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실험 Q&A는 연구 활동 중 생겨난 궁금증을 지식 나눔을 통해 해소하고 함께 성장하는 공간입니다.
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오늘 9
Q
안녕하세요. LPS를 처리한 세포로부터 RNA를 추출하여 RT-PCR을 진행해 target gene의 mRNA 발현 변화를 알아보는 실험을 수행 중입니다. 근데 제 결과에서는 계속해서 발현 변화가 없는 반면 제가 합성한 cDNA를 가지고 선배님께서 PCR을 하였을 때는 처리에 따른 변화가 뚜렷하였습니다. 제 PCR 과정에 문제가 있는 듯한데 어떤 부분이 잘못 된 것 인지를 몰라 질문글 올립니다. PCR 과정은 다음과 같습니다. 1. primer mixture 만들기 { primer(10pmole) F 1ul + primer(10pmole) R 1ul + DEPC water 6ul } * (sample 수 + 1) 2. Premix tube(제품)에 primer mixture 8ul, cDNA 2ul 씩 분주 3. spin down 후 PCR - 94도, 5분 - 94도, 30초 / 65도, 30초 / 72도, 30초 - 72도, 7분 물도 새로 따서 쓰고, primer도 새로 희석하고, 다른 파이펫을 사용해보고 다른 장소에서 분주하여 PCR하여도 제 결과는 계속 동일하게 나옵니다.ㅠㅠ 읽어주셔서 감사합니다.
24.03.29
안녕하세요. 저는 일반인이고 관련지식이 없어서, 게시판 주제에 맞는 글이 아닐까 조심스럽네요 FT-IR 분석의뢰를 맡기고 자료를 받았는데 연구소에서 주신 자료는 해석은 없고 시험 검사 그래프정도만 받을 수 있어서 일단 받았는데 혼자 파악해보려해도 해석에 어려움이 있어서 여기까지 찾아왔어요.. A알약(항암제) B알약(항암제or가짜약) 이 동일한 알약인지 파악하고싶은데 우선 그래프는 99프로 흡사합니다. 하지만 연구소에서 검사하시기 전에 미리 부형제들은 다 같이 나타나겟지만 검사한다고 해도 유효성분은 알수없다는 의견을 받았어요 혹시 FT-IR 자료를 보고 유효성분도 함께 들어가는 동일한 알약인지 해석해주실 수 있으신 분께 의뢰를 드리고싶은데 숨고나, 크몽같은 곳에서는 전문가분이 없는듯하여 여기에 글을 씁니다. 사례금은 원하시는 금액 맞춰 드릴 수 있을 것같은데 이런건 어디서 의뢰드릴수있을까요? 사람인 같은곳에 올려야할지요 ㅜㅜ..
band가 깔끔하게 안뜨고 밑에가 이렇게 좀 일렁거리는? 뭐가 흘러내리는 것 처럼 계속 결과가 나오네요.. 결과 자체는 잘 나왔는데 band 모양 퀄리티를 좀 높히고 싶습니다. 6% acrylamide gel 이고 비율은 19:1 acrylamide 사용해서 만들었습니다. 100V 에 size 원하는 거 확인 될 때까지 내렸구요. sample 은 PCR product 입니다. acrylamide 로 DNA는 처음 내려보는지라.. 당연히 깔끔하게 나올 줄 알았는데 생각이랑 너무 다르게 나와서 고수분들의 조언 구해봅니다 ㅜㅜ
Deciphering the biodesulfurization pathway employing marine mangrove Bacillus aryabhattai strain NM1-A2 according to whole genome sequencing and transcriptome analyses 라는 논문으로 실험을 해보고자 하는데 이 논문에 나온 control CK medium 이 무슨 배지를 말하는 것인지 잘 모르겠습니다. 미생물학에서 CK로 축약되는 말이 너무 많아 대조군에 무슨 배지를 사용한 것인지 모르겠어서 질문 드립니다!
단백질 발현 관련 실험을 진행 하고 있습니다. 최근에 단백질 발현량이 기존 실험보다 적게 나오고 있습니다. 원인을 찾고 있는 과정에서 IPTG induction관련 글을 보았습니다. 저는 1M IPTG를 0.1M 로 희석해서 incubator에서 20℃/150 rpm/ 24hr 진행하고 있습니다. 정제후 elution 한 sample 정량한 값과 buffer chnage 한 sample 값이 상당히 적게 나오고 있습니다. 자료를 찾아보니 induction시 온도와 시간을 줄여보라는데... 얼마나 줄여햐 하는지 알려주시면 감사합니다.
RÖse-Göttlieb 추출법에 의한 조지방 정량에서 암모니아수를 넣은 후 90% 혹은 95% EtOH를 넣는 이유와 조지방 추출 시 용매를 Ethyl ether와 Petroleum ether를 구분해서 넣는 이유 알려주실 수 있나요?ㅜㅜ 궁금합니다...!
안녕하세요? OVA 유도 천식모델을 정립하고자 하는데요 감작화시킨 후 유도할때 에어로졸 형태로 OVA많이 흡입시키던데 챔버에 동물을 넣어 흡입시켜도 상자를 열면 그 화학물질이 사람에게 전달될텐데.. 인체에 무해한건지...후드안에서 하는건지...궁금합니다ㅠㅠ
안녕하세요 이제 막 HPLC에 입문한 대학원생입니다. 분석전에 스탠다드 두 개를 찍어 보았는데 순서대로 2-cyclohexen-1-one, cyclohexanone, mixture 입니다. cyclohexanone의 피크는 하나의 피크로 나오는데 왜 2-cyclohexen-1-one의 피크는 두개의 큰 피크와 작은 피크 두개가 나오는걸까요? 두개를 섞어서 찍은 mixture에서도 똑같은 패턴을 보여주나, cyclohexanone을 단독으로 찍은 피크에선 정상적으로 나오는걸보면 컬럼 워싱의 문제가아니고 샘플의 문제인가요?
Tyrosinase 110 unit 만드는법 알려주시면 감사하겠습니다ㅠ 자세하게 알려주세요
western blot 감을 익히고 있는 과정 중에 있는데 현상기로 현상할 때 몇 개의 membrane에서만 밴드가 나오고 나머지 membrane에서는 밴드가 나오지 않아서 질문드려요 transfer 후에 폰슈 했을 때 밴드 모양이 잘 나왔고 잘 내려온 것을 확인했습니다 제가 생각 했을 때는 폰슈에서는 모양도 내려온 것도 잘 돼서 그 다음 단계를 진행한거라 transfer 이후 문제라고 생각하는데 도대체 뭐가 잘못된 건지 감이 안 와서 질문드려요 membrane은 NC 사용 transfer 후에 폰슈로 확인 폰슈 3번 wash blocking 50분 wash 10분씩 3번 1차 antibody 1:1000으로 O/N wash 15분씩 3번 2차 1:2000으로 1시간 wash 15분씩 3번 ECL (Lumi pico 사용) 이렇게 진행했습니다 1차 antibody랑 2차는 정말 헷갈리지 않고 잘 넣었습니다 혼자서 trouble shooting 생각해 보다가 도저히 어디서 뭐가 잘못된 건지 잘 모르겠습니다...
24.03.28