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BioLab 장재봉 교수
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Q. 희석 문제 도와주세요ㅠ
환자검체 100ul와 생리식염수 15ml를 이용하여 10000배 희석하고자한다 희석액 5ml를 만들고자 할때 필요한 검체와 생리식염수의 양은 각각 얼마인가? 어떻게 풀어야 하는지 알려주세요 ㅠㅠㅠ
회원작성글 용링링  |  01.18
Q. Transformation
안녕하세요 E. coli transformation실험을 진행하고 있습니다, Electroporation 방법으로 transformation을 진행하였는데 pulse를 주고 SOC를 바로 넣어준다음 37도 인큐베이터에서 120 rpm으로 shacking incubate를 진행하였더니 cell debris가 실처럼 가라앉아 발생하였습니다. 원인을 찾고싶은데 정보가 살짝 부족한거같아서 글 남겨봅니다.. 그리고 cell debris로 인해 transformation yeild가 치명적으로 떨어지나요??
회원작성글 brintelix  |  01.18
Q. Mouse splenocyte 색 관련해서 질문드립니다...
제가 BL6 Mouse의 Spleen에서 splenocyte를 분리해서 실험을 하고 있습니다. 그런데 가끔 Splenocyte를 isolation한 후에 pelleting 하였을 때 한두마리씩 pellet 색이 이상하게 검은 개체들이 있었습니다. 이상하지만 계속 사용하였는데, 이후 실험에서 이러한 것들만 튀는 값을 가지는데 혹시 그 개체들에서 문제가 있는건지 궁금합니다. 분리방법은 RBC lysis, Ficoll 모두에서 이러한 현상이 나타납니다.
회원작성글 zxcvbn33  |  01.18
Q. real-time PCR 논문 해석이 안됩니다,, 도와주세요ㅠ
선배님들 제가  Development of a rapid and sensitive reverse transcription real-time quantitative PCR assay for detection and quantification of grass carp reovirus II 논문을 읽고 있는데 도저히 이해되지 않는 table이 있어서 질문 올립니다,, table 3번이고 표에서 의미하는 +, -가 무엇에 대한 pasitive이고 negative인지 모르겠고 왜 이런 결과인지를 도저히 논문만 읽고는 이해가 되지 않네요,,   제가 많이 부족한가봅니다 아시는분 설명 부탁드립니다ㅜ  
회원작성글 롤로야놀자  |  01.18
Q. anti-cd3 ihc, if
cd3가 t세포 수용체라는 복합체의 일부라고 하잖아요  그럼 ihc나 if를 하게되면 어디에 있는 무엇을 잡는건가요..? 
회원작성글 zalhaza  |  01.18
Q. 피펫 종류
마이크로피펫과 다른 건데 팁을 꽂고 위에 있는 버튼을 누르면 설정한 용량대로 용액이 나오는 피펫 이름이 뭔가요??
회원작성글 봉먀  |  01.18
Q. transfection 후 cell protein 양 추정
Flag-protein plasmid를 cell에 transfection 하려고 하는데요 이후 lysis해서 total protein amount를 확인해야하는데 nanodrop으로 한다고 치고, 제가 300-500ng이 필요한데 그럼 얼마나(어떤 조건?) transfection을 해야하나요? 혹시 계산하는 방법이 있을까요? 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 별헤는밥  |  01.18
Q. 세포오염관련해서 질문드립니다.. 첨부파일
안녕하세요, 올해 3월달에 대학원에 입학하는 대학원생입니다.. 최근들어 갑자기 세포 오염이 심해져서 질문드립니다. 사진은 전극칩위에 세포를 시딩한 사진입니다. 그림과같이 옆에 자꾸 작은 점들이 있는것으로 보아 bacteria 오염같은데, 좋은 해결방안이 있을까요? 항생제는 페니실린 사용하고있습니다.
회원작성글 2023년입학  |  01.17
Q. 의약품 미생물 한도시험시 멸균 눈금 스포이드 사용
의약품 미생물 한도시험중인 대학원생입니다. 한도시험 결과 오염이 많이되어 원인 규명을 하고자 하는데, 생균수 시험과 특정미생물 시험 시 오염 인자들을 최대한 줄여보고자 멸균에 한계가 있는 오토 파이펫 대신 멸균 일회용 눈금 스포이드를 사용해 검액 1mL, 0.1mL씩 채취하여도 되는 건지 궁금해서 질문 남깁니다. (생균수는 한천평판혼합법을 이용합니다.) 생균수 시험같은 경우에는 정량시험이라(오차범위때문에,,, 스포이드의 오차범위는 2% 이내입니다.) 안될 것 같고, 특정미생물 시험시는 가능할 것 같아 여쭤봅니다,,,,
회원작성글 많이알려주세여  |  01.17
Q. 표준물질 구입
안녕하세요. 제품개발에 필요한 표준물질을(균주 아님)구입해야 하는데요. ATCC에서 Cat.no 확인해서 유통?업체같은 곳에 번호를 알려주면 되는걸까요ㅠㅠ 표준물질 구입은 처음인데 물어볼 곳은 브릭뿐이라.. 고수님들 도움이 필요합니다ㅠㅠ
회원작성글 뎬  |  01.17
Q. methylation 결과 해석시 colony 관련해서 궁금합니다.
안녕하세요.   관련 배경이 없는 상태에서 methylation data를 해석해보려니 어려움이 있어 글 올려봅니다.    현재, 혈액 샘플에서  gDNA추출 후 bisulphite, PCR, 시퀀싱 (2 colony) 처리하여 특정 target region의 시퀀스 2개에 대한 메틸화 수치 값을 뽑은 상태입니다.   여기서 메틸화 수치를 해석할 때, 2개의 colony에서 뽑힌 각각의 메틸화 수치는 평균을 내야 하는지요 아니면 별도의 데이터로 보아야 할지요? 처음엔 두 colony의 메틸화 수치를 평균 내야하는 것이 맞겠다고 생각했었는데,샘플 n수가 적어서 걱정하고 있던 차에 colony를 최소한 3개 이상으로 늘려서 재분석해보라는 답변을 받아서 (blood sample이 1 botttle씩 더 남아있는 상황입니다.) 평균값을 사용하는 것이 잘못된 것인지 의문이 들었습니다.    매우 초보적인 질문이지만 답변 주시면 감사하겠습니다.  
회원작성글 zkelll  |  01.17
Q. SDS-PAGE는 온도가 높은 상태, Transfer할 때는 온도가 낮은 상태인 이유는 무엇인가요?
학부인턴생입니다 Western blot하다가 이게 맞는 내용인지, 의문점을 여쭤봅니다   SDS-PAGE loading하기 전이나 SDS-PAGE 할 때는 약간의 열이 가해지고   그 외 과정(특히 Transfer)은 차갑게 ice에 넣어놓거나 Transfer할 때는 tank안에 ice pack과 스티로폼에 ice를 채워넣어 sample들을 낮은 온도에 유지했습니다   sample 준비, loading 중에서는 열+ b-mercaptoethanol + sds에 의해 단백질이 Transfer 외 과정보다 상대적 고온에 대해 안정되게 만들고, 단백질간의 새로운 결합을 막고 이온화되어 있는 채로, 선형인 채로 loading하기 위해 열이 있는 환경에서 loading하였고 Transfer의 경우 이미 젤에 loading이 되었고 transfer하는 과정에서 높은 온도에서 안정화시키는 물질들이 없어졌기 때문에 낮은 온도에서 하는 것이다   라고 이해를 했습니다 이게 맞을까요?   아무리 생각해봐도 이해가 잘 안됩니다 SDS-PAGE는 온도가 높은 상태, Transfer할 때는 온도가 낮은 상태인 이유는 무엇인가요?   그게 아니라면 맞는 지식 가르쳐주시면 감사하겠습니다
회원작성글 가랑비처럼  |  01.17
Q. T벡터 질문드립니당
유전자 클로닝을 할때 벡터에 삽입하기 위해서 EcoRi로 제한효소 처리를 하잖아용   처리하고나면   5'-G         AATTC-3' 3-CTTAA          G-5'   이렇게 약간 좀 복잡하게 되잖아용?     근데 T-벡터라는 녀석은 ..... 벌어진 부분에 T만 한 개 달랑 추가된건데,   점착성 말단보다 모양이 훨씬 더 간단해보이는데....    T-벡터만 쓰면 되는거 아닌가요?   실전에선 다들 T벡터만 쓰게되나요??
회원작성글 GMCSF  |  01.17
Q. Deep freezer
Ln2에 있던 cell stock들을 바로 deep freezer로 옮겨도 되나요?
회원작성글 ㅁㅅㅇㅇ  |  01.17
Q. C.glutamicum competent cell transformation
안녕하세요! C.glutamicum으로 실험 진행중입니다! 그러나 몇 개월째 cp cell 및 transformation이 제대로 되지않아서 조언을 얻어보고자 질문 남깁니다.. ㅠㅠ Competent cell 및 transformation 프로토콜이 있다면 공유해주시면 감사하겠습니다 ㅜㅜ.. 실패 원인에 대해 여러가지 생각해보고 모두 반영하여 시행해봤지만 아직도 지지부진 하네요 ㅠ..ㅠ 그래서 다른 분의 프로토콜과 비교해보고 진행해보고 싶습니다 Transformation이 되지않아서 실험이 전혀 진행이 되질 않습니다 .. 실험이 전혀 되질 않아서 저의 적성에 맞지않는건가 싶기까지합니다 ,, 잘 아시는 분이 계시다면 한번만 도와주세요 ! ㅠㅠ Corynebacterium glutamicum C.glutamicum Cp cell competent cell transformation plasmid vector protocol
회원작성글 미생무울  |  01.17
Q. LN2 탱크수위
LN2탱크 수위체크를 잊고있다가 오늘 확인해보니 13cm여서 바로 주문해서 내일 온다는데 안에 있는 cell들이 불안해서요ㅠㅠ혹시 13cm면 위험한가요..?
회원작성글 ㅁㅅㅇㅇ  |  01.17
Q. limit of detection(LOD) 구하는 방법 중 blank+3SD
항원 농도 별 반응성을 구할때, LOD를 구해야하는데.. 구하는 방법 중에서 blank+3SD 라는 방법이 있다고 들었습니다. 우선 X축(농도)는 0ng/ml, 1ng/ml, 10ng/ml, 100ng/ml, 1ug/ml, 10ug/ml가 있다고 한다면 blank의 값을 0ng/ml에서 1ng/ml로 바꼈을 때로 잡는 건가요? 또, SD(표준 편차)는 1ng/ml~10ug/ml까지 범위에서 SD를 말하는 건가요? blank+3SD 방법은 있다고 하는데 이거 계산과정을 설명한 논문을 아직 못찾아서 도움을 요청드리게 되었습니다
회원작성글 ㅠㅡㅊ  |  01.17
Q. 희석 질문 드립니다. 첨부파일
저희는 bsa를 직접 만들어서 쓰고 있습니다. media 30ml을 만들경우 bsa를 10mg/ml이라고 첨가 해야하는데 연구실에서 bsa 직접 만들면 액체상태인데 .. 어떻게 계산해야 하나요 ?... 참고로 제가 찾은 프로토콜에서는 bsa가 가루 형태입니다. 애초에 할 수 없는 걸까요? 관련 제품을 사야 만들 수 있는 걸까요 ??
회원작성글 yalliyam  |  01.17
Q. blocking 이후 TBST wash 2시간
blocking 1시간 이후에 TBST 워시를 잠깐 한다는 것을 잊어버려서 2시간동안 워시를 했네요.. 그래서 다시 blocking을 30분 정도 하고 간단히 워시 후 항체 붙였는데 혹시 문제가 있을까요..?
회원작성글 별헤는밥  |  01.17
Q. 왜 다른 비커에서 섞어서 용액을 만든 후, 큰 비커에 합치나요?
제가 연구를 시작한지 얼마 안되서 검색해 볼 키워드라도 알려주시면 정말 감사하겠습니다. mT6배지(쥐)를 만드는 프로토콜을 받아서 따라해보며 익히는 중입니다.   mT6배지를 만드는 과정 중 하나인데, CaCl2를 다른 비커에서 소량의 HPLC grade의 물과 섞어서 원래 만들던 용액에 합치는 과정이 있습니다. 이때 원래 시료를 첨가하던 큰 비커에 바로 넣지 않고, 다른 작은 비커에 용액 CaCl2수용액을 만들어서 큰 비커에 합치는 이유를 모르겠습니다.   phenol RED를 첨가했기 때문에 pH를 알 수 있어서 안의 용액이 산성인건 알 수 있고, CaCl2 또한 산성이라서 중화반응을 작게 하려는 용도도 아니어보입니다. 뭔지 감이 안잡히네요..ㅠ
회원작성글 중동생  |  01.17
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