raw cell을 이용하여 NO 함량 측정을 진행하려고 합니다. 각 실험실마다 사용하는 well이 다르지만 final concentration은 같을까요? 그렇다면 LPS와 샘플의 volume을 1:1로 넣고 배양시켜 상등액 100ul를 취하고 측정하게되는 걸까요?? 실험실 프로토콜에도 그렇고 여러 논문을 읽어봐도 LPS와 샘플의 볼륨을 얼마나 넣는지 나오지 않아 질문드립니다. ㅠㅠ

안녕하세요 human gingival fibroblasts에서 MMP활성을 보려고 gelatin zymography를 진행중입니다. MMP를 보기 위해서 conditioned medium을 acetone precipitaion하여 샘플을 준비하고 있는데요. acetone precipitaion해서 모은 pellet이 D.W에는 잘 녹지 않더라구요.. 그래서 최대한 녹인 후 샘플 상등액만 loading 하고 있습니다. 문제는 이렇게 loading한 후 결과를 확인하면 MMP활성은 나타나는데 western blot처럼 b-actin이나 a-tubulin같이 같은 양의 단백질이 잘 loading 되었는지 확인할 방법이 없는 것입니다. (최대한 같은 양의 medium으로 sampling 했지만 pellet이 생기기 때문에 같은 양의 protein이 sampling 됐는지 확신할 수 없음..) gelatin zymography를 수행할 때 이를 확인할 수 있는 방법이 있을까요? 혹은 acetone precipitaion으로 모인 pellet을 완전히 녹일 수 있는 방법이 있을까요?

랫드실험 참여할수있는 교육기관이 있을까요?!?

제가 250ml의 1M의 A라는 용액을 만들기 위해서는 250ml의 증류수에 A양이 0.093g 들어가면 1M이 된다는 것을 계산하여서 구했습니다. 그럼 2M의 용액을 만들려면 같은 250ml의 부피에 A의 양이 0.093*2g만큼만 들어가면되는건가요?

bradford 실험 결과 추출물의 단백질 양이 0.015ug/ul이 들어있다면 얘를 sds page할 때 총 볼륨을 20ul로 잡고 추출물을 10ul 로딩한다면 0.15ug을 로딩하게 되는데 양이 너무 적으면 밴드가 안보일까요? 추출물의 ug/ul의 단백질양을 알았을 때 제조할 샘플에 넣어야 될 단백질양과 총볼륨을 정하는 기준을 모르겠어요

흙 채집해서 미생물 배양하는 실험을 하는데 이때 흙이랑 0.85% NaCl 수용액을 섞더라구요. 미생물이 잘 나올 수 있도록 섞어주는 거라고만 알고 있는데 그 원리가 어떻게 되나요?  

안녕하세요 박테리아로 실험을 해본적이 없어서 궁금하게 생겨서 질문 드립니다. 참고하려는 논문에서는 박테리아를 LB에 오버나잇 해서 키우고, (일반적인 신체 조직유래 세포 배양할 때 쓰는) 세포 배양액 (논문에서는 interaction media; IM라고 부름)에 1:100으로 희석 후 OD600이 0.2-0.4가 될때 까지 키우고 세포당 박테리아 수 (multiplicity of infection; MOI)를 계산해 세포에 처리 합니다. 1. E.coli의 경우 보통 OD 0.1에 2 x 10^8개가 들어있다고 하는데 만약 OD 0.2 까지 (4 x 10^8) 키우고 1 x 10^4 개의 세포에 MOI 100만큼 (박테리아 수 1 x 10^6개) 감염시키려고 하면 어떻게 해야하나요? 그냥 시약 농도 희석하는 거랑 똑같이 OD 0.2를 400배 희석해서 세포에 처리 하면 될까요? 예를들어 OD 0.2 100 ml가 있고 총 24 ml이 필요하다면 60 ul (OD 0.2) : 23,940 ul (IM) = 24,000 ul = 24 ml이렇게 희석하면 될까요? 2. IM에 박테리아 배양시 phenol red가 들어있는데 박테리아 흡광도에는 큰 영향이 없을까요?

하나의 고추 샘플에 두 개의 바이러스가 있는데 그 중 하나의 바이러스만을 얻어서 식물에 접종하고 병징을 보고싶은데 방법을 잘 모르겠습니다.ㅠㅠ

Melan-A cell을 사용해서 실험중인 학부생입니다 지금 cell실험 관련해서 배운지 이제 막 3개월째 되어가는 햇병아리인데요 2월까지 잘 자라던 세포가 갑자기 3월7일쯤부터 같은 날짜의 동결바이알을 새로 풀었더니 계속 모양이 다르게 자랍니다 1x trypsin을 사용해서 떼어내고 RPMI배지에 10%FBS, 1%P/S 처리하여 배지조성해서 사용하는데요 트립신과 배지 둘다 새로 제조하여 사용하였을때도 셀모양이 이상합니다 인큐베이터 문제라기에는 같은 인큐베이터의 다른 Cell을 사용하는 친구는 잘 자랍니다 대체 뭐가문제일까요ㅠㅠ 사진이 모양이 변한상태입니다..ㅠ

HPLC 분석을 진행하던 도중 peak가 정상적으로 검출되지 않아서, 중간에 실험을 중단하고 column 세척을 위해 ACN:H2O = 20:80 비율로 90분간 진행했는데 baseline이 안정화가 되지 않아, 이에 대해 해결책을 얻기 위해 질문 드립니다. baseline 안정화 할 수 있는 방법이 없으면 column 교체가 답일까요

CGXII minimal media 조성에 대해 알고싶은데 정보를 구할 수가 없습니다. 해당 배지를 어디서 구할 수 있는지도 추가로 알 고 싶습니다!  

안녕하세요 진단분야를 공부하는 대학원생입니다. real time-PCR 실험 진행 후 결과를 확인할때 RFU 값을 확인하는데요, Cycle 마다 상대적 형광 강도를 측정하는 것으로 알고 있습니다. 첫 Cycle 시 Control 조건에서는 형광이 발현되지 않아서 지속적으로 0에서 증가나 감소하는 변화폭이 나타나지 않는데, 다른 조건(형광 발현이 되는 조건)에서는 음수부터 쭉 올라가는 현상이 나타납니다. 상대적 형광을 측정하는 것이라면, 음수가 아닌 0 부터 쭉 올라가야하는게 아닌지에 대하여 궁금해서 질문드립니다.   감사합니다. :)

대장균 정성시험(한도시험) EC 배지 입니다. 이렇게 듀람발효관 안에 작은 기포들이 생기는데 확인을 해보면 항상 아닙니다. EC 배지가 아니여도 LB, BGLB든 상관없이 저런 기포들이 종종 생깁니다. control에도 생겨요. 랜덤입니다. 만든지 오래된 배지일 수록 더 잘 생겨요. 확실하게 양성일때는 저것보다 크게 기포가 생기더라구요. 작더라도 관 윗부분을 덮을 정도는 생겨요.   이런 현상이 왜 일어나는지 궁금합니다. 멸균이 잘안되는 건가요?

[Hela cell Thawing 후, 25시간 후 상태] [Hela cell Thawing 후, 37시간 후 상태 (현재)]   안녕하세요, 석1기 초보 대학원생입니다.   Hela cell을 culture 하고 있는데요, Stock을 thawing 한 후 상태를 보니 세포 모양이 많이 달라지고 문제가 있는 것 같아 너무 걱정되는 마음에 올리게 되었습니다.   세포 모양이 저 정도로 울긋불긋? 하게 변한 것은 세포 상태가 안 좋은 것인지 (문제가 있는 것인지) 혹시 contamination 된 것인지 그렇다면 앞으로 어떻게 하면 좋을지   선배님들의 조언을 구해봅니다.

이쑤시개를 사용해서 접종할때 그냥 나무이쑤시개를 멸균해서 쓰면 안되겠죠? 보통 플라스틱 이쑤시개를 멸균해서 쓰시나요?

안녕하세요, TCBS 배지와 SS 배지에 미생물 실험을 하였는데, TCBS와 SS에 동일하게 sodium thiosulfate와 sodium citrate 가 있는데도 SS에서는 대장균이 배양되고 TCBS에서는 배양되지 않는 이유가 궁금합니다. 또한 SS 배지에서는 왜 vibrio 종이 자라지 않는 지도 알고 싶습니다!! ㅠㅠ 구글링 실력의 부족인지 찾아봐도 도통 나오지 않네요. 답변 주시면 정말 감사드리겠습니다. 

미생물 분리 동정 실험 과정중 동정과정에서 염기서열 분석회사에 16S rRNA sequencing을 맡기려 하는데 추천하시는 회사랑 가격이 어느정도 되는지 알수 있을까요?

안녕하십니까. 궁금한 점이 있어 이렇게 질문을 올립니다. 논문을 참고하여 단백질 추출을 하고자 하는데 이런 식으로 설명되어 있습니다. 'the supernatant was fractionated between 40 and 75% saturation with ammonium sulfate solution.' 여기서 궁금한 점은 상층액에 ammonium sulfate를 첨가하면 밑에 자연스럽게 침전물이 분리된다는 말인가요? 아니면 상층액을 ammonium sulfate를 첨가하고 원심분리를 돌리라는 말인가요? 첨가한다면 몇 농도의 ammonium sulfate 를 어느정도의 양을 넣어야 하는건가요? 부족하지만 긴 글 시간내어 읽어주셔서 정말 감사합니다.

제가 lab에서 e.coli를 통해 얻은 protein을 정제하는 과정에서 LC를 사용하고 있는데 Eluent를 유기 용매 위주로(물에 잘 녹지 않습니다) 사용하고 있습니다. 이후 유기용매를 날려주기 위해 Lyophilization 과정을 하는데 종종 과정 중에 녹거나, 하루가 지나고 나면 아무것도 남지 않는 것이 고민입니다. 처음엔 protein 수급이 안되었는지 생각했는데, SDS-PAGE를 하거나 microtube 정도의 scale에서 진행을 하면 protein이 확인 되지만, conical tube에 10~15ml 정도의 scale 에서는 여전히 진행이 되지 않아 너무 고민입니다. 혹시 비슷한 일을 겪었거나 해결해본적 있으신 분 계시면 조언 부탁드립니다 참고로 HPLC 사용 시 gradient elution을 사용하고, Elution은 물, TFE, Acetonitle, IPA 등을 사용하며 protein inject 용으로 사용하는 용매는 MC와 HFIP를 섞어 사용합니다

분석장비에서 Baseline이 급상승하거나 급하강하는 현상을 Baseline step이라고 칭하기도 하나요? 따로 공식적인 이름이 있을까요?