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BioLab 장재봉 교수
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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Cycle
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Q. 섬유아세포와 keratinocyte를 분화시킨 인공피부모델 관련질문입니다.
섬유아세포를 이용하여  Keratinocyte cell (피부각질세포)를 분화시켜 인공피부 모델을 만드려고 하는데... 논문을 읽을수록,..다양한 방법들이 나와서 어렵더라고요...혹시 이 실험을 해보신분 계시면 방법을 알려 주실수 있나요?
culture  |  2014.04.17
Q. TEM 사진 분석 방법에 관하여 궁금한 것이 있습니다.
안녕하세요.저는 우선 식물플랑크톤을 공부하고 있는 박사과정 학생입니다.다름아니라 요즘에 제가 공부하고 있는 식물플랑크톤의 생활사에 대해서 연구를 하고 있는데요,이 식물플랑크톤은 배양을 하면 보통의 영양세포와 다른 엄청 큰 세포가 나타나고는 합니다.그래서 SEM 을 찍어보았는데 SEM 상으로 얻을 수있는 정보가 상당히 제한적이라 TEM 을 찍어보려고 하고 있습니다.그런데 논문들을 보면 TEM 을 찍어 놓고 이 기관은 plastid 고 이 기관은 핵이고, 이런식으로 설명을 해놓지 않습니까?어떻게 TEM 을 찍고 분석을 하면 그 기관이 그 기관이라는 것을 알 수 있나요? TEM 사진 촬영 시 나타나는 형태적인 키를 가지고 기관을 식별할 수 있는 레퍼런스북이 따로 있는 건가요?TEM에 대해서 많이 알지 못하기 때문에 작은 조언이라도 도움이 될 것 같습니다. 많은 조언 부탁드립니다. 감사합니다. 
회원작성글 체다르  |  2014.04.07
Q. PI staining
primary MEF 세포를 이용해 PI staining -->FACS 를 수행하였습니다.control에서 대략 sub G1 2%, G1 40%, S 10%, G2/M 35%, polyploid cells 13%정도로 나왔습니다. 그리고 실험군 역시 비슷한 비율을 보였습니다.하지만 control샘플을 실험군과 비교해 보면, 실험군에서 세포 성장이 느려지는 것을 cell counting, wst1 assay 등으로 관찰 하였습니다.FACS 결과에 상응하게 apoptosis (TUNEL assay)에는 큰 차이가 없었고, primary 세포인지라 senescence가능성이 있어 b-gal staining, p16 qPCR 등을 수행하였으나 별 차이가 없더군요.그런데 좀 특이한 것은 FACS로 2n, 4n 두개의 peak을 관찰하였는데, 실험군이 control과 비교해 peak가 약간 퍼진 형태입니다. (좀 덜 뾰족하고 통통한 형태..) 하지만 정작 %를 계산해보면 앞에서 말씀 드린대로 두 샘플간 별 차이 없습니다.그래서 제가 궁금한 것은 1. 이러한 peak의 변화가 무엇을 의미하는지,2. 세포주기의 변화 없이 세포성장이 변화하는 경우가 있는지,3. 이것이 세포주기가 전반적으로 모두 느려지는 경우인지, 그렇다면 이러한 예가 있는지 궁금합니다.cell cycle 실험은 처음이라 알려주시면 감사하겠습니다.
Facs  |  2014.04.02
Q. cell cycle
cell cycle중 G2+M 은 뭔가요?G2는 분열준비기 M 은분열기인데 가운데 +의 의미를 모르게습니다 
k  |  2014.03.20
Q. 고등학교 생물동아리 실험
안녕하세요 현재고등학교 2학년 학생입니다. 저희 고등학교의 생물동아리 대표를 맡고있고,생물실험 주제를 정하려고 하다보니 어려움이 많아져서 질문하게되었어요.저희는 흔한 실험말고 대학입시에서도 면접 할 만한  눈에 띌 수 있는 실험을 하고싶습니다.단기와 장기로 나눠서 시작할껀데요. 실험할 주제를 추천해주세요.!! 부탁드립니다.
신지혜  |  2014.03.06
Q. 3T3 L-1 Seeding 한 뒤 conflunt 가 되기전에 분화가 된거 같습니다. 첨부파일
12well plate에 2.5*10^4/well 로 BCS로 처리하였습니다.2일 뒤에 conflunt가 되지 않았는데 cell이 지저분해서 1x PBS로 washing을 1회 진행 하였는데.,.3T3 L-1 Seeding 한 뒤 conflunt 가 되기전에 분화가 된거 같습니다. 이런 상태를 보인데 분화가 된건가요?저희 실험실에서 처음 진행을 하여서 잘모르겠네요...
과학자.  |  2014.02.28
Q. exosome이나 insulin에 대해서 연구하시는 분들께 질문있습니다.
안녕하세요 저는 지금 exosome과 insulin에 대해서 연구를 준비하고 있는 학생입니다.다름아니라 제가 이번에 연구를 시작을 하는 입장이라많이 아는 것도 없어서 연구에 어려움을 느껴 도움을 받고 싶어이렇게 글을 쓰게 되었습니다.1.  혹시 cell media에서 glucose의 양을 측정하는 것이 가능한가요?? 가능 하다면 어떻게 해야하는지 알고 싶습니다2. 저희가 일반적으로 사용하는 cell media (ex DMEM, MEM, RPMI등등)에서 glucose를 제거하는 방법이 있는지 알고 싶습니다.3. 췌장 b-cell과 정상 간세포 cell line이 현재 구할 수 있는 것이햄스터종의 HIT-15라는 췌장 b세포와 mouse의 NCTC clone 1469(정확하게 이름이 맞는지는 모르겠습니다)가 있는데 이렇게 햄스터와 마우스셀을 같이 사용해도 될까요???ㅠ4. media에서 GFP가 tagging 된 protein을 detection하고 싶은데 어떻게 해야할지 모르겠습니다이상 4가지에 대해서 혹시 하나라도 아시는것이 있으면부디 좋은 가르침 부탁드리겠습니다 ㅎ새해 복 많이 받으세요 ㅎ
회원작성글 2013  |  2013.12.29
프로토콜 Flow Cytometry (Cell cycle) 첨부파일
유세포분석을 통한 세포 주기 분석 개요 및 방법입니다.참고 서적http://book.interpark.com/product/BookDisplay.do?_method=Detail&sc.shopNo=0001100000&sc.dispNo=001018&sc.prdNo=213625547
회원작성글 G.P.Ts  |  2013.12.06
Q. cell cycle을 pi로 측정할때 ㅜㅠ.
안녕하세요 처음 cell cycle을 FACS를 찍으려고 알아봤는데여기에 보통 PI 와 triton x-100, RNase를 쓰더라구요..그래서 찾아봤는데 RNase의 종류가 다양하더라구요..혹시 RNase는 어느 용도로 사용하는 것을 사면될까요 ㅜ.ㅜsigma에서 찾아봤는데 종류가 여러가지인지라..아아 그리고 혹시 RNase를 왜 써야하는지도 좀..부탁드려용
실험생  |  2013.12.01
Q. Distant Disease Free suvival DDFS가 정확히 어떤뜻인지
Distant Disease Free suvival DDFS가 정확히 어떤뜻인지알고싶습니다..명확하게 설명히...안되는거같아서여쭤봄니다
회원작성글 매미매미  |  2013.11.05
Q. cell cylce analysis 과정중
 실험을 하려는도중 Facs가 고장이 난듯하여 cell에 70% ethanol 을 넣어 -20도에 보관중입니다.다음 과정인 PI staining을 진행하기 전까지얼마동안 -20도에서 보관 가능할까요
회원작성글 미완의꿈  |  2013.08.09
Q. FACS data분석좀 도와주세요..ㅠ_ㅠ 첨부파일
FACS Pi staining하여 cell cycle data를 얻었는데 여러장을 한꺼번에 3d data로 정리하려고 합니다.첨부한 이미지처럼 정리하고싶은데 아무리 찾아봐도 지원하는 program이나 아시는분이 없으시네요.. ㅠㅠ혹시 이런 정리가 가능한 program 아시는분 있으시면 꼭좀 도와주세요!!CellQuest(BD) 로 얻은 data입니다..
회원작성글 승재  |  2013.07.24
Q. cell 70% EtOH fixation 시간.. 길어도 괜찮을까요?
cell cycle 보고있는 학생입니다.실험 스케줄이 꼬여서 ㅠ 실험을 미뤄야하게 생겼습니다.single cell 만들어서 FACS로 sorting 후, positive cell만 cell cycle 분석합니다.single cell 만든후 70% EtOH에서 -20'c에서 fixation 3일정도 괜찮을까요?지금까지는 4'c에서 오버나잇이나 1시간만 해왔습니다.
석사생  |  2013.07.17
Q. coculture 후의 FACS 관련 문의사항 (Annexin , 항체)
두가지 세포 (Tumor cell 과  MSC)를 coculture 하여 (- cell insert 사용 안함)Tumor cell 에서 일어나는 변화 (apoptosis 등)를 보고자 합니다. (물론 cell insert를 사용하는 indirect coculture 군도 따로 있습니다.)direct co-culture 후에  두 cell 이 뒤섞인 상태에서1. Annexin / PI (apoptosis) 분석이 가능한 지요?2. FACS 경험이 없어서 여쭙는데,  혹시, Annexin /PI / BrdU 의 동시 분석이 가능할까요? 또, coculture 후, 항체를 붙여 p-p65(NF-kB) , CD31(angiogenesis)를 보고자 합니다. 그런데, cell 이 두 가지 뒤섞여 있어 분석에 어려움이 있을 거 같아 그 중 MSC를 CD90으로 표지하여 배제 시키고  Tumor cell 만의 반응을 보고자 합니다. 이러한 경우에 3. 항체를 형광만 서로 다르게 하여 p-p65 / CD31/ CD90을 동시에 염색하여 분석이 가능할까요?    (p-p65는  세포의 permeabilization이 필요하고  CD항체는 필요하지 않은 것으로 알고 있는데   이러한 경우(세가지 동시 stain)에 permeabilization을 한 후에 stain 해도 CD항체에는 영향이 없을까요?  )
회원작성글 씨쏠트  |  2013.07.09
Q. FACS_ cell cycle 분석좀 도와주세요 첨부파일
안녕하세요..요즘 PI staining 으로 cell cycle 을 찍고있는데..제대로 찍은것인지 주변에 물어볼 곳이 없어.. 이렇게 도움청합니다 ㅠ귀찮으시더라도 첨부파일 확인해주시기 부탁드려요~ㅠcontrol에 비하여 특정 약물을 처리하였을때, cell의 증식이 저하되고, 단백질 발현에 있어서도 cell cycle regulatory protein의 변화를 확인하여서.. 이렇게 facs로 cell cycle 을 찍어보았는데요..파일의 맨 처음 그림이 negative control 이며 나머지 3개가 약물을 처리한 것입니다.G2/M arrest가 일어났다고 해석해도 될까요?제대로 facs가 찍힌것인지 궁금합니다.. 제발.. 도와주세요~~ㅠㅠ
연구원  |  2013.05.23
Q. cell cycle analysis 분석관련질문
FACS(PI staining)분석을 통한 cell cycle analysis에서cell proliferation이 촉진되는 조건을 주었을 때,S phase가 증가하는 것은 어떤 의미로 해석할 수 있습니까?cell cycle에서 S phase가 증가하는 것이 apoptosis로 인하여 S phase에서 arrest된 것이라고 판단하는 논문들이 있어서proliferation과 관련하여 해석할 수 있는지 궁금합니다.그리고 대부분 어떤조건처리후에 S phase증가를 확인할 때조건처리 후 얼마 있다가 cell harvest&fixation을 진행하나요? 
cellcycle  |  2013.05.22
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