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 카테고리: 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
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Q. 논문을 보다 첨부파일
논문을 보다 궁금한 것이 있어 질문합니다.Immunocytochemistry를 했는데...자세한 설명좀 부탁드립니다.PI가 DNA 염색, merge는 합친 거라는건 얇은 지식으로 알고 있는데...윗줄은 control이고, 아랫줄은 약물처리시 인데...p21-FITC 는 P21을 보기위한거라는건 알겠는데...약물 처리시 증가했꼬...FITC는 뭘 보는건가요?단순히 p21을 보기위한건가요?또 FITC와 PI의 연관...또 하나...보통 p21 을 보면 p53도 같이 보자나요...?DNA가 손상되었을시 p53에 의해 p21 발현이 증가한다고 하는데..그럼 p21이 증가했음 p53도 증가해야될거 같은데..제가 본 논문은 p53은 감소를 했습니다.어떻게 연결을 시켜야 되나요?
궁금  |  2009.06.16
Q. purified antibody..
Purified antibody로 Immunocytochemistry를 하였는데. cell 위에 dot 형태로 스테인이 됩니다. extracellular 부분에 대해 specific한 antibody  라서 그럴 수 있다고 생각했는데, antigen-antibody 나 2nd antibody에 의해 형성된 complex가 cell 위에 뭉쳐져서 그렇다는 이야기를 언뜻 들어서요.. 그런 non-specific complex 없애는 방법으로 무엇이 있을까요?? ;; antibody를 filtration이라도 하면될까요?? 고수님들.. 알려주세요~~~
antibody  |  2009.06.15
Q. IHC 나 ICC 에서 dehydration 을 하는이유가 뭘까요
Immunocytochemistry 같은 실험에서 어떤것은 dehydration 과정이 있고어떤것은 없는데dehydration 과정이 어떤 역할을 하기 때문에 하기도 하고 안하기도 하고 그러는건가요?
회원작성글 dehydratio  |  2009.04.24
Q. 뜨는 cell은 어떻게 Immunocytochemistry하나요??
붙는 cell을 가지고는 Immunocytochemistry를 많이 해보았는데뜨는 cell을 가지고는 어떻게 해야 하는지 모르겠어서 질문 올립니다.뜨는 cell은 Immunocytochemistry를 하지 못하나요??아니면 뜨는 cell에 하는 다른 방법이 있는지요??경험이 있으신 분들의 조언 부탁드립니다.
Immunocyto  |  2009.03.26
Q. staining할때..
안녕하세요. 멀리..미국서 공학전공자가...바이오실험을 하고있습니다.(ㅠㅠ) 고수님들께..여쭙고싶습니다. 요즘 세포염색..특히 핵염색을 자동으로 하는 랩칩을 만들고 있습니다. 그러나 세포를 permeablization하는 triton을 사용하는데 이 용액이 표면장력이 낮아서..제가 구상중인 칩에..큰 문제거리입니다. 혹시 핵염색시..triton같은 종류의 용액을 사용하지 않는 방법이 있는지요 ? (현재는 DAPI를 주타겟으로 칩을 디자인중인데..큰걸림돌입니다..) 기초적인 질문인데요.. 10x PBS를 1x PBS로 만들기 위해서는... 1. DI water 9 에 10xPBS 1을 넣는것인지.. 2. DI water 10 에 10xPBS 1을 넣는것인지.. 알려주셨으면 합니다. (저는 1이라고 생각하는데..여기 직원이 2라고 해서..좀..헷갈립니다.)
회원작성글 비전공자  |  2009.03.05
Q. facs 관련 질문입니다.. ^^;
facs 실험 해보려고 알아보고 있는데 주변에 sorting 하시는 분들이 없어서 자문구하기가 힘들어서 여기에 질문합니다 ㅠㅠ DNA contents 기준 잡아 cell sorting 후 immunocytochemistry 시행하려고 하는데 학교에 FACScalibur 가 있는데 이 기계로 sorting 이 가능할지 궁금합니다. sorting 이 후 cell 을 다시 키우며 time zone sample 을 따서 cytochemistry 시행 예정이라 dye 는 live cell staining 이 가능한 DAPI 나 Hoescht 33342 로 생각하고 있는데 이 dye 들이 이 후 cell growth 과정에 영향은 없을지.. 20분 간격으로 120분까지 time zone 실험 예정인데 sample prep 후 다시 staining 과정이 필요할지.. 고수님들 도와주세요!! ^^
neko  |  2009.02.27
Q. estrogen receptor이 estrogen에 반응을 안합니다ㅠ 첨부파일
MCF-7에 estrogen treatment를 하면 estrogen receptor(ER)가 cytosol에 있던 ER이 nucleus로 이동한다고 알고있습니다. 그걸 눈으로 확인하고자 immunocytochemistry 실험을 진행하고 있구요. 그런데 ER이동하기는 커녕, 핵에서 보이는 signal이 강하게 안보이네요..(사진은 논문에서 따온거고, estrogen 처리하지 않은거랍니다. 전 저렇게 안보이던데;;) 일단 estrogen농도는 논문을 바탕으로 몇가지 처리를 해보았구요.. 10nM, 100nM 둘다 ER의 이동은 못보고있는상태입니다. 그런데 또, cytosol & nucleus fraction한 결과에서는 10nM로 30분처리한결과 핵쪽으로 이동한 결과를 봤습니다. 이 조건 그대로 ICC에 적용했더니 안되고있는거랍니다 ㅠ 혹시 MCF-7 가지고 저랑 비슷한 실험하고 계시는분 계시면 조언좀 구하고싶네요..
회원작성글 E2  |  2008.12.18
Q. 3T3-L1 Oil red O staining results 첨부파일
최근에 삼티삼 키워서 실험하고 있는 학생인데요,, 1.지방세포 염색한것인데 이거 분화된것 맞나요?? 처음으로 키우고 있는데, MDI 첨가하고 나서 2일후, 인슐린 첨가후(1ug/ml) 피막같은게 형성되더라구요,,첨에 오염된줄 알았는데 ..그냥 keep going 했습니돠. 그래서 계속 확인해봤더니 분화가 된 것 같기도 하고, 안된 것 같기도 하구, 잘 모르겠습니다. 이번에 키웠던 것을 보니까 부분적으로 지방구가 형성되었습니다. 어떤 부분은 그냥 길쭉한 preadipocyte였습니다. 2.만약 분화가 됐다면 전체적으로 세포가 지방구가 되는지요?? *cell passage 는 25짜리 ACTT 사용했습니다.
회원작성글 HYUK~  |  2008.12.15
Q. collagen코딩은 어떻게 하는지요???
collagen코딩은 어떻게 하는지요??? immunocytochemistry를 했는데 셀이 PBS washing부터 잘 씼겨 나가네요 셀이 너무 잘 떨어져서 나중에 mounting까지 하면 얼마 남지를 않아서 고생입니다^^ 그래서 cover slip에 collagen 코딩을 해보려고 하는데요 선배님들 가르침 부탁드립니다
cristina  |  2008.11.27
Q. 조직 염색방법
Gill''s Hematoxylin Protocol 입니다. 여기에는 Single Double Triple 이 세가지 방법이 있는데, 저는 Immunocytochemistry 할때 counter stain 할때 사용할건데요,, 프로토콜을 다운받아서 보는데,, [Triple strength for immunohistochemistry counterstain (dilute 1:5) for 30 seconds] 이렇게 써 있습니다. 여기서 (dilute 1:5)라는 말은 만든 시약을 1:5로 희석해서 사용하라는 말이예요?? 혹시 시간되시면 이 주소를 링크해서.. 좀 알려 주세요..ㅜㅜ http://www.ihcworld.com/_protocols/counterstain_solutions/gill_hematoxylin.htm
mhyu82  |  2008.11.04
Q. ICC시, counterstain
Immunocytochemistry를 하려고 하는데요, 본론은.. counterstain을 Gill''s formulation #2 Hematoxylin 을 사용하라고 하더라구요.. 여기서 #2 라는게 의미하는게 뭔가 해서요,, 1) SIGMA 에 이 제품이 있기는 한데 이걸 꼭 사용해야 하는지요..?? 저는 지금까지 파라핀으로 포매한 샘플을 섹션 후 H&E Stain 을 해 왔는데요 여기서 사용하는 Hematoxylin은 Harris'' Hematoxylin 이었습니다. 2)허나, ICC에 사용하는 Gill''s Hematoxylin을 사용해야 하는 이유는 무엇입니까?
mhyu82  |  2008.11.04
Q. FACS용 antibody는 FITC붙은 2nd antibody 쓰면 되나요?
제가 사용할 antibody 찾아보니까요 FC라고 FACS에 사용할 수 있는 antibody네요 그러면 여기에 FITC붙은 2nd antibody 붙여서 flow cytometer 돌리면 되는 건가요??? 2nd antibody는 immunocytochemistry용입니다...=_=;;; 혹시 FACS용 2nd antibody가 따로 있나요?? 아! 그리고 혹시 immuno용 2nd antibody로 ELISA도 할 수 있는지요??
생짜  |  2008.10.13
Q. Immunocytochemistry 시에 block serum에 대해 질문이 있습니다
immunocytochemistry를 할 때 1차 antibody를 처리하기 전에 blocking을 하게 되는데 이때 왜 2차 antibody를 생산한 동물의 serum을 써야 하는지 잘 모르겠습니다; 실험에서 1차 ab는 mouse, 2차 ab는 goat에서 만들어낸 것을 사용했는데, 검색을 해보니 같은 질문에 대한 답변을 Goat serum에 존재하는 (2차 항체가 없는) 또 다른 무언가가 sample에 붙을 수 있습니다. 만약 이러한 현상이 실제로 있다고 가정한다면 2차 항체 용액에 오염되어 있는 무언가가 붙을 수 있어 background로 나타나므로 사전에 미리 2차 항체가 없는 goat serum으로 처리해 주는 것입니다. 하지만 반드시 antibody를 만들어낸 종의 serum을 blocking solution으로 사용하지는 않습니다. 그리고 가장 좋은 것은 preimmune serum입니다. 로 해주셨는데요, ''Goat serum에 존재하는 (2차 항체가 없는) 또 다른 무언가가 sample에 붙을 수 있다는 것'' 이라는 대목이 이해가 안가네요; 여기서의 ''goat serum''이라는 건 blocking 시에 사용한 serum을 말하는 것인지 아니면 2차 antibody가 들어있는 serum을 말하는 것인지 모르겠어요;
모르겠습니다ㅠ  |  2008.09.16
Q. primary neuronal cell culture를 하는데 cell 이 자꾸만 죽어요.
제목 그대로 primary neuronal cell culture를 하는데 cell 이 자꾸 죽습니다. 임신 18일 된 rat에서 태아를 꺼내서 하는건데 serum free nuerobasal media를 쓰고, plate는 poly-L-lysine으로 미리코팅했다가 씁니다. cell culture를 하고 3~4일 까지는 cell이 plate에 부착도 잘하고 dendrite도 잘 뻗는데 7일째쯤 되어서 immunocytochemistry를 하려고 보면 모두 죽어있어요. 왜그렇죠ㅠㅠ? 실험 고수님들 좀 알려주세요...ㅠㅠ 이제 막 실험을 시작한 학부생인데 2주째 이러고 있습니다..
실험초보  |  2008.09.02
Q. Immunocytochemistry 1차 Ab 처리에 관해서
안녕하세요 Immunocytochemistry를 할 때 Santacruz 꺼 Ab를 1:200 정도로 해서 -4도 overnight을 통해서 반응시킵니다. 그런데 Ab가 비싸다 보니 collagen 처리한 slide cover glass (22*22 mm ) 짜리에 100ul 정도만 떨어 뜨렸습니다. 다음날에 보니 100ul가 증발됐는지 없고 약간 말라있는 상태인데 이런 경우 결과 image에 영향을 많이 미치는 건가요??? 1시간만 반응해도 상관이 없을까요???
yuni  |  2008.08.23
Q. TH1, 2 분화방법
EL4 로 TH1과 TH2로 분화시킬려고합니다. 그런데 잘 안되네요. 혹시 잘되는 방법 아시는분 좀 가르쳐주세요. 그리고 immunocytochemistry 할려고 하는데 세포 고정법도 부탁드려요.
회원작성글 풍이  |  2008.08.19
Q. 면역염색에 관해서 질문 드립니다.
안녕하세요. 면역염색과 관계해서 Immunohistochemistry도 있고, Immunocytochemistry도 있는데 제가 공부를 한다고 했는데... 둘의 차이가 무엇인지 솔직히 잘 와 닿지가 않습니다. 각 면역염색법의 차이가 무엇인지 좀 알려주세요~ 그러고 제가 Cell 을 가지고, cover glass에 collagen 처리를 해서 하고 있는데 3.7% paraformaldehyde로 fixtation을 하게 되면 Cell이 cover glass에 완전히 붙게 되는 건가요?? 사실 Washing하고 그럴 때 Cell이 cover glass에서 떨어질까 불안합니다.
staining  |  2008.08.18
Q. immunocytochemistry 관련 질문
rabbit에서 분리해 낸 특정 단백질에 대한 항체의 워킹 여부를 확인하기 위해서 immunocytochemistry를 하고 있습니다. 그런데, 제 단백질이 세포 표면에 발현하기 때문에 immunocytochemistry 과정 중 Permeation 과정을 빼고 immunocytochemistry를 했는데 2% PFA로 고정을 해서 그런지 permeation이 되어서 컨트롤로 넣어준 phalloidin이 F-actin을 잡았습니다. 그래서 아예 PFA로 고정하기 전에 1st Ab를 상온에서 한시간 반응시킨 후에 여러번 워싱하고 PFA로 고정하였더니, Cell의 모양이 응축되거나 cell이 거의 떨어져 나가서 관찰이 힘든 상황입니다. 제가 알고있는 방법말고 세포 표면에 발현되는 protein만 볼 수 있는 immunocytochemistry 방법을 아시는 분 조언좀 부탁드립니다.
학생  |  2008.08.09
Q. immunocytochemistry 를 할때 washing
이번에 immunocytochemistry 처음 하려고 합니다. Ab처리나 blocking & washing 과정을 shaker에서 해야하는지 아니면 처리를 해두고 그냥 나둬도 되는지 궁금합니다. 혹시 흔들릴 경우에 cell이 떨어지지 않을까 해서 걱정이 됩니다. 그리고 normal goat serum이나 BSA를 쓴다고 하는데 skim milk를 안쓰는 이유가 효율면에서 더 좋아서 사용을 하는 건가요? 아님 다른 이유라도 있는지..... 역시 쉬운 실험은 없는것 같습니다. 준비해야 될께 많네요.... 그냥 넋두리였습니다.ㅋㅋ
궁금  |  2008.07.30
Q. FACS 에 대해서 기초적인 질문이 있습니다..
안녕하세요. FACS를 해야 하는 상황이 발생했는데, 구글 여기저기서 protocol은 구했습니다만, 몇가지 감이 다가오지 않는 것이 있어서 여쭤봅니다. 일단 staining 할 target 단백질은 intracellular protein이구요, cell이 adherent cell인데, 일반적인 culture 하듯이 트립신으로 쎌을 띄고 culture medium(serum 포함된)으로 트립신 reaction 스탑시키고... 이후에 tube로 옮겨서 staining 하면 되는 걸까요? 또다른 질문은... 실험실에서 immunocytochemistry는 많이 하지만, FACS는 한번도 안해서.. FITC, TRITC, AMCA, Cy5 가 있습니다만, 이 secondary antibody를 이용해서도 FACS가 가능한가요? 지금 double 내지는 triple staining 을 해야 하는데... 이 secondary antibody들이 안된다면, 빌리거나 새로 사야 하는데, 잘 모르겠어서 여쭤봅니다. 공동기기실의 FACS는 FACScalubur와 FACS canto 가 있습니다. 또 sorting이 되는 FACS aria II 가 있습니다. 처음 할 일을 해보는것은 언제나 좀 여럽네요. ^^;
대학원생  |  2008.07.19
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