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 카테고리: 전체 > Laboratory Animals > Histology/Pathology
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Q. 마우스 귀조직이 떨어져요 ㅠㅠㅠ
귀조직을 파라핀 몰딩 하여 섹션을 하였습니다염색을 하려고 xylene으로 파라핀을 제거과정중 귀조직이 빈번하게 떨어지고 있습니다여러 고수님들의 해결방법이 궁금하여 글을 올립니다
회원작성글 파라핀  |  2013.01.31
Q. counter stain
안녕하세요. counter staining (prussian blue와 IHC) 하려 하는데요.지금까지는 각각 했었구요..요번에 첨한건데 면역염색하는 단계 중간중간에 prussian blue stain을 하는 식으로 했는데 결과가 계속 안좋습니다.ㅠ 혹시 프로토콜이나 팁을 알려주실 쌤들 복받으실겁니다. (_ _)
회원작성글 yssj  |  2013.01.11
Q. 제브라피쉬 fix 질문입니다
제브라피쉬 embryo를 in situ hybbridzation하려고 4%paraformaldehyde에 밤동안 담가놨었는데....원래 embryo가 투명에 가깝지 않습니까? 그런데 이걸 하고나니까 york가 불투명하게(희게)보이더군요. 그리고 cell이나 조직 부분들도 생전처럼 투명하진 않고 좀 어둡게 보입니다. 뭔가 잘못한걸까요?
zeb  |  2012.09.21
Q. Frozen tissue를 받았을때 할수 있는 연구
다른 연구실로부터 diabetic porcine eye를 받았습니다. 다른 intervention을 한 것은 아니고, control, high fat/ cholesterol diet, high fat/chol diet & stz induced diabetes입니다. 그 연구실은 이미 돼지 죽이기 직전에 실험에 필요한 관상동맥을 제거해서 실험을 했고 나머지는 혹시 몰라 -80에 보관을 했다고 합니다. 교수님께서 diabetic porcine eye에서 diabetic retinopathy관련해서 연구를 해보라 하시는데 특정 marker가 올라갔다라던가 흔히 말하는 observational study 말고는 할수있는것이 없죠? 그러니까 소위 말해 다시 녹여서 endothelium culture를 한다던가 intervention을 할수는 없겠죠? 그냥 immunofluorescence, pcr/ western등이 한계죠? ㅠ 감사합니다.
회원작성글 닥터엘  |  2012.09.04
Q. 조직 고정 질문입니다. 첨부파일
안녕하세요.조직실험을 하는 학도입니다.다름아닌 조직을 실험 여건상 OTC compound에 frozen상태로 보관했다가formaldehyde에 고정을 시키지 않고 acetone에 고정을 하였습니다.헌데, 파라핀 조직과는 틀리게 세포가 거의 남아있지 않고 membrane만 남아있습니다;;6~7um정도로 잘라 슬라이드에 부착후 냉동보관된 슬라이드를 30분정도 건조시킨 후 cold acetone에 5분정도 고정을 시키고 10~30분정도 건조시켰습니다.OTC compound 제거를 위해 10분정도 DW에 워싱후 PBS-T도 동일하게 10분정도 워싱했습니다.이때 사용된 슬라이드는 코팅 슬라이드를 이용하였습니다.아세톤은 고정이 잘된다고 하는데;; 왜 이런 문제가 발생하는지 잘 모르겠습니다.그리고 모든 조직이 그러는게 아니고 일부만 문제가 발생하니 더 해결하기가 어렵네요;;혹시 아세톤 외 다른 고정액이 있는지 궁금하구요.조직이 쉽게 떨어지는 이유를 잘 모르겠어서 질문합니다.
회원작성글 옥낭자  |  2012.05.09
Q. ATPase staining 알고 계신 분 혹 Frozen section아시는 분 답변 부탁드립니다.ㅠ
논문 보다가 Muscle의 두가지 Fiber type의 발현을 측정하는 방법으로 ATPase staining이라는 방법을 보게되었습니다. 그런데 실험 Procedure를 보니 Frozen section을 이용하여실험을 진행한 듯 보이는데 Paraffin section으로는 ATPase staining이 불가능 한지..?Histology 관련하여 고수분들 꼭 답변 부탁드립니다 ㅠㅠ
삽질왕  |  2012.05.02
Q. cryosection 질문입니다.
간 조직을이용하여 cryosection을 수행하고 있습니다.먼저 4% paraformaldehyde로 냉장에서 12시간 fix한후 PBS를 이용하여 5분간격 2회 WASHING을 수행합니다.그후 10% sucrose에 약 한시간정도 (가라앉을때까지)그리고 30% sucrose에 가라앉을때까지30% sucrose, oct compound를 1:1로 섞은후 가라앉을때 까지 섞어줍니다.이후 oct compound를 넣고 가라앉힌뒤 플라스틱몰드를 이용해서 액체질소에 얼립니다. section은 약 -20도정도에서 수행하구요..여기서 문제가 있는데요..1. 조직중간중간에 구멍이 크게 뻥뻥 뚫리듯이.. 발생하는경우가 생깁니다.2. 조직이 자꾸말리고 접히네요.. 3. 조직내 세포들이 정확히 잘리지 않으며 핵부분이 쓸려가는 느낌? 핵에서 나오는 물질들을 염색하면 핵에 딱 들어가있는 것이아니라 크게 퍼져있네요.. DAPI로 COUNTER STAINING을 하면 핵은 동그랗게 나오는데.. 그외의 핵에서 나오는 물질을 염색하면 핵의 모양이 아니네요..문제가 뭘까요? ㅜ 도와주세요..참 모든 SECTION은 약 7um정도로 수행하며 +charged slide에 붙인후 약간 약 10여분 정도 상온에서 말린후 deep freezer에 보관합니다. 뭐가 문제일까요? ㅜㅜ 도와주세요..
회원작성글 완소호돌  |  2012.04.30
Q. Safranin O staining 질문드립니다.
현재 bovine cartilage sample 직접 채취해서 PFA 4% 고정후 paraffin section해서sample slide로 보유하고 있습니다.xylene - 100% EtOH - 95% EtOH - 90% EtOH - 75% EtOH - DW 거치며 Deparaffination 한뒤FCF 3min - 1% 아세트산 - Safranin O (Polyscience) 5min 염색 뒤95% EtOH - 100% EtOH - xylene으로 클리어 한 뒤 invitrogen clearmount로 고정했습니다.그런데 mount 전에는 색이 괜찮은데 mount하고 나면 색이 붉은색에서 오렌지 색으로 바뀌네요..뭔가 색이 빠지는 듯한 느낌이 드는데.. staining protocol의 문제인지.. mounting sol.의 문제인지..현재 staining 시간도 늘려보고, mount 전에 완전히 말려보고 mount 하기도 하는데 결과는 계속 색이 빠지네요.. 저희가 처음 시작하는 실험실이라.. 세팅중에 있는데 도움 부탁드립니다!감사합니다. 
회원작성글 내맘속호수  |  2012.04.17
Q. 조직 TUNEL과정에서요..
이제  막 setting을 하고있는데요;;일단 조직은 cryosection한 조직이구요..tumor를 가지고 TUNEL을 하는데, TUNEL Kit를 제가 처음써봐서요...전에있던 실험실에서는 brain으로 했고, kit를 사용하지 않았는데..무튼,, 과정중에 proteinase K를 사용했거든요.. 근데 TUNEL Kit에는 paraffin section시에는 proteinase K사용이 있는데.. 동결보존 조직에는 그 과정이 없는 것같아서요... 제가 잘못알고있는건가요??????? ㅠㅠTUNEL kit는 Roche 제품이고  11 684 795 910입니당 ㅠㅠ
회원작성글 즌  |  2012.04.12
Q. 탈회를 할려고하는데 질문!1(조직관련)
제가 조직실험을 많이 하는데요..지금까지 장기는 다해봤는데...뼈는 못해봤거든요.. rat의 골다공증 모델 할려고하는데..탈회는 어떻게하는건가요..?시약도 종류가 굉장히 많던데. 보통 얼마나 걸리는지요,..꽤 오래걸린다고 들었습니다. formic acid와 10% EDTA이 둘중에서 무엇을 사용하는게 가장 좋나요..?자세히 가르쳐주시면 감사하겠습니다. 시약 종류도요.. 
궁금이  |  2012.04.10
Q. 면역염색(CD31,PECAM)결과좀 봐주세요 (사진있음)
A조직-1A조직-2B 조직위의 A,B 조직은 human cancer cell을 mouse에 주입해 얻은 암조직의 파라핀절편에 대한IHC 결과 사진입니다.물론 A는 HCC(huh7) 이고, B는 (아마) glioblastoma로 서로 다른 cell line이지만..동시에 같이 염색한 결과가 이렇게 달라도 됩니까 ㅜ.ㅜA는 B에 비해 매우 사이즈가 커서 많은 부분 Necrosis일어나긴 했습니다. xenograft model만들 때 부터 매우 많은(10^2배이상)cell을 injection한 차이도 있고요. 얻어야 하는 data는 A의 것인데, 저렇게 백그라운드도 심하고, 알 수 없는 동글동글 구멍들에 non-specific binding도 대단하고.. 염색의 문제일까요, 조직자체의 문제일까요. 혹시 같은 경험, huh7 IHC해보신 분들의 조언을 구하고자 합니다..
회원작성글 lounge  |  2012.04.06
Q. 간단한 질문입니다 -free floating
free-floating이란 paraffin block section을 의미하는 건가요??아님 section은 대략 이렇게 3가지로 나뉘나요??Paraffin-embedded, Frozen section, free floating section free floating에 대해서 아시는분은 설명 부탁드립니다 
질문  |  2012.04.04
Q. cryosection
microtomb을 이용하여 cryosection을 하고 있습니다. 그런데 얇게 slice되지않고 가루처럼 부서지는군요 어찌된 이유로 이러는지 그리고 해결방법이 무엇인지 알려주세요 ㅠㅠ
초보연구원  |  2012.03.30
Q. beta galactosidase staining 이요~
mouse 장기를 staining 하려고 하는데요 해부하고 부폐하지 말라고 4%PFA로 Fixation시킨 상태인데 이걸 가지고 다시 b-gal staining protocol에 나온 fixation시킨 후 반응 시켜도 괜찮나요?
회원작성글 몽릴라  |  2012.03.15
Q. H&E staining 관련 질문드려요.
안녕하세요?올해 대학원 석사 입학해서 공부중인 학생입니다.요즘 쥐의 liver 를 이용해 h&e staining 을 하는데 제가 처음하고 미숙해서 그런지결과가 좋지 않더라구요...문제는 praffin block 을 cut 한 후 slide 에 고정 하고건조 후에 보면 조직이 갈라지거나 뜨더라구요...slide에서 혹여 잘 고정되었나 싶어 염색을 하다보면조직이 쉽게 떨어져 분리되는데 주변에 충고를 구하니slide 건조 시간이 부족하거나 혹은 fixing의 문제로 인해 발생된다는 이야기를 들었습니다.그래도 확실한 답을 모르겠어서 이렇게 질문드리게 되었습니다....지금은 해결책을 찾고자  석사선배니믜 도움으로 다시 praffin block을 제작하고 있습니다ㅠㅠ선생님들 저 좀 도와주세요!! 도와주시면 정말 고맙습니다 ㅠㅠ좋은하루 보내세요.
회원작성글 시작하는중  |  2012.03.07
Q. 간 H&E시 섹션에서 문제가 생겼습니다.ㅠ 도와주세여~~~~~
안녕하세요 ~ ㅋ 이번에 간조직을 떼서~ H&E를 하려고 하는데요~섹션을하려고하면~ 조직이 말려서나오는 것도 아니고~ 부셔져서 나오더라구요 ㅠㅠㅠ 어떻게 잘 건져서 따신물에 펴봐도 ㅠㅠㅠ 건질게 없어서요 ㅠ 이런경우 어떤것이 문제가 되는걸까요?ㅠㅠ 고수여러분들~ 도와주세요 !!! ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 한약향기  |  2012.02.24
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