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Q. Balb/c mouse 안구 하얗게 변하는 것
안녕하세요! 동물실험을 하다가 궁금한 점이 있어서 이렇게 질문하게 되었습니다. 마우스 i.p로 마취와 안와채혈을 하고 나면 마우스 눈이 하얗게 변했다가 점차 시간이 지나니까 원래 빨간색으로 돌아오더라구요..혹시 마우스 안구색이 변하는 이유가 있을까요?
회원작성글 rlatmddus  |  2022.06.22
투표완료 western blot 실험 단계 중에서 blocking 전 후로 washing 하시나요, 안 하시나요?
진행 2022.06.18~06.22  |  참여자 107명  |  댓글 5
Q. [western blot] Ponceau 염색 후 band 안 나오는 이유 첨부파일
Western blot 과정 중 transfer 후에 ponceau 용액에 membrane을 담궈서 band 확인할 때 band가 안뜨는데 왜 그런지 아시는 분 있나요? 폰슈에서 안나오고, 마지막 detection까지 해도 band가 보이지 않습니다..transfer가 끝난 membrane을 보면 marker는 잘 묻어나는 걸 보면 transfer과정에서 큰 문제는 없었던것 같은데 왜 그럴까요?ㅜㅜㅜ Protein 양=10ug 정도 PVDF membrane (Methanol로 적셔서 활성화 시킴) transfer 조건= 100 V, 60 min (-) Sponge-filter paper-gel-PVDF membrane-filter paper-sponge (+)
회원작성글 experiment  |  2022.06.08
Q. Cryosection (frozen section) 도와주세요 첨부파일
안녕하세요 Starflower입니다. Cryosection이 잘 안되서 이렇게 질문드립니다. Mouse whole brain을 coronal 방향으로 section 하려합니다. 오늘 사용한 sample의 경우 제가 만든 sample은 아니지만 PBS, 4%PFA로 관류 후 30% sucrose에 두고 가라앉힌 다음 드라이아이스에 에탄올을 넣고 oct compound로 굳혀 만든 sample로 알고 있습니다. 그리고는 -80도에서 보관하고 있었고, cryostat에서 1시간정도 두어 온도를 맞춰줬습니다. mold가 너무 커서 면도칼을 이용해서 주변 oct 정리 좀 한 뒤 section을 하니까 문제가 발생 했습니다. 문제는 크게 4가지 입니다. 1. 조직과 함께 oct가 계속 말립니다. 2. 절삭할 때 쭈글쭈글하게 나옵니다. 3. oct와 함께 붙어 나오지 않고 조직과 분리됩니다. 4. slide glass에 붙일 때 bubble이 너무 많이 들어갑니다. 바로 slide glass에 붙이는 방식으로 하려는데 이러한 문제들이 있습니다. 어떻게 하면 고칠 수 있을까요
회원작성글 Starflower  |  2022.05.30
Q. 방울 토마토, 감염이 일어나질 않습니다.. 도와주세요.. (Xanthomonas perforans)
 안녕하세요 고등학교에 재학 중인 학생입니다. 학교에서 전신획득저항성(SAR) 관련 실험을 진행하고 있는데 한가지 큰 차질이 생겨 질문 남기게 되었습니다.  SAR 유도 물질로서 알려진 살리실산을 처리한 뒤(無, 0.5mM, 1.0mM) 방울 토마토 모종에 Xanthomonas perforans을 처리하였는데요, 현재 10일 가량 지난 시점에서도 감염 부위가 전혀 보이질 않습니다.  세균 처리 전, 현탁액의 CFU를 측정하고 처리하려 했으나 시간 관계상, 목적상(감염) 크게 중요하지 않을 것 같아 건너뛰어 대략적인 농도는 말씀 드리기 어려울 것 같습니다.  첫 처리 땐 백금이로 고체 배지에서 5번 긁은 만큼 200mL 증류수에 넣어 분무기로 5회 엽면 처리하였고, 이후 5일 뒤에는 1번/200mL, 10번/200mL의 두개의 현탁액을 만들어 분무기로 5회 엽면 처리, 스포이트로 2.5mL 엽면 처리, 5mL 관주 처리(토양)에 했습니다.  뒤늦었지만 세균 처리한 논문을 여러개 찾아보았고, 본 실험과 습도, 온도, 처리 방법에 차이가 있다는걸 알게되었습니다.  내일인 월요일에는 0.9% NaCl 용액, 증류수를 각각 200mL씩 사용하여 처리한 후, 비닐 랩으로 간이 온실을 만들어 가습기와 전등을 함께 비치할 생각입니다.  위 실험 과정의 어떠한 문제점 때문에 감염이 일어나지 않는지 알고 계시다면.. 피드백을 간곡히 부탁드립니다.. ㅠㅜ
회원작성글 인냥  |  2022.05.30
Q. macrophage therapy 관련 질문드립니다.
안녕하세요. macrophage therapy에 관심이 있어 질문드립니다. 1. 사람을 기준으로, 혈액에서 macrophage를 분리하고 배양하여 다시 주입 시 GVHD가 나타날까요? (autologous) 2. 사람을 기준으로, THP-1(human monocyte cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 3. 사람을 기준으로, Raw264.7(mouse macrophage cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 4. 쥐를 기준으로, THP-1이나 사람 혈액에서 분리한 macrophage를 주입하면 GVHD가 나타날까요? (vein injection 기준으로 여쭤봅니다) 논문들을 찾아봐도, 어떤 논문은 그렇다, 어떤 논문은 아니다 라고 상이한 내용이 있어, 경험이 있으신 선생님께 부탁드리겠습니다. 간단하게 네, 아니요 라고만 해주셔도 감사하겠습니다.
회원작성글 모자  |  2022.05.23
Q. RPR 과 VDRL 실험 차이
두가지 실험 모두 매독을 검사하는 실험인데 왜  VDRL만 보체를 불활성화 시키는 과정이 필요한지 궁금합니다!!  
회원작성글 해성이  |  2022.05.17
Q. DAB staining 관련 질문이 있습니다 ! 첨부파일
dab staining을 처음 진행하였는데 이미지 분석하는데에 궁금증이 생겨 질문드립니다. 제가 마우스 skin을 떼서 frozen section하여 hair follicle관찰을 위해 dab stainig을 진행했습니다. 여태 형광염색을 했는데 잘 안나와서 툴을 바꿔보았습니다ㅜ 1ab로 ki67을 붙였는데 이미지를 보니, 빨간색 화살표로 가리킨 갈색침전물은 ki67이 발현된 부분이겟죠? 그럼 이부분 말고 아래쪽에 hair follicle부분도 검은색으로 염색이 되었는데 이 부위는 ki67과는 관련없는 그냥 멜라닌 색소 침착?같은 건가요?? 그리고 전반적으로 background도 색이 연하게 떴는데 dab반응 시간을 늘려야되는건가요? 저는 9분정도 반응시키고 갈색으로 바뀐거 확인하고 마운팅하였습니다. dab 초보라 도움 부탁드립니다ㅠ
회원작성글 12312  |  2022.04.25
Q. 사이토카인의 단백질 분해 촉진 기전이 궁금합니다.
악액질과 관련하여 단백질 분해 억제 실험을 계획하고 있습니다. 자료 수집중 '호염증성 사이토카인'  (IL)-1, IL-2, interferon 및 tumor necrosis factor (TNF) 등이 악액질 발생에 가장 중요한 역할을 한다는 연구결과를 확인했습니다. 사이토카인은 근단백 합성을 감소시키며, 단백분해를 촉진시키는 역할을 해서 근육량을 감소시키게 되는 것인데, 이때 어떤 기전으로 단백분해를 촉진시키는지 알아보려고 하였으나 자료가 많지 않아 어려움을 겪고 있습니다. 관련된 조언해주시면 감사하겠습니다..
회원작성글 ssk8235  |  2022.04.18
Q. CTL에 의한 target cell lysis와 necrosis, apoptosis
안녕하세요. T cell의 tumor killing mechanism을 공부하던 중 의문이 생겨 질문 드립니다. 논문에서는 T cell이 killing하는 과정을 target cell이 lysis되었다고 표현하였는데, lysis라면 일반적으로 cell이 터져서 내부 물질이 외부로 유출되는 necrosis로 볼 수 있나요? 저는 지금까지 perforin과 granzyme B, IFN-gamma 및 TNF-alpha, Fas-FasL 등의 pathway가 모두 target cell의 apoptosis를 일으킨다고 알고 있어서, 혼란이 있어 질문 드립니다. * 그리고 혹시 ICAM-1과 LFA-1의 binding도 Fas-FasL처럼 extrinsic pathway로 apoptosis를 유도하나요? Bystander tumor killing 시 이 binding이 activated T cell에 의한 killing에 대해 susceptible하게 만든다고 하는데, 관련 자료를 찾지 못해 추가 질문 드립니다.
회원작성글 dj_hwn  |  2022.04.17
Q. CD11c+F4/80+CD11b+
논문에서 'CD11c+F4/80+CD11b+' 이렇게 나오는데 이게 무엇을 의미하는건가요 marker랑 CD11c+, CD11b+ 가 결합하고 있는것인가요?
회원작성글 haniy  |  2022.04.14
Q. Lewis lung carcinoma(LLC) tumor tissue에서의 density gradient centrifuge
저는 mouse에 s.c로 injection한 LLC tumor 조직을 gentleMACS로 dissociation 후 그 안에 존재하는 면역세포들을 분석하고 있습니다.  그런데 flow cytometry시 tumor cell에 의해 aquisition 시간이 너무 오래 걸려 leukocytes를 enrichment 시키기 위해 density gradient centrifuge를 진행하고자 하였습니다.  제가 찾아본 protocol 상에서는 Cytiva 사의 percoll 제품을 기준으로  40%-80%, 30%-70%, 44%-67% 등의 조건으로 낮은 농도의 solution에 cell을 re-suspension 후 overlay 하여 centrifuge를 돌리는 것으로 나타나 있는데 실제로 진행해보면 분리가 잘 되지 않아 경험자의 조언을 듣고자 합니다.  지금까지 해본 조건으로는 위 언급한 %의 percoll을 이용하여  1. 325g acc. 5 brake. 5 25min, RT 2. 600g acc. 0 brake. 0 30min, RT 3. 800g acc. 0 brake. 0 30min, RT  로 진행하였는데 모든 cell이 interphase에 모여버리거나 거의 대부분 pellet으로 down 되어 버리는 현상만이 관측되고 있습니다.  해당 tumor cell로 density gradient centrifuge 실험을 해보신 분이 계시다면 tip을 알려주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 Coolzinc  |  2022.04.08
Q. 증류수 장비 구입할까요?
증류수를 하루에 1000~ 1500L정도 사용할 예정인데요    이런경우는 그냥 증류수 구입하는게 나을까요??  아니면 장비를 구입해서 제조사용을 하는게 나을까요?
회원작성글 슾하클링  |  2022.04.01
Q. western blot과 immunohistochemistry
안녕하세요 western blot과 immunohistochemistry에 관해 자료 조사하다 궁금한 점이 생겨 여쭙니다 제가 조사한 바로는 둘 다 단백질 검출에 쓰이며 주로 항원항체 반응을 이용하는 것 같더라구요 이 두 방법은 자주 비교되는 방법들인가요? 이를테면 이런 경우엔 western blot이, 다른 경우엔 immunohistochemistry가.. 이런 식으로요.  또 수업에서 model은 traumatic brain을 가진 동물을 이용하셨는데.. 특별한 이유가 있어서인지도 알고 싶습니다.  
회원작성글 멜로디엠  |  2022.03.29
Q. 샘플 희석 계산 하는법
이제 막 입학한 대학원생인데 샘플 희석해서 마우스에 투여하는 실험을 할 예정입니다. 하지만 샘플 희석 계산하는게 아직 어려워서 난항을 겪고 있는데요.. 20mg/ml의 항원A를 10ug이 포함되게끔 pbs로 희석하고,  0.5mg/ml 의 물질B를 100ug이 되게 pbs로 희석한 것을 혼합했을 때 최종부피 30ul를 하나의 마우스에 투여해야할 때 어떻게 희석해야하는 것일까요...? 답변 부탁드리겠습니다.  
회원작성글 rlatmddus  |  2022.03.22
Q. 항생제 감수성 테스트
보통 항생제 감수성 실험에 페니실린 암피실린을 쓰던데 같은 계열이지만 더 강한 아목시실린을 사용해도 괜찮을까요?
회원작성글 rlawhddjs4..  |  2022.03.18
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