. stable cell line 만들때
u87 세포를 가지고 stable cell line을 만들려고 합니다. polyclonal을 만들고 limiting dilution을 통해 monoclonal population을 만들려고 하는데 polyclonal population까지 만들고 이것을 cell stock을 하여 나중에 (대략 3달 뒤) limiting dilution을 하려고 하는데 문제 없겠죠? (개인사정으로 바로 limiting dilution을 하지 못하게 됬어요..ㅠㅠ). 그리고 cell stock을 할때 보관을 -80도 deep freezer에 보관을 하나요 아니면 질소탱크에다가 보관을 하나요? Transduction을 진행 후 antibiotic selection을 진행을 하는데 protocol을 찾아보니깐 control 군 (lentivirus가 없는 곳)에 있는 세포들이 다 죽을 때 까지 incubator에 보관을 하고 2-3일 마다 media change를 해주라고 나와있는데 죽은세포와 살아있는 세포는 현미경으로 어떻게 관찰을 하나요? 모습에 차이점이 있나요? 그리고 media change는 antibiotic이 들어간 media를 가지고 진행을 해주면 되나요?   아직 실험 초보여서...ㅠㅠ 답변 부탁드리겠습니다!     
회원작성글 avocaddo  |  12.05
Q. Corn meal agar에 trypan blue를 첨가해서 사용하는 목적이 뭔가요?
집락을 더 잘 관찰하기 위함인가요...ㅠ
회원작성글 dpdrmfjffl..  |  12.04
Q. 셀 자라는 속도 문의드립니다..
월 : 저녁에 25t-> 75t 하나로 계대 화 : 오후에 30% 찬 것 확인 수 : 저녁에 50% 찬 것 확인 목 : 저녁 8시경 확인했더니 overgrowth, 일단은 계대 진행 금 : 토 : 일 : 사진과 같은 상태 입니다..ㅠㅠ p.1의 b16f10 세포를 분양 받았고 위와 같이 계대를 진행하였습니다. 매일매일 세포 자라는 것을 확인하였고 수요일 저녁에 50% 차서 목요일 저녁쯤 계대하면 되겠거니 생각하고 있었는데 배지가 노랗게 뜨고 overgrowth 된 것 처럼 세포도 붕 뜨더라구요.. 그래도 거의 붙어있어서 그거라도 계대를 했는데 동글동글한 모양으로 본래의 morphology를 잃은 상태로 잘 자라지 못합니다 1. 어떻게 살릴 수 있는 방도가 없을까요? 2. 세포 키우면서 이런 적이 없었는데(계속 b16f10의 동일한 세포만 키워왔음) 갑자기 이렇게 되니 당황스럽습니다.. 보통은 전날 60~70%정도 차도 다음날 저녁에 계대해도 괜찮았거든요. 이렇게 자라는 속도가 갑자기 빨라질 수 있나요? 3. 분양 해주신분 께서 세포 상태가 안좋다고 하셔서 좀 미루다가 그 분께 분양 받은건데, 처음부터 세포 상태가 안좋아서 이렇게 됐을 가능성이 있을까요?
회원작성글 석사과정쥬쥬  |  12.03
Q. PANC-1, MIA paca-2 차이점
췌장암 관련 논문을 읽고있는데, 이해가 잘 가지 않는 부분이 있어서 여쭤봅니다.... panc-1 : pancreatic ductal adenocarcinoma cell line mia paca-2 : pancreas cancer cell line   흔히 췌장암이라고 하면 췌관선암인 pancreatic ductal cancer이라 panc-1은 알겠는데, mia paca-2 cancer cell line은 그럼 같은 건가요..?
회원작성글 합성인데 생물공부  |  12.02
Q. Triton X-100 원리
Triton X-100이 세포막의 인지질을 녹일때 일어나는 작용과 반응이 궁금합니다! 상세히 설명해주시면 감사하겠습니다.ㅠ
회원작성글 shu  |  12.02
Q. 모발건강, 탈모실험 관련하여 문의드립니다.
안녕하세요. 탈모관련 실험을 셋팅중입니다. 국내에서 human dermal papilla cell을 2번 구매하였습니다. female과 male 40 years old로 구매를 하였는데, 두 세포모두 minoxidil 10uM을 처리하였을 때, 세포성장인자 (KGF, VEGF 등) 에서 발현이 나타나지 않습니다. primary세포에 minoxidil을 처리하였을 때, 왜 반응이 일어나지 않는지 궁금합니다.   조금이라도 아시는 분들은 답변 달아주세요 ㅜㅜ <trouble shooting 조건> (1) 세포 재 구매 (2) DPC 전용배지로 배양중 (3) minoxidil, finasteride등 positive control 농도별 테스트 진행함    - 발현 변화 없음. (4) primer 변경 등  
회원작성글 클린벤치  |  12.01
Q. cell subculture 방식에 대한 질문
안녕하세요  새내기 대학원생입니다.   cell subculture시 trypsin 처리 하고 media로 트립신을 희석시켜서 하는 방법과 trypsin 처리 하고 centrifuge 돌려서 trypsin 제거 하고 media로 resuspension 해주는 경우 중 어떤 것을더 선호하시나요? 선호하시는 것이 있으시다면 그 방법을 선호하는 이유와 만약 첫 번째 방법을 사용하신다면 트립신이 몇 퍼센트까지 괜찮은지 알려주신다면 감사하겠습니다.(예를들면 media 20ml에 트립신 2ml 정도 -> 10%등)   감사합니다.
회원작성글 쥐팤  |  12.01
Q. cell이 이상합니다ㅠㅠ( mcf-7)
MCF-7 cell을 받아서 스탁 만들어두고 키우고있습니다. 근데 계속 컨탐되는거 같아요. background가 더럽습니다ㅠㅠ dish를 약간 기울면 하얀색 알갱이? 모래처럼 움직이는게 보입니다. 일단 급한대로 1% PS media를 넣어줬습니다.. 예전 cell도 컨탐되어서 다시 스탁 푼건데 풀때는 괜찮습니다. 풀고 cell 확인하면 잘 붙어있습니다. 계대 한번해도 잘 붙어있는걸 확인합니다. background도 깨끗해요. 근데 3번째 넘어갈때 항상 저렇게 컨탐되네요..이유가 뭘까요?ㅠㅠㅠ 배지도 새로 따고 pbs도 새로 땄는데.. 트립신이 컨탐됬을수도 있을까요? 실험실 사람들과 같은 벤치쓰는데 다른사람들껀 괜찮아 보입니다. 인큐베이터도 같이 사용하고있어요.
회원작성글 헤우니  |  12.01
Q. ES cell line lentiviral transduction 후 delay된 cell death
최근 embryonic stem cell 라인에 lentivirus를 이용하여 transduction을 시켜주는 실험을 하고 있습니다.  Infection으로부터 24시간 후 selection을 시작해주었고 세포는 몇 일 동안 잘 자라서 passaging도 한번 해주었습니다. 한 5-6일 정도는 selection drug이 포함된 미디엄에서 아무 문제 없이 잘 자란 것 같습니다. 그런데 갑작스럽게 massive한 cell death가 발생하기 시작했습니다. 세포가 자라기는 하는 것 같은데 그 속도와 비슷하게 (아니면 조금 더 빠르게?) 사멸하여 육안으로도 둥둥 떠있는 세포가 보일 정도입니다. 현미경 상으로 관찰하였을 때 컨탬처럼 보이는 부분은 없고, 죽은 셀만 제거해주면 바닥도 깔끔해보입니다 (mycoplasma 컨탬 검사는 안 해봤습니다). 이렇게 보면 바이러스의 문제인가 싶기도 하지만, 동일한 바이러스로 infection된 embryonic stem cell 다른 셀라인은 이상 없이 아주 잘 자라고 있어서 도대체 뭔가 싶습니다... 같은 embryonic stem cell이라도 셀라인마다 efficiency가 다를 수가 있나요? efficiency 문제라면 왜 cell death가 delay되서 나타나는지도 잘 모르겠습니다 (transduction 없이는 보통 selection 3일차에 90% 이상 사멸합니다).  작은 힌트라도 소중한 답변 주시면 정말 도움이 많이 될 것 같습니다...감사합니다!
회원작성글 BioMate  |  12.01
Q. SDA 배지 조성 관련 질문 있습니다
SDA 배지 조성에 대해 찾아 보니 어떤 곳에서는 dextrose, peptone, distilled water가 , 어떤 곳에서는 Peptic digestion of animal tissues와 Pancreatic casein digestion이 있다고 하는데 배지 제조사별로 조성이 다른 건가요?
회원작성글 dpdrmfjffl..  |  11.30
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