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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-DNA
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Q. CE(capillary electrophoresis)는 시약이랑 기기 회사가 달라도 호환되나요?
CE(capillary electrophoresis)는 시약이랑 기기 회사가 달라도 호환되나요? 예를 들어 A사 sequencing 시약으로 준비하고 B사 CE 기기를 써도 dye 같은 게 호환이 되나요? 프로토콜 보면 자사 제품을 사용했다는 가정 하에 메뉴얼을 적었다고 해서 자사 dye만 호환되는지 여쭤보고 싶습니다.
회원작성글 땜빵  |  2022.11.15
Q. pcr template
안녕하세요 현재 대학원에서 인턴을 하고있는 학부생입니다. 문득 선배님들이 하시는 pcr을 보고 template을 어디서 얻어오는건가 궁금해서 질문을 남기게 되었습니다. gRNA, cloning 할 vector에 들어가는 유전자 부분을 가지고 오기위해서 primer를 제작한다는건 이해가 가는데 거기에 들어있는 유전자들은 어디서 가져오는건지 따로 primer처럼 주문해서 제작하는건지 여쭤봐도 될까요?
회원작성글 얼마안남았다  |  2022.11.15
Q. TOUCH DNA관련 질문드립니다.
학부시절부터 자주 도움을 받았던 곳이라 글을 남기게 되었습니다. 현재는 수사관련 일을하는데, 범죄자들이 잠시 만진 물체나 신체 등에서 cell을 채취하는 업무를 하다보니 워낙 소량이고 미검출 되는 사건이 많아 개선하고 싶은 생각을 자주합니다. 현장자체가도 굉장히 지저분할때가 많고, 채취하는 cell의 양도 소량이라 dna 검출이 잘되지 않는 경우가 많은데.. 혹시 오염물질들을 세척해내면서 cell의 purity를 높힐 수 있는 방법이 있을까요? Cell 을 깨지 않는 선에서 요청드립니다. 감사합니다.
회원작성글 like데미안  |  2022.11.14
Q. qPCR시 amplication plot 한번 봐주세요~
multiplex로 qPCR 진행했는데 연두색은 cy5-bhq2 / 빨간색은 fam-bhq1로 진행했습니다. 근데 연두색은 곡선이 매끄러운 반면, 빨간색은 곡선이 매끄럽지 않은데 왜 그런지 알고 싶습니다..ㅜㅜ 해결방안도요..! probe, primer 때문인가 싶어서 새로 희석해서 qPCR 진행하여도 빨간색은 계속 저렇게 곡선이 매끄럽지 않게 나옵니다,.,
회원작성글 soor  |  2022.11.14
Q. BL21(DE3)로 transformation 하는데 basal level과 leaky하다는게 무슨 뜻이죠?
Lac operator가 basal level이 높고 leaky하고 leaky한 basal이 있어야 lac이 작동한다고 설명하시는데 무슨 소리인지 모르겠네여. IPTG, ptac으로 충분히 translation이 가능한데 T7을 이용하는 이유는 basal 생성이 줄어들며 leaky해져서 잘 안 자라거나 죽어서, 원할 때만 induce하게끔 하기 위해서이고 basal level에서 inoculation하는게 어떻고 T7 사용할 때 basal level이 거의 안 만들어지고 pLysS T7 leak을 없애면 copy 수가 줄어든다는데 뭔지 모르겠네요 ㅠ
회원작성글 생물인간  |  2022.11.12
Q. PCR, vector
안녕하세요 초초초보 학부생입니다. PCR을 선배님께서 시키셔서 하고는 있는데 이해가 안가서요. circular 벡터에서 제가 원하는 site가 있는 부분을 얻울수 있게끔 primer를 제작해서 PCR을 돌리면 원하는 부위만 잘려지게 되는 원리인가요?
회원작성글 학헉학도생  |  2022.11.11
Q. TE buffer / elution buffer 차이
TE buffer가 salt가 더 낮으면서 EDTA가 들어가는걸로 알고 있는데 둘의 큰 차이가 어떤건지 알수있을까요? protocol에서 elution 또는 1xTE 보퍼를 넣으라고 하셔서요
회원작성글 학헉학도생  |  2022.11.10
Q. pcr annealing temperature 기준
pcr을 진행하려하는데요 denature temperature이 어느분은 95도 어느분은 98도로 진행하셔서요 보통 어느정도로 진행들 하시나요? 95도 와 98도로 올렸을때의 차이가 클까요?
회원작성글 학헉학도생  |  2022.11.10
Q. transformation spreading 후 incubation에 넣기 전에
Cloning 중에 Transformation 까지 다 하고 plate에 spreading 까지 다 하고 나서 incubation overnight 시키기 전에 상온에서 30분정도 있었는데 괜찮을까요???
회원작성글 쪼꼬만먼지  |  2022.11.08
Q. PCR 조건잡기중입니다. 첨부파일
 PCR 조건을 잡고 있어요. 논문에 있는 내용에서 조금씩 바꿔가면서 잡고있는데, 벽에 부딪힌 느낌이라 도움을 받고자 글을 씁니다. 각  PCR 조건은 사진에 적어두었습니다. 1) 잡밴드를 없애고, 단일밴드를 보기위해서는 무엇을 더 변경해 볼 수 있을까요? 지금 생각중인건, extantion time을 30초로 줄이는 것, denaturation time을 5분으로 줄이는 것.. 정도인데, 이렇게 줄인다고 잡밴드가 사라질지도 모르겠고..    2) exon 1같은 경우는 아~무런 밴드가 나오지 않아서 문제입니다..  왼쪽 사진 결과는 anaeling timp.을 58도로 올려서 진행했던 건데 안나오더라고요. 온도를 더 올릴지 내릴지도 고민입니다.   환자 DNA라서 이제는 횟수를 조절해야해서 같은 조성에 반응 시간만 바꾸는거라 시도를 못하고 있습니다. 조언 부탁드립니다.
회원작성글 MELLOW  |  2022.11.08
Q. 핵산을 검출하는 방법에 대해 여쭤보고자 합니다.
저희가 특정 DNA/RNA를 검출 하려고하는데요. 전기영동으로 사이즈 확인이 아닌, 형광현미경으로 특정 핵산의 검출을 하고 싶은데요. 어떤 방법이 있는지 궁금합니다.
회원작성글 medi92  |  2022.11.08
Q. mtDNA whole genome 을 overlapping 시퀀싱 할때 product size질문
안녕하세요 mtNDA whole genome을 읽으려고 primer를 제작중에 있는데요,, overlapping 해서 50-150bp 가량 겹치게 만들 예정입니다. 다른 overlapping pcr 질문에는 1차 2차 3차 로 진행하는 방법이 있던데  저는 그냥 1차로 해서 바로 짧은 서열로 읽으려고 계획중에 있습니다    primer를 짜면서 궁금한게 두가지가 있어서 글 작성 해봅니다,. 1. primer의 3'부분 3개에만 변이가 없고 5'부분쪽에는 한두개 변이가 있어도 primer가 잘 작동하는지?  추가로 ccc나 ggg 이런 서열도 안된다고 하는데 이것도 조심해야하는건지..? 2. 지금 돌려야 하는 샘플 수가 많아서 product size를  최대한 길게 하고 primer 쌍을 줄이고 싶은데 다른 질문들에서 보니까 한 프라이머쌍으로 1~3kb까지도 오버랩핑 으로 충분히 읽는다고 본게 있는데 선임꼐서는 800~1kb만 해도 훌륭한거라고 하셔서 ㅠ 그래도 이왕이면 시간을 좀 줄이고자 1kb에서 1.5kb를 product size로 해도 서열을 다 읽을 수 있겠는지,,? 혹시나 실패하면 2-3주의 시간이 손실되기 떄문에,, 확실하게 읽을 수 있는 product size내에서 최대한의 길이를 한번에 얻고자,, 자문 구합니다  답변 해주시면 감사하겠습니다  
회원작성글 무웅먕  |  2022.11.06
Q. DNA sequencing 업체 추천 문의
M사에서 DNA 시퀀싱을 계속 했었는데, 계속 잘못된 결과가 나와 물어보니 1000bp 까지 보장을 한다는 답변을 들었습니다. 그래서 1000bp 이상도 시퀀싱을 할 수 있는 업체가 있을까해서 이렇게 물어봅니다.
회원작성글 도솔이89  |  2022.11.05
Q. vector size가 왜 다르게 표시되죠?
https://www.abmgood.com/NDUFB7-Lentivirus-3165206.html#316520610296 위의 사이트에서 나오는 vector의 size를 보면 7681bp로 명시되어 있는데요, sequence를 보면 9336bp라고 나와 있어서 이해가 되지 않습니다. 벡터를 찾아보는 일이 처음이라 왜 이런지 알려주시면 감사하겠습니다...
회원작성글 Delos Aste..  |  2022.11.05
Q. 플라스미드가 있는 대장균
고등학교 학생인데요 학교에서 대장균 관련 실험을 진행하고 있는데 플라스미드가 있는 대장균인데 항생제 내성이 없는 대장균이 있을까요?
회원작성글 하느을  |  2022.11.04
Q. extracted mRNA로부터 만들어진 cDNA를 증폭할 때, 왜 primer를 forward reverse 두 개를 쓰나요?
안녕하세요.    Extracted mRNA로부터 만들어진 cDNA를 증폭할 때, 왜 primer를 forward와 reverse.. 이렇게 두 개를 쓰나요?   mRNA는 genomic DNA strand 중 single strand로부터 유래하기 때문에, 당연히 mRNA도 single strand로 존재하고, 그에 따라 당연히 해당 mRNA로부터 유래한 cDNA 또한 single strand로 존재합니다. 따라서 이 때, primer는 forward만 사용하면 될 것 같은데.. 왜 reverse primer까지 PCR 할 때 추가해야합니까? 어차피 추출한 mRNA에 대한 상보적인 sequence를 가진 strand가 없기 때문에 reverse primer는 넣어줘도 작용하지 않을 것 같은데.. 고수님들 고견 부탁드립니다.
회원작성글 엉덩이튼튼튼  |  2022.11.04
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Mr. S (필명) (연세대학교)
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