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Q. 모발건강, 탈모실험 관련하여 문의드립니다.
안녕하세요. 탈모관련 실험을 셋팅중입니다. 국내에서 human dermal papilla cell을 2번 구매하였습니다. female과 male 40 years old로 구매를 하였는데, 두 세포모두 minoxidil 10uM을 처리하였을 때, 세포성장인자 (KGF, VEGF 등) 에서 발현이 나타나지 않습니다. primary세포에 minoxidil을 처리하였을 때, 왜 반응이 일어나지 않는지 궁금합니다.   조금이라도 아시는 분들은 답변 달아주세요 ㅜㅜ <trouble shooting 조건> (1) 세포 재 구매 (2) DPC 전용배지로 배양중 (3) minoxidil, finasteride등 positive control 농도별 테스트 진행함    - 발현 변화 없음. (4) primer 변경 등  
회원작성글 클린벤치  |  12.01
Q. 유기산 HPLC 검출 문제
안녕하세요. 해양생물을 공부하고 있는 대학원생입니다.    이번에 바지락를 스트레스 상황에 노출시키고 대조군과 비교하는 실험을 하면서, 대사 물질을 분석하는 방법을 시도해보았습니다.    대상 물질은 Lactic, maltic, fumaric, succinic acid로, 실험실 내에서: 실험 종류 후 급속냉동->  동결건조 -> 파우더 처리 -> 분석원 의뢰를 거쳐 분석을 하였습니다. 그런데 결과서를 받아보니 오직 fumaric만이 검출되고 나머지는 검출되지 않았습니다. 타 논문을 바탕으로 HPLC에서도 나머지 물질들이 충분히 검출 가능한 것(즉, 검출이 가능하며 바지락 내에 모두 충분히 존재함)으로 나타났는데, 현재 해당 문제가 2번째 발생하였고, 분석원 측에서도 원인을 알 수 없다 하여 전처리 상에 문제가 있는 것인지 의심되는 상황입니다.    1. 위의 전처리 과정에서 fumaric acid 외 다른 물질이 손실될 만한 원인이 되는 상황이 혹시 있을까요?  2. 혹시 전처리 상의 문제가 없다면 HPLC보다 더 정밀한 수준의 분석법이 있을까요? (GC-MS를 사용하는 논문도 많이 있긴합니다)    질문 내용이 모호한데 답변주시면 큰 도움이 될 것 같습니다.    읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 수비니즘  |  12.01
Q. cell subculture 방식에 대한 질문
안녕하세요  새내기 대학원생입니다.   cell subculture시 trypsin 처리 하고 media로 트립신을 희석시켜서 하는 방법과 trypsin 처리 하고 centrifuge 돌려서 trypsin 제거 하고 media로 resuspension 해주는 경우 중 어떤 것을더 선호하시나요? 선호하시는 것이 있으시다면 그 방법을 선호하는 이유와 만약 첫 번째 방법을 사용하신다면 트립신이 몇 퍼센트까지 괜찮은지 알려주신다면 감사하겠습니다.(예를들면 media 20ml에 트립신 2ml 정도 -> 10%등)   감사합니다.
회원작성글 쥐팤  |  12.01
Q. fastq 파일 분석 방법
안녕하세요? 너무 기초적인거라서 글 올리기는 좀 부끄러운데요;;;   ncbi sra 에서 마이크로바이옴 데이터 fastq를 받아서 보려고 합니다.   fastq 다운받으면 시퀀싱으로 나열되어 있죠? 그럼 그 시퀀싱 분석을 하여 어떤 균주인지 확인하려고 하거든요;;    다운받는 방법이나, 어느것을 다운받아야 할지 잘 모르겠어요... 시퀀싱 분석은 어떻게 하는지도요,,,, 하나하나 과정을 잘은 모르지만, 인포 주시면 도움이 많이 될 것 같습니다.  
회원작성글 방울  |  12.01
Q. GPC 이동상 제조법
GPC 초보입니다ㅠㅠ 수용성 GPC 돌리려는데 [물 + 0.2 M NaNO3 + 0.01 M NaH2 PO4 , pH 7로 조정] 용액 1L에 NaNO3이 0.2M, NaH2 PO4이 0.01M의 농도로 제조한 것이라는 거 맞나요?  
회원작성글 하이이이이  |  12.01
Q. blunt end ligation
blunt end ligation하다가 잘 안되는 부분이 있어 질문 올립니다. Vector는 2.7kb, 6kb로 Sma1 처리를 하여 blunt end, Insert는 1.2kb (Pfu polymerase, PCR product)로 둘다 blunt end 입니다. 농도랑 순도 모두 100ng/ul 이상, 2.0 (260/280)이며 ligation 시 10:1 (Insert/Vector), 4℃, O/N로 진행하고 있습니다. 근데 계속 Vector selt ligation만 나와 고민 중입니다. (제한효소, Insert primer로 확인) 저가 생각한 대안은 아래와 같습니다. 1) Insert/Vector 비율 늘리기 2) ligation 시 Sma1 소량 넣어 진행 (buffer, Sma1 volume 등 정확한 protocol은 모름) 혹 이것 외에 더 효율적인 방법이나 놓친 부분이 있을까요?    
회원작성글 구릅  |  12.01
Q. 살리실산메틸과 염화제이철
살리실산메틸과 염화제이철이 만나면 적자색을 띄는 이유가 무엇인가요?
회원작성글 lszna  |  12.01
Q. 섹션 할 때에 조직 갈라짐
파라핀 블록을 만들고 섹션을 할 때에 파라핀 영역은 괜찮은데 조직 영역이 완전 갈기갈기 찢어져서 섹션이 됩니다.. 갈라지듯..? 일단 prep하고 나면 4%PFA에 24시간 정도 4도씨에 보관한 뒤 30분 정도 흐르는 물에서 wash하고 Tissue processor 기계에 넣어 조직 처리 후 파라핀블록 만듭니다. organ은 skeletal muscle입니다.. 어떤게 문제인지 모르겠네요ㅠㅠ 동기에게 듣기론 4%PFA하기 전에 Sucrose에 넣는 것도 좋다곤 하던데요..
회원작성글 별헤는밥  |  12.01
Q. 음식물의 3대 영양소 측정 방법
안녕하세요. 음식물의 3대 영양소 성분을 한번에 측정하는 방법으로 근적외 분광분석법을 찾았는데요, 이 방법을 수행할 수 있는 기기와 측정하는데에 보통 시간이 얼마나 걸리는지 궁금합니다.   만약 따로 따로 분석한다면, 탄수화물은 크로마토그래피, 단백질은 켈달, 지방은 속슬렛 방법을 사용하는 기기를 이용하게 되면 각각 측정하는데에 보통 시간이 얼마나 걸리는지 궁금합니다.
회원작성글 도비는자유예요  |  12.01
Q. 나노입자의 in vivo 정맥 투여시, 사용되는 용액에 질문이 있습니다.
나노입자 같은 경우에는 콜로이드 분산을 시킨 상태로 쥐 in vivo를 확인하려면 정맥투여를 한다고 생각을 하고 있는데, 주사용제로 사용되는 용액이 밑에 있는 주사용제들로 사용이 되는건가요?   생리식염수 또는 인산염 완충 식염수(PBS) 및 글루코스, 폴리에틸렌글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물과 같은 용해보조제를 함유하는 용액을 포함하나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
회원작성글 열심히는하고싶은  |  12.01
Q. cell이 이상합니다ㅠㅠ( mcf-7)
MCF-7 cell을 받아서 스탁 만들어두고 키우고있습니다. 근데 계속 컨탐되는거 같아요. background가 더럽습니다ㅠㅠ dish를 약간 기울면 하얀색 알갱이? 모래처럼 움직이는게 보입니다. 일단 급한대로 1% PS media를 넣어줬습니다.. 예전 cell도 컨탐되어서 다시 스탁 푼건데 풀때는 괜찮습니다. 풀고 cell 확인하면 잘 붙어있습니다. 계대 한번해도 잘 붙어있는걸 확인합니다. background도 깨끗해요. 근데 3번째 넘어갈때 항상 저렇게 컨탐되네요..이유가 뭘까요?ㅠㅠㅠ 배지도 새로 따고 pbs도 새로 땄는데.. 트립신이 컨탐됬을수도 있을까요? 실험실 사람들과 같은 벤치쓰는데 다른사람들껀 괜찮아 보입니다. 인큐베이터도 같이 사용하고있어요.
회원작성글 헤우니  |  12.01
Q. ES cell line lentiviral transduction 후 delay된 cell death
최근 embryonic stem cell 라인에 lentivirus를 이용하여 transduction을 시켜주는 실험을 하고 있습니다.  Infection으로부터 24시간 후 selection을 시작해주었고 세포는 몇 일 동안 잘 자라서 passaging도 한번 해주었습니다. 한 5-6일 정도는 selection drug이 포함된 미디엄에서 아무 문제 없이 잘 자란 것 같습니다. 그런데 갑작스럽게 massive한 cell death가 발생하기 시작했습니다. 세포가 자라기는 하는 것 같은데 그 속도와 비슷하게 (아니면 조금 더 빠르게?) 사멸하여 육안으로도 둥둥 떠있는 세포가 보일 정도입니다. 현미경 상으로 관찰하였을 때 컨탬처럼 보이는 부분은 없고, 죽은 셀만 제거해주면 바닥도 깔끔해보입니다 (mycoplasma 컨탬 검사는 안 해봤습니다). 이렇게 보면 바이러스의 문제인가 싶기도 하지만, 동일한 바이러스로 infection된 embryonic stem cell 다른 셀라인은 이상 없이 아주 잘 자라고 있어서 도대체 뭔가 싶습니다... 같은 embryonic stem cell이라도 셀라인마다 efficiency가 다를 수가 있나요? efficiency 문제라면 왜 cell death가 delay되서 나타나는지도 잘 모르겠습니다 (transduction 없이는 보통 selection 3일차에 90% 이상 사멸합니다).  작은 힌트라도 소중한 답변 주시면 정말 도움이 많이 될 것 같습니다...감사합니다!
회원작성글 BioMate  |  12.01
Q. SDA 배지 조성 관련 질문 있습니다
SDA 배지 조성에 대해 찾아 보니 어떤 곳에서는 dextrose, peptone, distilled water가 , 어떤 곳에서는 Peptic digestion of animal tissues와 Pancreatic casein digestion이 있다고 하는데 배지 제조사별로 조성이 다른 건가요?
회원작성글 dpdrmfjffl..  |  11.30
Q. HPLC 추출물 중 유효성분 함량 계산 도와주세요ㅠㅠ
안녕하세요  A라는 자생식물 100g을 100% 에탄올로 추출 및 농축하여 (동결건조는 안하고 용매 모두 휘발) 약 3g의 고형분 (dry weight)을 얻었습니다. 여기에 분석을 위해 100% 에탄올로 다시 녹여서 3g/15mL 즉, 200mg/mL 농도의 추출물을 얻었습니다. (200000 ppm 이라고 가정) 이 추출물 샘플을 에탄올에 2000배 희석하여 100ppm으로 만들어 분석에 사용하였습니다.   ellagic acid를 스탠다드로 검량선을 그렸고 추출물 100ppm을 찍고 그 area 값을 검량선에 대입하여 0.7ppm이라는 결과를 얻었습니다. (injection volume은 동일하게 함)  그럼 이 때, 추출물 100ppm 안에 ellagic acid가 0.7ppm이 들어있는 것이 맞나요?... volume이 동일하니까?.. ㅠㅡㅠ 일반적인 계산법과 달라서 헷갈립니다... 
회원작성글 gpwhfb  |  11.30
Q. PCR시 100bp이하의 band 검출 관련입니다.
PCR을 했는데 원래 detect 되어야하는 size에서는 band가 안나오고 2번째 line과 같이 100bp 이하에서 band가 나왔습니다... 다른 유전자가 검출된 건가 싶어 Gel extraction, TA-cloning후 prep 해서 sequencing을 보냈는데 결과에서 다른 유전자가 아닌 T-vector로 나옵니다. 이유 알고계신 분 있으시면 꼭 답변 부탁드립니다 ㅠㅠ 감사합니다.  
회원작성글 Cheddar  |  11.30
Q. DPPH 실험 관련 질문 있습니다.
제가 오디 추출물의 항산화능을 측정하기 위해서 dpph +알코올 dpph +10% 오디추출물 dpph + 10% 레모나 수용액 이렇게 분광광도계로 흡광도 측정을 했는데 dpph+알코올 한 게 0.1...이런 식으로 나오고 다른 거는 흡광도 값이 엄청나게 크게 나와요. 그래서 그냥 흡광도 값 자체만 가지고 항산화능을 어떤게 더 좋다 이렇게 결론 내릴 수 있으면 좋겠는데 그러면 흡광도 값이 낮은 게 항산화 효과가 좋다고 봐야할까요?
회원작성글 flauvel  |  11.30
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