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『2022 하반기 연재 지정·자유 공모』 22개 주제에 대한 연재자 모집
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 카테고리: 전체
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. 탄소 포집 실험 대체 시약 추천
탄소 포집 관련 실험을 진행하려고 합니다. 아민 - 하이드로젤 흡수제와 같은 것을 제작하려고 하는데 아민 수용액과 하이드로젤 가루를 구할 방법을 찾지 못하였습니다. 위의 두 물질을 구할 방법이 있거나 아니면 위 두 물질 대신 사용할 수 있는 시약들이 있을까요..?? 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 hs2005  |  11.19
Q. 멀티채널피펫 연습 어떻게 하시나요?
MTT assay나 genotyping와 같이 96-well plate를 사용하는 실험 시 결과를 확인해 보면 96-well plate 전반적으로 결과가 잘 나온 경우도 있고 특정 열의 결과들이 안 좋은 경우도 있습니다. (예를 들어 B열만 OD값이나 peak가 낮게 나오는 경향들이 보입니다.) 아무래도 제가 멀티채널피펫을 사용하는데 문제가 있는 것 같다고 느끼고 있어 멀티채널피펫은 어떤 식으로 연습을 하는 것이 좋을지 궁금합니다. 단일채널피펫 때처럼 D.W를 parafilm 위에 분주하여 물방울 크기를 비교하는 방법 뿐에 없는 건가요? 8개가 고르게 안 끼워져 있을 경우엔 용액의 높낮이로 확인이 가능하다지만 오차가 작아야 하는 실험에서는 어떻게 해야 될까요.. 뭔가 멀티채널피펫으로 피펫팁을 끼울 때 요령 같은 게 있는 건가요? (피펫팁을 끼우고 손으로 하나하나 피펫에 단단하게 고정되도록 눌러주는 작업?을 해도 괜찮은 건가요?)
회원작성글 어려운게많아요  |  11.19
Q. 실험초보 학부생 cell culture 실수..ㅜ
안녕하세요 학부생 신분으로 실험을 배우고 있습니다 배양 진행 중 새 60파이 디쉬에 10% DMEM 3400ul과 셀 600ul을 넣어 용량 4ml를 맞추려 했는데 제가 DMEM을 3000만 깔았는지, 제대로 깔았는지 기억이 불확실합니다ㅜ..만약 3000만 깔았을 경우에 셀이 죽고 실험이 망하게 되나요..이런 경우는 처음이라 막막하네요ㅜㅜ글고 너무 기초적인 질문이라 부끄럽네요
회원작성글 나는왜이럴까  |  11.19
Q. cell culture passage 시 실수로 셀현탁액에 PBS가 섞인것같습니다
실험이 끝나고나서 뒤늦게 알아차렸는데 셀을 회수해서 셀현탁액 20ml 을 만들었는데 알고보니 그걸 1x pbs 2ml 이 들어있던데에 넣어서 만들었고 그 셀현탁액을 1.5 ml 떠서 total 20 ml 로 T75에 셀을 계대를 했네요... 결국에는 PBS 는 아마 20 ml 중에 많으면 200 ul 정도 있을거같구요...  내일 셀을 보긴할건데 셀에 큰 영향이 있을까요??? 셀을 다룬지 얼마안되서 걱정스러워서 질문남겨봅니다 ㅠㅠ 
회원작성글 지투  |  11.18
Q. NF-kB p65 항체
초보 실험실생입니다. 이번 WB 실험을 하면서 p65 항체를 phospholylation/total을 봐야해서 항체를 알아보고 있는데, polyclonal로 찾고 있습니다. sample은 mouse입니다 인산화 부위가 다른게 많던데 어떤 항체를 봐야하는지와 이유까지 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 문어체  |  11.18
Q. 암세포 실험 중 사고
오늘 4T1-Luc(murine triple-negative breast cancer) line으로 BALB/c에 tumor inoculation을 하던 도중, 암세포가 담긴 주사기에 손가락 끝이 깊숙이 찔렸습니다. 2분 간 혈액을 짜내고 흐르는 물에 씻은 뒤 연고를 발랐으나, 암세포가 체내 주입되었다는 생각에 너무 불안하여 질문 드립니다. ATCC의 설명에 의하면 "The tumor growth and metastatic spread of 4T1 cells in BALB/c mice very closely mimic human breast cancer."이라고 나와있어서 4T1-Luc 체내 유입 시 tumorigenesis에 대한 우려가 큽니다. 그리고 4T1-Luc는 lentiviral vector를 이용한 cell line이라 viral infection의 가능성 또한 있지 않을까요...? 조언 부탁드리겠습니다...
회원작성글 리나칼루세프  |  11.18
Q. lentivirus 처리할 때, polybrene 2달 지난 것 사용했는데요. 문제가 있겠죠?
세포에 lentivirus 1 mL, 배지 1 mL을 넣고 10 mg/mL polybrene을 2 uL 넣고 인큐베이터에 넣고 퇴근했는데요. 생각해보니까 polybrene이 2달 지난거였어요. 지방 내려가야 해서 다른 사람한테 부탁하고 퇴근했는데요. 문제 발생할까요?ㅠㅠ 참고로 polybrene은 섭씨 -20도에 보관했었습니다.
회원작성글 아스널  |  11.18
Q. 면역형광염색 IF 1차, 2차항체 확인 부탁드립니다 + 관련질문
3종류의 다른 단백질의 발현을 확인하고 싶어서 triple로 IF를 진행하려고 합니다.  처음 해보는거라 불안한데 물어볼 선배가 없어서요ㅠㅠ 도움 부탁드려요.   <primary antibody> 1. Mouse 유래 2. Rabbit 유래 3. Gout 유래   <secondary antibody> 1. Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 488 2. Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 594 3. Donkey anti-Goat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 647   + 추가적으로 질문드립니다. 위와 같이 염색진행 후, 동일한 sample에서의 ER이나 mitochondria와 같은 subcellular 구조를 염색해서 단백질 위치를 확인하려고 합니다.  연구실 항체리스트를 보니까 subcellular marker의 primary antibody가 전부 rabbit 유래인데, 위의 2번째 단백질 primary antibody를 rabbit 유래를 썼는데 또 다음 염색에서 동일한 host꺼를 사용해도 되는지 궁금해서요ㅜㅜ 사용해도 된다면, secondary antibody 선택 시 alexa 488, 594, 647을 제외한 색의 anti-rabbit 항체를 선택하면 되나요?
회원작성글 세포실험초보입니당  |  11.18
Q. 동물세포DNA를 e.coli로 cloning하기
말그대로 동물세포의 DNA를 E.coli로 transformation? transcription? 싶은데 intron을 어떻게 제거해야하나요?   RNA 중합효소와 역전사 효소를 동시에 넣고 반응시킨 후 gel puri하면 exon만 있는 DNA를 얻을 수 있을까요?
회원작성글 SHY  |  11.18
Q. 단백질 인산화 분석 업체 (LC-MS) 추천해 주세요
안녕하세요. 마우스 뇌 조직에 특정 단백질의 인산화를 분석하려 하는데, 시판되는 해당 단백질의 인산화 항체가 없어, LC-MS를 통해 인산화 분석하려 합니다. 이러한 실험을 대행해주는 실험실이나 업체를 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 bluehawk  |  11.18
Q. oxygen dissociation curve 측정기기 문의
안녕하세요. 헤모글로빈을 이용해 실험을 하고있는 대학원생입니다.   헤모글로빈의 oxygen equilibrium curve를 얻어야 해서  TCS hemox analyzer를 구매해야 하는데요,   아무리 뒤져봐도 TCS 한국 지사가 나오지 않아서요, 혹시 이 기기를 사용중이신 분들은 어떻게 구매 하셨는지 여쭙고자 질문을 남깁니다.   또한, 혹시 HEMOX analyer가 아니더라도 hemoglobin의 oxygen dissociation curve를 그릴 수 있는 기기가 있다면 알려주시면 감사하겠습니다!!
회원작성글 잔망루피.  |  11.18
Q. GC Oven과 Inlet[capillary]의 상관 관계
안녕하세요. 다름이 아니라 GC 사용하고 있는 유저로서 질문 사항이  있습니다. GC에서 Oven은 컬럼, 시료 주입기 및 검출기의 각 부분의 온도 를 조정할 수 있는 항온 장치로 쓰이며, 주로 온도(tem.)와 샘플 분석 시간(time)에 영향을 미친다고 알고 있습니다. Inlet[capillary]는 샘플 주입의 전반적인 carrier gas나 기화 온도(tem.), 유량(flow),분할 or비분할 주입 (Split ratio),pressure 등 다양한 주입관련 기능을  가지고 있다고 알고 있습니다. 결정적으로 각각의 critical error를 찾아내야하는데 갑자기 두가지의 상관관계에 대해서 자세히 알고 싶어서 질문 드립니다. 혹시 그외에도 critical error에 관련하여 OVEN, Capillary 및 FID에 대해  서술해주실 수 있는 분 있으면 답변 부탁 드립니다.    
회원작성글 됴엥  |  11.18
Q. 실험실 임대할 수 있는 곳이 있을지 문의드립니다.
안녕하세요. 화학반응 실험을 하려고 하는데, 해당 실험을 할 수 있는 실험실을 찾고 있습니다. 실험실 임대할 수 있는 연구원 혹은 대학교 연구실 아는 곳이 있으시면 도움 부탁드립니다. 필요 설비는 흄후드만 있으면 될 것 같습니다.   감사합니다.
회원작성글 셍송  |  11.18
Q. Theta replication 원리
Theta replication에 대한 기본적인 개념 혹시 설명해주실 수 있을까요? 논문을 찾아봐도 정확하게 나오지않는데.. rolling circle mechanism보다 좀더 stable하다 정도...
회원작성글 오월준  |  11.18
Q. His tag purification 실패 원인
안녕하세요 현재 3학년 2학기째 재학중인 학부연구생입니다 현재 BL21(DE3)균주에 형광단백질 (mCherry와 다른걸 붙여 만든 단백질입니다 교수님께서 만드신거라 자세한 사항은 생략하겠습니다) 플라스미드를 넣은 후 키워 lysis 한 뒤 protein extraction을 하였습니다 Induction도 잘 되었고 protein 추출 후에 UV램프로 확인하였을 때도 잘 발현된 것을 확인 하였습니다 그 후 His-tag purfication을 통해 단백질 정제를 진행하였는데요 문제는 Binding buffer, wash buffer에 단백질이 거의 추출되고 Elution 후에 단백질에는 형광도 발현되지 않고 브래드포드를 통해 확인한 결과 농도 또한 낮았습니다 현재 레진은 thermoscience 제품을 사용하고 있습니다 카탈로그 넘버는 88221입니다 buffer의 조성의 경우는 제품의 프로토콜 그대로 진행하였으며 그전 LGG protein을 추출할 때도 프로토콜대로 진행하였을 때 잘 되었는데 이번에 LGG 또한 Elution이 되지 않았습니다 다른 선배들이 뽑으셨을 땐 프로토콜 그대로 했을 때 문제가 없으셨다고 해서.. 저의 손의 문제거나 버퍼를 잘 못 만든것으로 추측을 하고 있습니다 혹시 buffer의 이미다졸 양을 낮추면 제대로 Elution이 될까요? binding 버퍼는 10mM의 이미다졸, wash 버퍼는 25mM의 이미다졸, Elution 버퍼는 250mM의 이미다졸을 사용중입니다 빨리 정제를 해야 다음 스텝으로 넘어갈텐데 마음이 조급하네요ㅠ ㅠ ..
회원작성글 응앵애  |  11.18
Q. RNA 추출이 되지 않는데 제 실험에 뭐가 문제인지 봐주시면 정말 감사하겠습니다..
안녕하세요. RNA 추출 관련해서 궁금한 점이 있어 댓글남깁니다. 먼저 두서없이 긴 질문 드린 점 죄송합니다. 현재 RNA 추출을 해야하는데, RNA 추출이 실험의 처음 단계이고 이걸 넘어가야 다음 단계를 넘어갈 수 있는데 몇 번을 해봐도 절대 나오지 않는 난황을 겪고 있지만, 실험실에 RNA 추출하시는 분이 현재는 계시지 않아 도움을 요청할 곳이 없어 너무 힘들어 도움 요청해봅니다.. 제가 지금 stool suspension에서 RNA를 추출하고 있는데 몇 번을 해봐도 항상 RNA 추출이 안되더라구요.. Nanodrop 측정 결과 A260/A28은 3부근이 나오고, A260/A230은 0.19부근이 나옵니다. 또한 agarose gel로 측정했을 때도 밴드가 보이지 않습니다. agarose gel의 경우, RNA가 600bp가 넘으면 agarose gel로도 확인이 가능하다고 하여 일반 DNA agarose gel 만드는 방식으로 만들었으며, loading은 RNA(측정결과 110 ng/uL) 1uL, 6x loading dye 1uL, DEPC treated water 1uL를 섞어 loading하였습니다. Nanodrop 결과와 agarose gel 결과를 통해 RNA가 깨졌거나 아예 추출되지 않았다는 것을 알게 되었는데 실험 과정 중 어떤 부분이 문제일지 여쭙고 싶습니다. 먼저 사용하는 샘플인 stool suspension은 다른 연구실에서 받은 것으로, 10^6 pfu/mL의 농도를 가졌으며, 전처리 후 filter까지 내린 액체 상태의 샘플을 보낸 기준으로 3시간 후에 받아 바로 -80도에 aliquot하여 사용할 때마다 하나씩 꺼내서 사용합니다. 저희 연구실의 경우, DNA, protein, E. coil 등을 취급하며 공간이 넓지 않아 RNA 를 추출할 때는 클린벤치를 이용하였습니다. 먼저 실험하기 전, tip과 ep-tube, 핀셋은 auto clave로 가열멸균하여 RNA용으로 따로 만들었으며, 시약을 제외한 사용할 모든 기구들읕 70% 에탄올로 닦아준 후 클린벤치에 넣고 1시간동안 uv를 쬐어 소독을 시켜주었습니다. 그런 후 사용할 시약들은 에탄올로 소독하여 넣어준 후 실험동안에는 클린벤치를 절대 나가지 않았습니다. 또한 추출하는데 사용하는 제품은 Qiagen의 viral RNA mini kit입니다. 처음 제품을 받아서 프로토콜에 나온대로 310 ug의 carrier RNA에 AVE 버퍼(lysis용)를 310 uL를 넣어주어 냉동 시킨 후, 5.6 ug씩 aliqout한 것을 사용 전 용해시켜 AVL 버퍼 560 uL에 섞어준 후, 이 용액에서 560uL를 따 140uL의 stool suspension과 섞은 후 10분 간 반응시켜주었습니다. 그런 후 560 uL의 99% 에탄올을 섞어 볼텍싱 후 컬럼을 돌려 만든 (stool suspension+AVL+에탄올) 용액을 2번을 걸쳐 컬럼에서 걸러주었습니다. 그런 후, AW1 500 uL를 넣어 1분동안 6000rpm으로 버퍼를 걸러 주었고 다음으로는 AW2 500 uL를 넣어 13000 rpm으로 3분 간 걸러주었습니다. 마지막으로 kit에 있는 AVE 버퍼를 넣고 1분간 배양하여 용출해주었습니다. 또한 이 결과가 잘 나오지 않아 연구실에서 예전에 만들어 놓은 DEPC treated water를 용출 용액으로 사용하기도 하였습니다. 파이펫을 잡는 손은 최대한 샘플에 손을 닿지 않도록 주의하며 실험을 할 때는 꼭 마스크를 씁니다. 전반적인 제 실험과정은 이러한데 RNA 추출의 nanodrop 결과는 할 때마다 A260/280은 3부근이, A260/A230은 0.1~0.4부근이 나오는데 도대체 제 실험 과정에서 어떤 부분이 문제일까요..?
회원작성글 uiouio  |  11.18
Q. cell seeding 계산법
안녕하세요. 이번에 실험실 들어간 완전 쌩초보입니다 다름이 아니라 cell counting 후 seeding 계산법을 모르겠어서요..   셀 펠렛을 4ml의 배지로 풀어준 후  20ul 트리판 + 20ul 셀 섞어 셀로미터 미니? 로 측정한 결과 T= 395 2.33x10^6 15 L= 377 2.22x10^6 15 D= 18 1.06x10^5 13.6 V= 95.4% total= 8.88x10^6 이라는 값이 도출됐는데요 (원하는 농도?값?은 1x10^6입니다.) 프로그램이 계산해준대로 여기서 450ul 따서 T175 flask에 seeding후 남은 7.88x10^6 개는 stock했습니다. 편리를 위해 7.88 뒤 0.88 의 값만큼 버리려고 하는데 0.88의 값을 계산 못해서 도와주셨어요.. ㅜㅜ 쌤 말씀으론 0.88이면 396ul 이니 그만큼 버리라고 하셨는데 어떻게 해야 396ul의 값이 나오는지 모르겠습니다.. 사실 저 위에 T175 flask에 450ul 넣는것도 컴퓨터가 값을 계산해줘서 아는거지 어떤 공식으로 도출되는 값인지 모르겠어요.. 도움주실 똑똑이 연구원분들 부탁드립니다...ㅠ_ㅠ
회원작성글 짬냥이  |  11.18
Q. 세포 seeding 양 계산
세포를 seeding 할때요 카운팅을 하고 seeding을 하면 양이 파악이 되는데... 카운팅 안하고 예를 들어 10cm dish에 1:9로 seeding 한다고 하면 배지 9ml에 cell 현탁액 1ml 넣으면 되는걸로 아는데, 응용이 잘 안되서요... 예를 들어 1:4로 seeding 한다고 하면 배지를 얼마, cell 현탁액을 얼마나 넣어야 하는지 계산법 좀 부탁드리겠습니다... 
회원작성글 medi92  |  11.18
Q. 세포 배양 및 카운트에 대한 질문드립니다.
안녕하세요. 세포 계대하려고 세포 카운팅을 했는데요. HepG2 cell line을 카운팅 해서 4칸에 550개가 나왔고요. 27T Flask에 0.8 x 10^6으로 seeding 했는데요. 계산하면 27.5 x 10^6이고요. 0.8/27.5로 계산해서 30 ul을 5ml 배지에 첨가 했는데 맞나요? 그리고 10cm Dish에는 유지용으로 seeding을 했는데요. 10ml 배지에 200ul을 첨가 했는데 이건 몇대 몇으로 깔았다고 봐야하나요?... 추가적으로 HepG2 cell line doubling time이 48 H이라고 하는데 48시간 동안 더블링이 된다는건지 설명 부탁드립니다. 감사합니다. 
회원작성글 medi92  |  11.18
Q. 3D-DART DNA structure modeling 설치 관련 질문입니다. 첨부파일
3D-DART라는 DNA structure modeling을 설치하려고 합니다. https://github.com/haddocking/3D-DART 위의 사이트에 설치 관련한 방법이 나와있는데 파이썬으로 설치해야하는 것 같아 파이썬을 아는 IT 관련 지인에게 설치해달라고 했는데 어렵다고 하시네요 ㅠㅠ 혹시 이 프로그램을 사용하시는 분 계시면 설치하는 방법에 대해 알려주실 수 있을까요 ㅠㅠ !
회원작성글 Woneee  |  11.18
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