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Q. 대장균 배양기 생존기간
9월 30일에 대장균을 배양하는 실험을 할 계획인데요 원래 계획은 25도로 설정된 배양기에서 3일 동안 넣어둘 예정이었는데 10월 3일에 휴일이어서 총 4일간 배양기에 넣어놔야 될 것 같습니다. 대장균이 다 자라는데 하루면 충분하다고 하는데 4일간 배양기에 넣어두면 이미 죽어있겠죠...? ㅜㅜ실험결과를 봐야하는데 아무래도 휴일에 학교를 나올 수 없으니깐 실험결과에 지장이 많이 될까요...?
회원작성글 기장의삶  |  2022.09.19
Q. Low copy plasmid를 lb broth에서 형질전환해도 될까요
Low copy plasmid를 형질전환할때 soc를 가지고 리커버리 했는데 이번엔 soc가 없고 만들 시간도 없어서 부득이하게 lb로 하려고 합니다. 그런데 soc로 실험할때도 가끔 콜로니가 안 뜰때도 있었는데 그보다 영양 성분이 적은 lb로 리커버리하면 균이 잘 자랄까 걱정되네요. lb broth 양이랑 리커버리 시간을 늘리면 되는건가요? 평소에는 soc 200ul에 리커버리는 대략 1시간 정도 합니다
회원작성글 란란루  |  2022.09.19
Q. 미생물(유산균) growth curve 그리는 방법
미생물의 growth curve를 그릴려고 하는데요, 96 well plate를 이용해서 kinetic mode로 1시간에 한 번씩 측정 전에 shaking 하여 총 24시간 동안 찍으려고 합니다.   여기서 질문은, 1. O.D 600nm에서 흡광도 0.8~1.0 이상이면 값이 정확하지 않아 희석하여 측정해야 한다고 하는데 예비로 실험해봤을 때 stationary phase에서 최고값이 2.5 가까이 나옵니다. 그러면 이럴 때는 중간에 플레이트를 꺼내서 희석하거나 할 수가 없는데 어떤 방법을 사용해야 하나요? 96 well plate를 쓰지 않고 큐벳을 써서 1시간에 한번씩 측정하는 방법 밖엔 없나요??   2. 시간에 따른 흡광도와 log 값의 관계를 보기 위해 0h부터 3시간마다 plating도 동시에 진행할 예정인데, 예전에 0h를 plating 했던 결과를 보면 균 수가 9log 정도가 됐는데 그러면 각 시간별 plating 희석 배수는 어느정도로 하는 것이 적당한가요?  밑에 제가 예비로 실험한 growth curve 그래프를 첨부하겠습니다. 참고로 제가 실험한 방법은 1. glycerol에 1:1로 mix된 균 스탁을 10mL MRS broth에 접종한다. 2. 24h 배양 후 200uL를 따서 새 MRS broth 10mL에 접종한다. 3. 새 MRS broth에 접종하자마자 200uL씩 따서 96well plate에 분주 후 kinetic mode로 24h동안 흡광도를 측정한다. 4. 그동안 새 MRS broth에 접종한 때를 0h로 하여 3시간 마다 plating한다. (plating 할 때는 접종된 broth에서 100uL를 따서 1X PBS buffer 10mL에 희석한 후 거기서 다시 1mL을 따서 다시 새로운 PBS 9mL에 희석하는 방식으로 serial dilution하여 희석한다.)   답변 기다리겠습니다... 감사합니다..!!
회원작성글 니가가라하와이  |  2022.09.19
Q. Skim-milk 배지에서 미생물 protease 실험하는데 결과가 이상해요
skim-milk 배지에서 키웠는데 오른쪽에 한 녀석이 하얀색 원을 형성하더라구요 자세히 보니까 균이 퍼진 것도 아니고 원래 퍼지면서 자라는 친구도 아니거든요... 모든 plate에서 같은 형상이 나오니까 무슨 작용이 있는 것 같은데 아무리 구글링해도 투명환만 나오고 하얀색원에대한 부분은 없더라구요 skim-milk배지에서 white zone이 나오면 어떻게 해석할 수 있는건가요?
회원작성글 Seoki  |  2022.09.18
Q. Blood 또는 Egg yolk 첨가 시 온도체크
온도낮출때 교반기로 돌리며 온도를 낮추고 첨가하는데, 비 숙련자나 개개인의 체감온도차이로 인해 배지품질이 일정치 않아 온도체크 후 첨가 하려는데 탐침온도계가 아닌 레이저 온도계로 체크가 가능할까요?
회원작성글 Hidensick  |  2022.09.17
Q. 디스크 확산 실험 유산균 가루로 추출액 얻는 방법
안녕하세요, 저는 현재 고등학교 1학년이고 항생과 미생물에 관심이 있어서 실험 프로젝트에서 디스크 확산 실험으로 천연항생 물질과 시중에 파는 유산균의 학생 작용을 관찰하고자 합니다. 제가 계획하고 있는 실험 방법은 가루로 된 유산균을 알코올에 탄 뒤 12시간동안 보관했다가 상층액만 거두어서 추출액을 얻는 것인데요, 이런 실험 방법을 사용하여도 유산균의 효능에 지장이 없을 수 있는지가 궁금합니다. 그리고 만일 지장이 있다면 어떤 방법으로 실험을 진행해야 시중에 파는 유산균의 대장균 항생 작용을 디스크 확산 실험을 통해 알 수 있나요?
회원작성글 린린기린  |  2022.09.17
Q. transformation시 insert
transformation 실험시, insert로 PCR product와 plasmid prep product 중 어떤것을 사용해야하나요? in-fusion 실험 진행시에는 plasmid prep product에 enzyme 처리 후 PCR product를 넣었었는데,  transformation 실험 진행시에 comcell에 넣는 insert를 뭐를 사용해야하는지 여쭤보고싶습니다!
회원작성글 doooom  |  2022.09.16
Q. 디스크 확산법 실험 중 특이한 환 형성 문제 첨부파일
안녕하세요 최근 어떤 샘플의 항균력을 테스트하기위해 디스크 확산법 실험을 하고있는 중 대장균에서 특이한 환이 계속 형성돼서 질문드립니다. 제 예상에는 특이한 환이 형성되는 샘플들이 모두 글리세롤을 함유하고 있는데 글리세롤에 의해 대장균의 대사가 변하여 phynotype이 변한걸로 생각하고 있습니다. 사진을 첨부해드리니 이런 환을 보셨거나 원인을 아시는 분이 있으시면 알려주시면 감사하겠습니다. ㅠㅠ
회원작성글 매일매일을즐겁게  |  2022.09.16
Q. 항생 물질 넣은 배양 배지 실험 급합니다ㅠ
고등학생입니다. 내일 급하게 편백나무수(편백나무잎을 수증기 증류해 얻어낸 하이드로졸)를 넣은 LB배지를 제작한 뒤 그 위에 생활용품으로부터 채취한 세균시료를 도말, 배양시켜 증식 정도를 확인하는 실험을 진행하게 되었습니다. 배지는https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ 링크를 참고해 만들 예정입니다. 여기서 궁금한 점이 생겨 질문드립니다. 1. 첨부한 링크를 보니 항생제를 증류수 1mL에 일정한 농도로 희석해서 한천 혼합물에 넣던데 편백나무수를 증류수에 희석하는 과정없이 그냥 1mL를 넣어도 될까요? 2. 편백나무수가 항생제처럼 배지를 제작할 때 넣어도 항균효과를 나타낼 수 있을까요? 3. 만약 학교 실험실에 펩톤이나 트립톤, 카제인 펩톤이 없다면 대신 분유를 사용해도 될까요? 안된다면 그밖에 사용할 수 있는 쉽게 구할 수 있는 재료 추천 부탁드립니다. 4. 필요한 준비물이 학교 실험실에 하나도 구비되어 있지 않다면 원래 있는 LB배지라도 녹여서 편백나무수를 넣은 배지를 새롭게 만들고 싶은데.. 괜찮을까요? 5. 배지를 제작 후 하루동안 건조시켜야 하는 건 알지만 급한 경우에는 접시에 넣고 30분 정도 굳힌 뒤 바로 세균 배양 실험을 진행해도 되나요? 미리 감사드립니다.
회원작성글 나는할수있어  |  2022.09.16
Q. 구강세균 디스크 확산법에 대해서 질문드립니다
안녕하세요 저는 고등학교 과제연구에서 구강세균에 대한 에센셜 오일의 항균효과에 대해 연구를 진행하고 있는데요, 생물자원센터에서 S. mutans를 분양받으려고 했는데 Bio level1이라서 불가능하고, 대신 연쇄상구균 중 하나인 S. downei 를 분양받았는데요, 동결건조 앰플을 재생하고BHI배지에 획선도말하여 관찰했는데 colony가 잘 관찰되지 않아서요ㅠㅠ 뭐가 문제였는지 잘 모르겠습니다… 1. 동결건조된 미생물이 배송된 후 냉장보관하다가 5~6일 뒤에 재생하고 배양한 것 2. S. downei는 미호기성인데 일반 incubator에서 배양한 것 그리고 추가적인 질문은 3. 구강 내에도 대장균이 존재한다고 들었는데 그냥 일반 대장균으로 실험해도 구강세균 항균효과와 비슷하다고 결론 낼 수 있을까요?(아무래도 문제가 있겠죠?ㅠㅠ) 4. 직접 치아에서 세균을 채취하여 디스크 확산법으로 항균효과를 확인한다면 어떤 방법으로 하는 것이 좋을까요? 고등학생이다보니 조언을 구할 곳이 많이 없다는 것이 어려움인 것 같습니다..ㅠㅠ 조언 간절히 부탁드려요…!!
회원작성글 jian0624  |  2022.09.15
Q. 세포 파쇄 시 lysis buffer사용
단백질 정제를 위해 세포 파쇄를 할 때 먼저 lysis buffer를 처리해줬습니다. 이 방법은 단백질 파쇄법 중 enzymatic digestion이 아닌 chemical solubilization이라고 봐야할까요? 
회원작성글 말도못하는감자  |  2022.09.15
Q. 고등학생 세균배양 실험
세균배양실험에서 항온기 대신 과일건조기를 이용하려고 하는데 더운바람으로 인한 오염을 완벽히 차단하는 방법이 있을까요??
회원작성글 냠냠쩝  |  2022.09.12
Q. 곰팡이 배양 실험에 관한 질문
1. 식빵에 핀 곰팡이를 채취하여 PDA배지 접종시킬 때 곰팡이를 떼어낸 후 물에 희석하여 면봉을 이용하여 배지에 문지르면 되는 것으로 알고 있는데요, 곰팡이를 물에 희석할 때 원하는 농도로 맞추려면 떼어낸 곰팡이의 무게를 전자저울로 재면 되는건가요? 2. 농도는 어느정도로 맞추는 것이 적당할까요?  3. 물에 희석시킬 때 그냥 증류수에 곰팡이를 넣고 흔들어주면 되는건가요? 4. 곰팡이를 희석할 때 사용하는 물은 꼭 증류수여야 하나요? 5. 조사해보니 10% 주석산으로 pH 농도를 3.5로 맞추라고 하는데 과학실에 주석산이 없어서 아세트산으로 대체하려고 합니다. 대체해도 pH만 맞춘다면 문제 없겠죠?
회원작성글 과학좋아하는고딩  |  2022.09.12
Q. 고등학생 세균배양 실험
세균배양 실험을 하려고 하는데 학교에 항온기가 없습니다... 혹시 항온기를 대체할 수 있는 방법을 알려주실 수 있나요?
회원작성글 냠냠쩝  |  2022.09.09
Q. 세균 염색 관련 질문입니다.
그람 염색법을 실시하고 항생제를 투여해서 세균 모양의 변화 양상을 관찰하고 싶은데 고정할 때 세균이 죽나요? 세균을 살려서 염색하는 방법은 없나요? 사프라닌만 사용해서 세균 염색은 불가능한가요?
회원작성글 cldldp  |  2022.09.09
Q. Transformation 실험에서 colony가 관찰이 안됩니다.ㅜㅜ 첨부파일
transformation실험에서 comp cell에 DNA를 넣은 후 암피실린 배지에 도말한 후 하루 뒤에 실험결과를 확인했는데, 콜로니가 거의 관찰되지 않고 전체적으로 lawn? 형태로 배양되어 있는 것이 확인됐습니다. 왜 그런지 알려주실 수 있을까요? 
회원작성글 말도못하는감자  |  2022.09.08
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