[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
신테카바이오
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioWave  Vol.25, No.2 (2023년 2월) 오픈
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. Cell foci를 Wright-Giemsa 염색법으로 염색하려합니다.
제목에서도 언급했듯이 flask의 cell foci를 염색해서 관찰하려고 하는데 논문을 찾아보니 크게2가지 염색법이 나오더라구요.1) 0.5% crystal violet을 이용하는 방법과 2) Wright-Giemsa 염색법그래서 저는 Giemsa stain을 이용하려고 하는데, 정확한 프로토콜이 없네요.보통 혈구세포 염색하듯이 하면 되는건지? 혹시 해보신분 계시면 팁 좀 알려주세요.그리고 cell foci 염색법으로 giemsa를 쓰는게 적당한 방법인지도 궁금합니다. 감사합니다.
초보자  |  2011.03.18
Q. step912님 봐주세요~~
답변 감사합니다.혹시 BV2 cell로 NF-kB immunocytochemistry랑 luciferase assay해 보신적있나요?도움 좀 받을수 있을까요?요 두 데이타가 안나와서 오늘부로 졸업이 delay가 되었습니다.눈물밖에 안 나네요.ㅋㅋㅋ혹시 해 보신적 있다면 메일로 연락부탁드리겠습니다~~~~jey-0714@hanmail.net
기대  |  2010.12.06
Q. cell aggregation 때문에 고생중입니다 ㅜㅜ
안녕하세요 실험초보생입니다... 현재 immunocytochemistry진행을 위해서 잘 뜨는 cell이기 때문에  PLL코팅후 chamberslide에 키우고 transfection과정중에 있는데. 자꾸 날이갈수록  하루하루 진행과정에 장애가 생기네요 .. 세포가 자꾸 aggregation되서요 .. 처음에는 배양할때 aggregation되서   poly-l-lysine이 toxic하기때문에 그런것 같아 여러번 워시해주니까 잘자라더니 이번에는 transfection후에 또 그러네요.. lipofectamin2000을 사용하는데 기존 브릭질문 찾아보니 어떤분이 information sheet에 추천대로하면 대부분 toxic한 경우가 많아서 DNA와 lipofectamin량을 줄이라고 하시더군요 ~ .. 그래서 저도 이런 경우인것같았는데... 가뜩이나 복잡한 머릿속에 오늘 또하나 의문점이 생겼습니다.. ㅜㅜ chamberslide에 subculture하기전에 100mm dish에서 키우고 있는데요  오늘 subculture 하려고보니까 이 세포들도 일부분이 막 aggregation되어있네요 .... 배지 갈아줄 시간이 조금 지나긴했지만  형태가 조금 이상하더군요 ... 원래 cell line문제인건지 lipofectamin 문제인건지 ㅠ해보면 알겠지만 조언을 좀 더 얻고 싶습니다. lipofectamin2000 invitrogen꺼 이용하고있는데 .. 혹시 사용하시는분들은 어떻게 사용하시나요? 간절한 마음으로 ㅠㅠ .. 조언 부탁드립니다 정말 답답하네요
실험초보  |  2010.11.21
프로토콜 Immunohistochemistry Protocol for Paraffin-Embedded Sections
 
바이오클론  |  2010.11.04
프로토콜 FOXP3 Intracellular Staining Protocol
FOXP3 Intracellular Staining Protocol1. Perform cell surface staining as described in BioLegend’s Cell Surface ImmunofluorescenceStaining Protocol, page 22.2. Add 1 ml of 1X BioLegend’s FOXP3 Fix/Perm solution to each tube, vortexand incubate at room temperature in the dark for 20 minutes, then spindown the cells and remove the supernatant.3. Wash once with cell staining buffer (Cat. No. 420201) by spinning at 250 X gfor 5 minutes and remove the supernatant.4. Wash once with 1ml 1X BioLegend’s FOXP3 Perm buffer.5. Re-suspend cells in 1ml 1X BioLegend’s FOXP3 Perm buffer, incubate atroom temperature in the dark for 15 minutes, spin down cells and discardthe supernatant, then resuspend the pellet in 100 μl of 1X BioLegend’sFOXP3 Perm buffer.6. Add appropriate amount of fluorochrome conjugated anti-FOXP3 antibodyand incubate at room temperature in the dark for 30 minutes.7. Wash twice with cell staining buffer, and resuspend in 0.5ml cell stainingbuffer then analyze with flow cytometer with appropriate instrumentsetting.NOTE: BioLegend’s FOXP3 Fix/Perm Buffer Set (Cat. No. 421403) is speciallydeveloped and formulated for intracellular staining FOXP3 withminimum effect on surface fluorochrome staining and is highly recommendedfor optimal FOXP3 intracellular immunofluorescent stainingresults.Related Information:1. Roncador, G., et al., 2005 Eur. J. Immunol. 35:1681.Reagent List:1. Cell Staining Buffer (Cat. No. 420201)2. FOXP3 Fix/Perm Buffer Set (Cat. No. 421403)
바이오클론  |  2010.10.28
Q. immunocytochemistry시 nagative control...
HeLa로 immunocytochemistry하고있습니다. nagative control로 이차항체만 처리했는데,, 여기서 staining 이 됩니다.datasheet에 100:1~400:1로 희석라하여, 800:1,1000:1까지 해봤는데, 약하지만... signal이 뜨네요.항체처리는 상온에서 1시간 incubation하구요,, washing은 PBST(0.1% tween-20)로 10분씩 3번합니다..이차만 처리시 완전히 signal이 뜨지 않아야하나요?무엇이 문제가 되고 있을까요,,? 도와주세요...
xxx  |  2010.08.26
Q. FACS 이용한 cell cycle analysis 결과 분석..
안녕하세요.세포에 약물을 처리해서 cell cycle을 보는 실험을 진행중입니다.고정 후 PI 염색을 해서 FACS 분석을 하고 있는데GATE 치지 않았는데도 이상하게 SUB G1 위치의 cell %가 0으로 나옵니다.. 24개 SAMPLE에서 모두 0으로 나와요.지금까지 계속 조건을 잡지 못하다 겨우 됐는데 또 이런 문제가 생기네요..조건을 잘못 잡아서 그런걸까요?아니면 세포 염색까지의 과정전에서 실수가 있었던 걸까요? 실험 결과를 함께 첨부하였습니다.
wlsdud  |  2010.07.28
Q. ER targeting vector(mammal 전용) 문의드립니다.
제가 immunocytochemistry를 하여 staining실험을 하려고 하는데 ER targeting vector가 필요해서 혹시 얼마 하는가 보았더니 20ug에 백만원이 약간 넘더라구요. 현재 제가 찾아본 것이 Clontech의 pEGFP-ER vector인데요,GFP의 N term에 calreticulin (ER resident protein) signal sequence가,C term에 KDEL retention sequence가 달려있습니다.혹시 이와 유사한 것, 아니면 ER targeting gene이 들어간(staining이 잘 되는)vector가 있으시다면 답변 부탁드립니다. 감사합니다. 
아름다운 행인  |  2010.06.09
Q. ICC 사진찍을때 보면,, 세포가 찌그러져 있어요 !! 첨부파일
안녕하세요!!Immunocytochemistry  하는데 궁금한게 있어 글을 올립니다. 8well chamber slide (nunc) 에 cell seeding 하여 사용합니다. control 포함해서 4가지 조건인데요 .. control 은 세포가 잘 붙어 있습니다. 아주아주 잘. 근데 2번째와 3번째 조건에서 보면, 세포가 없거나, 찌그러져 있거나.. 찢어져 있기도 하구요 !!그렇습니다. protocol 은요.대략, 1 cell seeding 하고 난 후에 24 시간 정도 지나, PBS 로 2회 washing2 3.5% PFA 로 30min/RT3 PBS 로 5min 2 회 washing4 0.2% triton x -100 15min/RT5 PBS 로 5min 3 회 washing5 1% BSA 로 1hr / RT 6 PBS 로 5min 3회 washing7 primary Ab 4℃ O/N8 PBS 5min 3 회 washing9 secondary Ab 1~2hr RT10 PBS washing11 DAPI stain for 15 min 12 PBS washing 13 mounting solution 하고 cover glass 덮고, RT 에서 말립니다. 이게 제 protocol 이구요 !!control 과 조건 1은 대체적으로 정말 잘 붙어 있습니다. 그런데 조건 2와 3은... ㅡㅡ;; 사진은 조건 2 사진인데요; 세포 있는부분 찾아 찍은것 밖에 없네요;;그래도 제가 분홍색으로 표시해 둔곳 보면.. 세포들 상태가 온전치 못한것을 보실 수 있을겁니다.도대체 무엇이 문제 일까요!!??
회원작성글 Ja_Park  |  2010.06.07
Q. coverslip mounting~!
안녕하세요. ICC 하면서 coverslip에 세포를 키우고 있는데요...mounting이 잘 안됩니다 ㅠ쓰는건 dako 꺼 쓰구요, vector 에서 나온 안티 블리칭 되는 것도 있는데 이건 잘 안 말라서핸들링하기 더 힘든 것 같구요..ㅠ저는 주로 조직 염색을 하다가 세포 염색을 하게 된 건데요..조직 염색시에는 마지막 washing 후에 조직을 거의 바싹 말려서 했었거든요.근데 coverslip을 클린벤치에서 바싹 말렸더니 물기가 불규칙하게 마르면서 뿌옇게 지저분하게 되더라구요..ㅠ이미지를 찍었더니 역시나 엄청 뿌옇게 된 부분도 있고 엉망입니다..ㅠ다른 분들은 보통 어떻게 하시나요^^;; 마르기 전에 coverslip 꺼내자마자 하시나요 ㅠㅠ??염색이 됐는데도 이런 문제 때문에 이미지를 얻을 수 없으니 더 속상하네요..ㅠㅠ좋은 방법 알려주세요^^
ICC  |  2010.06.03
Q. immunocytochemistry 가 잘 안되요 ㅠㅠ 첨부파일
지금 brain을 culture하고 있는데요...ㅠ컬쳐하고 한 일주일쯤 있다가 세포염색을 해 봤는데특정 세포를 보고 싶어서 (purkinje cell) 특이항체인 calbindin으로 염색을 했거든요.그런데..모든 세포에서 시그널이 뜹니다;;negative로 background는 완벽하게 잡았구요, 조건 맞춰서 찍는데사진에서 보이는 것처럼 모든 세포에서 시그널이 뜰 수가 없는데..;; 자꾸 모조리 다 떠요;그리고 황당한 건 astrocyte 마커인 GFAP도 역시 주루룩 다 뜬다는 거예요;안티바디 간섭인가 해서 슬라이드 하나당 안티바디는 한종류만 썼구요.왜 그런 걸까요;? 지금 1: 500으로 염색을 했어서 이걸 1:1000이나 이렇게 써볼까 하는데좋은 해결방법이 있으신 분 알려주세요 ㅠ전 블락킹은 goat serum으로 상온에서 2시간 하구요, 1차는 4도 overnight 2차는 1:1000으로 상온 한시간 붙입니다.
궁금  |  2010.04.30
Q. immunocytochemistry실험에 대한 질문입니다.
immunocytochemistry실험에 대한 질문입니다. primary culture한 astrocyte를 immunostaining할려고 하는데, antibody로 GFAP과 S100 antibody중 하나를 사용하려 합니다. 이 두 antibody 모두 astrocyte marker이긴 하지만, 둘 중 어떤 antibody가 좀더 astrocyte를 specific하게  detect할 수 있는지 알려주세요~
astrocyte  |  2010.04.21
Q. 세포 염색용 메틸렌 블루 좀 알려주세요..
세포 염색용 메틸렌 블루 용액을 만들어야 하는데요...프로토콜 보니가 1차로 메탄올 fix를 하고메틸렌 블루로 staining을 하라고 하는데메틸렌 블로는 어떻게 녹이는지...실험실에 보니까 methylene blue trihydrate 가루가 있더라구요.이거 쓰면 되나요?? 그리고 어디에 얼만큼 녹이는지요??methanol에 녹이는지... 아니면 물에 녹이는지...invasion 실험에 쓰는건데 좀 알려주세요
연구인  |  2010.04.01
Q. 핵인에 관하여
안녕하세요.lentivirus를 이용해서 transcription factor를 세포 내로 도입했고요.이 세포를 제가 오늘 세포 염색을 했는데요.원래 이 단백질(endogenous)은 transcription factor라서 DAPI가 거의 유사하게 염색이 됩니다.헌데 오늘 결과는 좀 특이 했습니다.DAPI가 염색된 핵 부분 중에서도 작은 원 모양으로 일부분 (DAPI 하나에 하나씩만) 염색이 된겁니다. 핵인 같이 보입니다. TF 가 핵인에 염색이 될 수도 있나요?lentivirus가 잘 못 삽입이 되서 그건가요?선배님들의 고견이 절대적으로 필요합니다.부탁드립니다.
초보  |  2010.01.05
Q. 세포 염색할 때 고정하는 방법에 관하여 질문
안녕하세요? 크리스마스다 연말이다 하여 어수선한데....뭔가 결과를 내야한다는 중압감에 자리를 지키고 있는 학생입니다.오늘 질문은....세포 염색할 때 고정하는 방법이 다양한것 같습니다.Et-OH, Met-OH, paraformaldehyde, 혹은 Cytofix/Cytoperm이라고 하는걸 사용하더군요.염색을 위해서 가장 좋은 고정 방법은 어떤거죠?이렇게 방법이 다른건 세포에 따라서 달리 사용하는건가요?또 permeable 시키는 시약으로 어떤것이 좋을까요?혹 좋은 방법이나 사용하시는 농도 좀 알려주세요.많이 많이 알려주시면 감사드리겠습니다.Happy Holiday
초보  |  2009.12.24
Q. trypan blue staining 시
세포수를 세는데 문제가 생겼습니다...플레이트를 관찰할때는 세포수가 많아 보이는데 트립판 블루로 염색후세포수를 세어보면 확실하게 적은 수의 세포수가 관찰됩니다..셀라인의 세포수를 셀때는 몰랐는데... 프라이머리 세포를 배양후 세포수를 세어보면 터무니없이 적습니다..저희 방에서 항상 트립판 블루를 4도씨에 보관하구 써왔는데요..지금 보니 실온보관에 사용기간두 6개월 정도 지났더라구요..혹시 이런 것들이 생세포 염색에 영향을 미치는 것일까요?기본적인것을 물을때가 없어서 답답하네요..잘 부탁드립니다.
흠  |  2009.12.04
Q. immunocytochemistry 할 때 fixation..
Immunocytochemistry를 처음하는 초보입니다.. neuron에서 보려고 하는데요..protocol을 보던 중에 fixation을 4도시에서 O/N 하거나, RT에서 15분 하는 것으로 나와 있던데요..이때 사용하는 PBS나 4%PFA를 Warming 한 후에 사용 해야하는 것인가요?;; 차가운 상태에서 사용하면 왠지 스트레스 받아서 cell 모양이 변할 것 같아서요.. 그런데 warming 한 후에 사용하라는 protocol은 못본것 같아요..^^; 그리고 실험을 다 하고 사진을 찍어보면 neuron들이 다 끊겨 있고 그러던데 cell 모양 유지하는 tip 있으시면 알려주세요~~~~~!!그럼..고수님들 도와주세요.. ^^;;
IF..  |  2009.09.09
프로토콜 Immunohistochemistry protocol (Abcam) 첨부파일
Abcam의 참고자료에 있는 IHC protocol입니다.처음하시는 분들은 한 번 읽고 시작하시면 실험방법과 배경에 대해 좋은 공부자료가 되는 것 같습니다.
회원작성글 sm226  |  2009.08.28
Q. Immunocytochemistry Fixation
Immunocytochemistry  fixation 과정에서4% formaldehyde를 써서 실험을 하고 있는데요.(보통은 Paraformaldehyde를 쓰는 걸로 알고 있습니다.)이 차이가 실험결과 상에서 큰 영향을 미치는 지 알고 싶습니다.그리고  PBS로 washing하고 fixation하는 과정을 마치고 나면잘 붙어 있던 cell들이 약간은 불투명한 희미한;;?) 얇은 층처럼 떨어져서fixation 용액 위로 붕 떠버립니다.ㅡㅡ;paraformaldehyde를 쓰지 않아서 일까요??
회원작성글 ICC  |  2009.07.17
Q. Extracellular region immunocytochemistry..
transmembrane의 extracellular  region을 immunocytochemistry 방법으로 staining 하려고 합니다. 4%PFA로 fixation 한 후 permeabilization 과정만 빼고 하여도 cytosol 부분에 signal이 보이는데요.. fixation  전에 live 상태에서 1st Ab를 처리하는 방법이 있다고 하는데 어떤 방법인지 아시는 분 조언 부탁드립니다.
antibody  |  2009.06.25
이전  01 02 03 04 05 06 07 08 09 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고