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Q. retinoic acid 응결 현상 해결방법
안녕하세요. 지금 retinoic acid를 이용해서 SH-SY5Y 분화 실험 셋업중인 석사 1학기차입니다.   지금 5mM retinoic acid stock을 만들어둔 상태이고요. (DMSO에 녹였습니다!) media(DMEM)에 희석시켜서 최종 10uM 사용하려고 했는데 RA가 잘 안녹고 떠다니더라구요 ㅠㅠ  그리고 최대한 vortexing하고 처리해봤더니 cell도 다떨어져 죽었습니다.. 같은양의 DMSO만 넣었을땐 안죽는걸로 봐서 RA 때문인거같은데.. 혹시 SH-SY5Y분화실험을 해보셨거나 RA를 완벽하게 녹이는 법을 알고계신분 있을까요..?
회원작성글 청포도맛 망고  |  11.24
Q. assembly PCR
안녕하세요 assembly PCR이 너무 안되어 질문 올려봅니다... 두 gene을 10cycles을 돌려 assembled fragment를 확보하고(gel extration도 이용해봄) 다시 primer를 넣어 amplify를 시도하는데 계속해서 원래 두 개의 gene이 분리되어 나옵니다.. method의 문제로 일어나는 일 일까요?  첫번째 사진이 10cycles 후 사진이고, 두번째는 첫번째의 네모박스 사이즈의 dna를 gel extraction으로 분리 후 primer와 함께 amplify 한 사진입니다      
회원작성글 CYS  |  11.24
Q. 동물세포주 보관온도에 대한 정보를 공유부탁드립니다.
동물세포주 보관시 LN2 탱크 Vapor 상태로 보관을 하게되는데요 LN2 탱크의 제조사도 -180ºC로 Vapor공간의 온도가 유지된다고 설명하고 관리되어오고 있는 기준도 -180ºC로 관리를 하고 있습니다. 세포주 용기 제조사에서는 오염이나 기타 문제로 인해 Cryogenic vial을  액체질내 내에 보관은 권장하지 않으며, 액체질소탱크 제조사 역시 액체질소내에 제품 보관하는 것을 권장하지 않습니다. 그렇다면 동물세포주 보관온도는 몇ºC에서 보관하는것이 좋은지, 그에 따른 근거 기준은 무엇인지 궁금합니다. 알고계신분이 계시다면 알려주세요. 많은도움이될것같습니다. 감사합니다.
회원작성글 ASJN  |  11.24
Q. 대장균 한도시험, 대조시험 어디까지 해야하나요?
식품회사 미생물QC로 근무하고 있습니다. 한 샘플이 대장균 한도시험에서 EC배지 양성이 나왔습니다. 동시에 EC배지에 멸균희석액 넣어서 대조시험했고 음성나왔는데 이 다음 시험 EMB에 접종할때도 멸균희석액 넣은 음성나온 EC배지를 따서 대조시험 해야하나요?   생각해보면 이미 음성이 나온걸 가지고 EMB에 또 긁자니... 뭔가 좀 이상하고, EMB자체가 무균이라는 대조시험은 해야할 것 같기도 하구요.   다른 병원성미생물 시험은 보통 증균배양액을 대조로 분리배양배지에 접종을 해서 무균을 확인하는데   대장균 한도시험에서 EMB에도 EC배지(멸균희석액,음성나옴)를 접종해야할까요? 아님 다시 멸균희석액을 접종해야할지, 그것도 아니면 그냥 접종안한 배지를 같이 배양? 아니면 대조시험을 안해도 되는건지... 헷갈립니다. 문서로 기록을 남겨야하는 부분이라 다른 분들은 어떻게 하는지 궁금하네요.
회원작성글 yeasting  |  11.24
Q. R2A와 Marine 배지의 차이점이 무엇인가요?
해수 미생물을 접종하려고 하는데 R2A broth 배지로 스탁 만들어져 있던 걸 R2A 배지가 없어서 Marine 배지에 다시 접종해야 한다고 하네요. 이전에는 R2A 배지와 Marine 배지 구분해서 사용했는데 둘이 어떤 차이점이 있을까요?
회원작성글 실험실애기  |  11.24
Q. 해양식물플랑크톤을 이용한 macromolecule(lipid) production
 안녕하세요. 해양학을 공부하고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 해양식물플랑크톤을 이용해서 거대분자 중 지질에 초점을 맞추어 production 실험을 진행하기 위해 공부중인 상황입니다.  그런데 이에 대한 논문을 찾는 과정 중에 어려움을 느껴 질문드립니다.   phytoplankton macromolecule production, phytoplankton lipid production 등 다양한 키워드를 활용해서 검색을 해보았지만 원하는 논문이 잘 나오지 않았습니다. 실험 method 부분이 자세히 서술되어 있는 논문을 찾고 싶은데 어떻게 검색을 하면 원하는 논문을 좀 더 잘 찾을 수 있을까요?  해당 논문을 검색할 수 있는 방식이나 혹시 추천해주실 만한 논문이 있으면 추천해주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 말랑복숭아  |  11.23
Q. Rat PK 문의
현재 약물 A를 분석법 셋업 후 Rat PK 진행 중에 있습니다.   PO 부형제는 MC+0.05%Tw20(Sonication/vortexing)으로 진행 하고 있습니다.   예비 시험을 통하여 대략 지속적으로 Cmax 1000ng/mL이 나왔고, 본 시험 진행 하였습니다. 본 시험 결과 Cmax 1ng/mL 수준으로 확인이 되었습니다. 이후 반복 시험을 진행 하였지만 1ng/mL이상이 나오지 않고 있습니다.  동물 담당자도 지속적으로 반복 진행 하였으며, 혹시 몰라 다른분에게 진행 부탁을 하였으나 결과는 낮게 측정이 되고 있습니다. 분석 부분에서는 직선성을 지속적으로 확인 하였고, stock solution도 다시 만들었지만 분석상의 이슈는 없어 보입니다. 근데 IV는 잘 나옵니다. ㅠㅠ   정리: IV 투여 시 이슈 없음 PO 투여시 대략 1/1000으로 감도 저하 관련 소모품은 다시 조제 하였습니다.   관련 하여 혹시 문제가 될만한 내용이 있을까요?   답변을 주실분이 계시다면 감사하겠습니다. ㅠㅠ    
회원작성글 초심자  |  11.23
Q. cDNA 합성에서 헷갈리는 부분이 있습니다.
RNA template에서 oligo dT나 random hexamer와 Reverse transcriptase를 사용해서 RNA-DNA helix를 생성하고 RNase H를 사용해서 RNA만을 분해한 다음(ssDNA만 남고), DNA polymerase로 dsDNA로 합성해준다고 알고 있습니다. 그런데 여러 회사에서 파는 cDNA 합성 kit에는 왜 DNA polymerase가 없는 건가요? 그냥 RNA-DNA helix를 PCR에 사용하는 건가요?   그리고 저희 실험실에서는 Bio-RAD의 iScript cDNA synthesis kit를 사용하는데, 여기서 제공되는 RT는 RNase H+라고 하더군요 근데 RNase H는 RNA를 분해한다고 하는데, 그럼 최종 합성 prouct가 sscDNA로 남는걸까요?  
회원작성글 ziiion  |  11.23
Q. 세포 오염(Contamination)인가요?
  안녕하세요. 대학원 석사생입니다. 세포를 키우는데 어느날 곰팡이가 활짝 피어서 인큐베이터 뒤집고 다시 세포를 풀었는데 세포 상태가 좋지 않아 배지만 갈아주고 다음 날 확인하였습니다. 더 자라지 않고 세포 모양이 변한거 같은 생각이 듭니다. 또 자세히 보니 세포 주변에 이런 것들이 있어서 그런데 세포가 또 오염된걸까요? 원인을 알려주셨으면 합니다. 감사합니다.
회원작성글 댕댕박사  |  11.23
Q. (Cell Apoptosis)Annexin5 staining 후 4'C에 잠시 두어도 괜찮을까요?
  안녕하세요, 저는 현재 석사 반년차 대학원생입니다.   약물 처리한 Cell을 이용해 Annexin5로 staining 진행하고 Cell Apoptosis를 관찰하는 실험을 계획하고 있습니다.   Apoptosis가 진행되는 과정을 보는 것이라 되도록 빠른 시간 안에 측정하는 것이 좋다는 것은 알고 있지만,   해당 실험 계획한 시간에 다른 일정이 생겨, Annexin5 staining까지만 진행하고 실험을 잠시 멈춘 뒤(우선 테스트 겸 진행해보는 실험이라서요), 2시간 정도 뒤에야 재개할 수 있을 것 같습니다. 이때 Staining한 Cell을 Tube에 두고 4'C 냉장고에서 보관해두어도 될까요?   아니면 staining전 Cell pellet만 얻어서 냉장고에 넣어두고(약 두시간) 일정 마친뒤에 staining을 진행하는 편이 나을까요?   2시간 사이 Cell이 다 죽어버릴 확률이 커서 측정할 가치가 없다고 판단되면 그냥 실험 스케줄을 다시 잡아볼 생각입니다..Cell 상태가 어느정도 유지될 가능성이 있다고 하면 진행해볼 계획이구요.   관련된 실험 경험이 있으시거나 해답을 아시는 선배님들이 계시다면, 답변 주시면 감사드리겠습니다..!ㅜㅜ          
회원작성글 HEHE  |  11.23
Q. 클린룸 소독제 에탄올 vs 아이소프로필알코올
클린룸 관련하여 사용되어지는 70%에탄올과 70%IPA(아이소프로필알코올)에 대하여 차이점이 무엇인지 궁금합니다. 둘다 일반적인 소독제로 주기적으로 사용이 되어지고 있는걸로 아는데 균 소독을 하는데 있어 더 강하여서 IPA를 사용하게 되는건지 냄새가 강해 에탄올을 사용하는건지 등 특정한 차이점이 있는지 알고 싶습니다.
회원작성글 땡띵  |  11.23
Q. pvpp녹이기
열수추출물에 pvpp넣어서 녹여야 하는데 안녹아요 어떡하죠?
회원작성글 사즈아  |  11.23
Q. 녹말 표준곡선
분광광도계를 이용해서 녹말 표준곡선을 만들려고 하는데 표준화된 실험방법이 적힌 자료가 있을까요… 지난번에 실험했었는데 (녹말 농도를 달리 해서) 결과가 완전 이상하게 나와서 (흡광도 그래프가 들쭉날쭉.. 곡선 형태가 안 나와서요) 다시 해야 할 것 같아요.. 아직 고딩입니다 ㅠ
회원작성글 캐츠  |  11.23
Q. 물질 농도에 따른 부피 계산 질문드립니다.
  어떤 물질 stock 1mM 인데요. 이 물질을 0.1uM로 희석한 양을 500ul을 만들려고하는데요. 이 계산식이 맞는지 검토좀 부탁드립니다. working concentration / stocking concentration x total volume = stocking 물질을 얼마나 넣어야 하는지에 대한 volume 따라서, 1mM (=1,000uM) 이므로, 0.1uM / 1,000uM x 500ul = 0.05ul 맞나요??
회원작성글 medi92  |  11.23
Q. SDS-PAGE gel 유리파손
SDS-PAGE gel을 만들어 굳었는데 앞유리판 한쪽 모서리에 세로로 금이 갔습니다 샘플 로딩하는 well부분은 괜찮고 well옆 세로방향으로모서리에 금이 가버렸네요. 이 젤 샘플로딩해서  달려도 괜찮아요?
회원작성글 BBlue  |  11.23
Q. WB GST band
GST에서는 band가 검출되지 않고 actin에서만 band가 검출되었습니다. 아마 gst가 제대로 붙지 않았거나 단백질의 양이 많아서 그런거같은데 여기서 GST 쪽의 결과가 왜저렇게 어두운건가요? 또한 제가 생각한 이유 외에 GST가 검출되지 않은 이유가 있을까요?   시간내주셔서 감사합니다
회원작성글 물방울주먹  |  11.23
Q. 세포 (HUVEC) seeding 해서 starvation까지 과정 질문드립니다.
안녕하세요. 현재 HUVEC 세포를 키우고 있는데요. 실험에 들어가기 위해서 75T Flask에 0.9 x 10^6으로 seeding을 하였는데요. 다음날 세포 density를 확인하니까, 수가 너무 적다고 생각되서요. 75T Flask에 어느정도 HUVEC을 seeding 해야지 적절한가요? 추가적으로 세포를 seeding 하고 cell starvation을 주려고 하는데, 세포는 적어도 몇 % density를 가지고 있어야 좋을지에 대해 여쭤봅니다. 세포 실험을 배우고 있는 단계라 많은 가르침 부탁드립니다.
회원작성글 medi92  |  11.23
Q. HCP TMB solution, stop solution
HCP를 ELISA로 측정하고 있는데요 원래 protocol 상에서는 TMB 100 uL를 넣고 30 min incubation하고 stop solution을 100 uL 넣게 되어 있습니다. 근데 실수로 TMB를 150 uL를 넣었으면 후에 처리를 어떻게 하면 되나요? incubation time을 짧게 해야하는지, 원래대로 30분 하면 되는지? 그리고 stop solution을 150 uL로 넣는지 아니면 원래 대로 100 uL넣는지 모르겠어서요ㅠ   도움 말씀 부탁드리겠습니다
회원작성글 624039  |  11.23
Q. 전기연동 결과 한번 봐주세요 첨부파일
전기연동 실험을 진행했는데 결과해석부탁드립니다 ㅠ 혹시 실패한것이라면 요인은 무엇이 있을까요?
회원작성글 삐입삐  |  11.23
Q. 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하나요?
안녕하세요? 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하는지에 대해서  https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=253751&ksr=1&FindText=%ED%94%8C%EB%9D%BC%EC%8A%A4%EB%AF%B8%EB%93%9C%20%ED%9E%88%EC%8A%A4%ED%86%A4 에서 논문을 찾아 주신 것 같은데 (http://www.nature.com/gt/journal/vaop/ncurrent/full/gt2011127a.html)  이 링크가 깨졌습니다. 플라스미드 dna에도 히스톤 단백질이 결합하는지에 대해서 논문을 알 수 있을지요? 감사합니다.
회원작성글 땡땡이  |  11.23
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