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Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
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Q. Serum 구분
Horse Serum을 구입하려고 하는데요 Donor가 적어져 있는 serum과 안 적어진 serum의 차이는 무엇일까요? 그리고 custom serum도 있던데 혹시 어떤건지 알려주실 수 있을까요?   도와주세요!
회원작성글 BIOHIII  |  02.06
Q. 써모GC 사용중입니다만 Amount 값은 무엇을 의미하는건가요?
GC사용중에 내부물질(EG)을 분석하는데Rel.Area값과 Amount값이 나오는데. Amount 값으로 데이터를 사용했는데요 Amount 값은 각각 내부물질 함량으로 봐도 될까요?
회원작성글 궁금이입니다.  |  02.06
Q. Streptavidin (conjugate용) 국내 제조업체 문의
안녕하세요.  현재 streptavidin conjugate 실험을 하고 있습니다. streptavidin 1g 이상 한번에 구매를 하고 싶은데요. 혹시 국내 제조업체가 있을까요? 문의 드립니다. 
회원작성글 전사  |  02.06
Q. CFU assay 질문: liver로 translocation한 대장균 확인을 위한 실험
  안녕하세요, intestinal barrier관련하여 박테리아의 liver translocation을 확인하고자 CFU를 진행하였습니다. liver 0.15g 또는 kidney 1개를 통째로 1XPBS base 0.05% NP-40, 1%BSA solution 2ml에 갈았습니다. 이때는 dounce tissue grinder 를 사용하였습니다. (A,B pestle을 모두 사용)   이후 희석하지 않은 원액 100ul을 포함하여 serial dillution한 용액을 100ul씩 LB plate에 도말하였는데  12시간 정도 지나 확인하였을때 원액을 도말한 plate에서 조차 colony가 확인되지 않았습니다.   여러가지 trouble shooting을 해보려 논문도 찾아보고 이것저것 검색해보았는데 도저히 잘못된 점이 무엇인지 알기가 힘들어 이렇게 조언구하고자 질문드려봅니다.   대장균의 translocation을 확인하기 위함이라 LB plate를 사용한 것에는 문제가 없어보입니다. buffer역시 NP-40의 농도차이는 있어도 여러 논문에서 해당 buffer를 사용하는 것을 확인했습니다. 직접 연구실의 DH5a를 해당 buffer에 1/10 희석하여 도말해보아도 잘 자라는것을 확인 했습니다. buffer와 LB plate모두 아래 논문을 참고하였던 것입니다.  https://doi.org/10.1016/j.immuni.2018.12.020 dounce grinder를 사용하였을때 B pestle의 유격이 너무 좁아 bacteria가 죽었을까 생각도 했었는데, bacteria크기는 고작 2um이하이고, B pestle의 유격은 20um이라 문제 없을것 같습니다.   위의 논문의 figure7을 보면 정상 WT mouse에서도 CFU가 어느정도 측정되는것을 확인할 수 있는데, 저는 대조군과 실험군 모두에서 단 하나의 colony도 관찰할 수 없었어서... 조언 주시면 정말 감사하겠습니다. 긴글 읽어주셔서 감사드리며 좋은 한주 되세요
회원작성글 아이이이잉  |  02.06
Q. 희석 계산 질문이 있어서 질문드립니다.
저희가 가지고 있는 시약은  0.25mg 의 NAD 입니다. (Molecular Weight는 663.43 입니다) 1M NAD 를 만들려고 하는데, 어떻게 계산을 해야 하나요? 
회원작성글 Illl!Ill  |  02.06
Q. 콜라겐 코팅한 hepg2 세포의 morphology가 괜찮은 건가요? 첨부파일
안녕하세요, 저번에 hpeg2 세포가 정전기적 표면처리된 T25 Flask에서 잘 부착되지 않고 뭉치는 문제로 이 게시판에 질문을 남겼었습니다.   그래서 이번에 0.1 mg/ml 농도로 콜라겐을 T25 Flask에 코팅한 후에 세포를 thawing해 보았는데요, 괜찮은 건가요? 비교 사진을 첨부하였습니다. 참고로 사용한 미디어는  MEM 90% + 10 % FBS+ 1% P/S 입니다. 제가 보기에는 콜라겐 코팅 Flask에서 더 잘 부착되어 보이는데... 다른 분들이 보시기에는 어떠신가요 ㅜㅜ?  
회원작성글 cheer up c..  |  02.06
Q. Raw cell passage
안녕하세요 저는 Raw cell을 이용해서 실험을 하고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 p10 정도 되는 cell을 stock으로 만들었는데 이 stock을 다시 풀면 p10에서부터 카운트 해야 할까요? 아니면 p1에서 다시 시작하는건가요? 만약 p1부터 시작하는거라면 cell이 n2 tank에서 회복을 하는 것인지 궁금합니다 또한 passage 관리하는 방법도 알려주시면 감사드리겠습니다!
회원작성글 감귤서리범  |  02.06
Q. cloning 과정 ampicilin plate
ligation 후 E.coli competent cell 에 transformation을 진행 후 ampicilin plate에서 키운 후 overnight 된 뒤 plate를 확인해보면 콜로니가 골고루 plate에 뜨는게 아니라 가운데 콜로니 하나에 주변에 콜로니가 모여서 뜨는 현상이 나타납니다. 냄새도 오염된거 같은 냄새가 나고요. competent cell이 문제인가 싶어 바꾸서 진행해도 똑같은 현상이 일어나서 질문드립니다. 제가 ligation 시 vector와 insert의 농도를 잘못 계산하여 진행해서 이런 현상이 발생하는것인지, 아니면 실험과정에서 오염이 발생해서 이러한 현상이 나타나는것인지 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 분자생물학도  |  02.06
Q. PCR primer design 도전 중 고난과 역경..
안녕하세요 최근 PCR을 세팅하고있는 피린이 입니다. 현재 apoptosis 관련된 마커들을 몇가지 확인하고자 primer design을 진행 중 입니다. 여기서 한 가지 궁금한 점이 생겨서 이렇게 질문드리게 되었습니다.  보통 Primer를 짜기 전에 보고자하는 유전자서열을 전체 긁어온뒤 프라이머를 짜고있습니다. 조금 더 구체적으로는 NCBI, UCSC 에서 해당 유전자를 검색하고 타겟 유전자를 불러와 유전자멥을 그려놓습니다. 프라이머를 20-24 mer 정도의 크기로 Tm 값이나 GC%, target gene size 등 확인하며 디자인 진행 중에 있었습니다. 여기서 궁금한 점은 다음과 같습니다. 1) target gene만 인식하는지는 어떤식으로 평가를 하시나요? 2) cleaved form 의 유전자들을 어떻게 디자인을 해야할까요..?? 유전자를 검색해도 cleaved ~~~ 이렇게 검색하면 따로 검색이 되지 않아서 위의 방식으로 디자인을 진행하지 못하고 있습니다..ㅎㅎ.... 여기저기 검색해가며 찾아보려하는데 이렇다할 해답을 얻지 못했습니다ㅠㅠ 물론 다른 논문들을 찾아보면서 해당 primer의 sequence를 얻을 수는 있었습니다만, 저는 제가 직접 짜는 방법을 알고있는 것이 더 좋을거라 생각이 들어 이렇게 질문드립니다.  염치없지만 PCR 고수님들은 보통 어떻게 찾으시는지 도움을 부탁드리겠습니다!!
회원작성글 대하권생  |  02.05
Q. stem cell seeding 부착문제 or Cell death
안녕하세요 석사과정 2년차 대학원생 입니다ㅠㅠ 지금 3일째 hESC(human stem cell)을 풀었다가 다시 시도하는 것을  반복중입니다.... -80도 deepfreezer에 2017년도에 얼린 cell을 matrigel coating된 well에 풀었습니다.  근데 hESC들이 부착되지 않고 대부분 single colony가 되어  둥둥 떠다닙니다...  부착이 되지 않은 것인지, cell들이 다 죽어서 떠다니는 것인지ㅠㅠ 3일동안 너무 스트레스 받네요ㅠㅠㅠ   stem cell에 대해서 잘 아시는 분 계실까요?
회원작성글 약대석사응애  |  02.05
Q. midi prep 이후 plasmid electrophoresis했을 때 이상한 밴드가 나옵니다. 첨부파일
선생님들 안녕하십니까? 학부생입니다. 현재 plasmid를 DH5a cp cell에 transformation해서 midi prep한 다음 confirm하는 과정을 진행중인데요. 이상한 밴드가 계속 나와서 머리가 아픕니다...   gel은 0.7%고 non-cut plasmid입니다. plasmid가 맞는지만 적당히 확인하기 위해 cut은 안했고요. 사진에서 2번레인이 이전에 쓰던 것이고 (stock) 3,4 번레인이 새로 midi한건데  위쪽의 supercoil이나 nick 이런 밴드는 알겠는데 밑에 100-300bp?에 이상한 밴드가 눈에 보일정도로 진해졌네요. 자세히 보면 맨 윗밴드도 진해진 것 같고요. 이 밑에 밴드가 뭔지 모르겠습니다. 이전 랩에서 midi하면서 이런 밴드를 본 기억이 없는데.. contamination된건지?    260/280값이 조금 높게 나오기는 하는데 (1.9이상) 이건 stock midi했을 때에도 마찬가였습니다. 아마 midi에 쓰는 buffer가 오래된 거라 그런 것 같은데.. 그걸 감안해도 눈에 보이지 않던 밴드가 진해져서 머리가 아프네요.   제가 생각하기에는 gDNA나 RNA가 섞여있거나 (당연히 Sol1에 RNase A 처리하고 4도씨 보관, 실험중에도 ICE보관하면서 했습니다) plasmid denaturation이 되어서 single strand가 나왔거나(이전에도 똑같이 inverting하고 lysis 5분했는데 왜..) 하는 것 같은데 이걸 어떻게 해야 할 지 모르겠습니다.  transfection할 때 사용할 거라 이상한 것 같으면 처음부터 그냥 새로운 CP cell 까서 buffer까지 새로 바꿔버려야 할지... RNase나 enzyme cut을 시도해봐야 할지 고민입니다. 만약 RNA contamination이라면 RNase를 처리하고도 293T에 transfection 할 수 있는지도 궁금합니다. 사용한 midi kit는 N*****B**** kit입니다.  이전에 Q사에서는 이런게 보이지 않았던 것 같은데.. 아무리생각해도 잘 모르겠네요. Neutralization 이후 ICE incubation과정이 없어서 그런건지..   도와주세요 선생님들.. 
회원작성글 큰곰인형  |  02.05
Q. 반복수 질문 (기초..)
안녕하세요. 데이터 정리 도중에 기본적인 질문이 있어서 올립니다! cell proliferation을 보려고 1,2,3,4일차 cell counting을 하고 cell doubling time을 계산했는데 3->4일차 1반복이 다른 값에 비해서 많이 튄 것을 확인했습니다.  1. 이 값을 빼고 2,3 반복수로만 데이터를 정리할지 고민됩니다.  2. 그래프를 그렸을때 1반복 그래프 모양이 다른 cell proliferation graph와 비슷한 형태를 보여서 이게 더 정확하게 값이 나온것인지,, 다른 2,3 반복수는 1일차에서 seeding한 세포수에 비해 줄어들었지만, 비슷한 그래프 모양을 띠었습니다. 정리하자면, 어떤 데이터를 빼고 어떤 데이터를 써야할 지 모르겠습니다. ㅜㅜ
회원작성글 미생이  |  02.05
Q. siRNA Transfection 후 western blot 밴드 변화
siRNA 처리 후 6시간 뒤 Media Change 진행 후 48 시간 뒤에 Harvest 하여 진행하였습니다 Havest전 cell morphology상에서 transfection이 확실하게 이루어 진 것은 확인하였으나 westen blot band상에서는 control과 siRNA의 차이가 전혀 없습니다 Media change하고 시간을 48시간 보다 더 두어보는 것이 방법일까요?? 도움 좀 얻고 싶습니다
회원작성글 uuy  |  02.05
Q. protein purification 중 binding 문제
안녕하세요, protein purification 실험 진행하는데 막히는 부분이 있어 여기에 여쭤봅니다.  단백질 실험은 처음 해보는지라 모르는 점이 많음을 양해 부탁드립니다.    target 하는 단백질 size 는 대략적으로 28kDa(his tag size 포함) 이고, Ni-NTA resin 을 이용하는 Affinity chromatography 를 통해 정제하려고 하였습니다. 사용한 Tag은 His-tag이며, N-term과 C-term 양쪽에 모두 6x His를 가지고 있습니다 (N-term이 stable 하다는 얘기를 듣긴 했지만, 양쪽에 his tag를 가지고 있으면 binding 이 더 잘될 것이라는 생각이 들어 N/C -term 모두에 his-tag를 달았습니다.) 실험 방법은 다음과 같습니다.  1. 25ml 의 cell culture를 centrifuge하여 pellet 을 수득한 후, lysis buffer 5ml 로 resuspension 한 다음 세포파쇄 (via sonicator: 50%, 5'' on/ 5'' off)하였습니다. sonication 이후 centrifuge 하여 supernatant를 lysate로 사용하였습니다. (soluble fraction)  2. 사용할 column (10ml의 컬럼)을 1CV 만큼 equilibration 해주었습니다.  3. Ni-NTA agarose resin 을 column에 1ml 충진 후, binding buffer 3CV flow through.  4. Sample 을 column에 load 한 후, 4℃ 에서 rotation 준 상태로 O/N 5. 이후, Sample을 flow through 하였습니다. (이 때 binding 을 좀더 시키기 위하여 flow through한 sample을 약 3회 정도 re-load하여 최종 Sample flow through 를 확보하였습니다.  6. (+10mM imH)로 3CV 만큼 washing  7. 1CV의 50mM~500mM imH로 각각 elution  8. SDS-PAGE 로 gel 확인 (Gel 사진은 하기 그림과 같습니다/ 하기 문제점에 기재하였듯, Elution 된 양이 적어 50mM 이상 elution 하였던 lane은 그림에서 뺐습니다.)  문제점과 질문사항은 다음과 같습니다.  Issue 1. Sonication 시, 많은 양의 cell 이 깨지지 않음이 확인됩니다. 우선적으로 사용한 sonication의 조건은 general 하게 사용하는 condition 으로 수행하였습니다. 질문) sonication 시 cell 이 잘 안깨지는 이유가 무엇인지 여쭤보고자 합니다. (많은 양의 cell 이 깨지지 않았더라도, 현재 gel 상 Soluble faction 에서는 충분한 target protein이 확보되었기 때문에, 큰 문제는 되지 않겠지만.. 그래도 일반적인 lysate와는 turbidity 가 많이 차이나서 여쭤봅니다.) Issue 2. Soluble fraction 과 Sample flow through 에서 target 단백질의 size 가 거의 비슷합니다. -> Ni-NTA Binding의 문제라고 생각됩니다. binding 효율을 늘리고자 4도에서 rotation 주며 o/n 하였으나 실질적으로 target 단백질이 이 과정에서 많이 손실되는 것으로 보입니다. 따라서, elution 시에도 당연히 target 단백질이 적게 수득됩니다. (  질문) binding 이 잘안되는 경우, binding 효율을 늘리기 위하여 어떤 방법들을 사용하시는지 여쭤보고 싶습니다. 또한, gel 사진을 해석하기에 또 다른 문제점들이 있는지를 알고 싶습니다.  ** binding이 안되는 경우, 보통 3차 구조로 his tag이 숨어버리는 경우를 의심하는 것으로 알고 있습니다. 이런 숨는 케이스를 확인하고자 하면, 어떤 방식으로 확인해야 하는지도 여쭙고 싶습니다.   감사합니다. 
회원작성글 ATTENSION  |  02.04
Q. 관리된 소 조직 구할 수 있는 방법이 있을까요?
소(bovine) 조직 내 물질을 분석하는데 검량선 그릴때 blank조직이 필요해서요.. 열심히 찾아보는데 서칭능력이 부족한지 안나오네요.ㅠ 진짜 어디 도축장 발품을 팔아야하는지..
회원작성글 fbtpa4  |  02.04
Q. Immunoprecipitation 후 immunoblot 결과 해석
논문을 보던 중 Western blot 결과 해석이 어려워서 질문드립니다ㅠㅠ... 질문은 크게 두가지입니다.   예를 들어, A단백질은 B, C, D와 complex를 형성한다고 했을 때, [질문1] Q단백질을 knockdown시킨 cell lysis에서 A 단백질을 Immunoprecipitation 후, B,C,D 단백질에 대한 antibody로 western blot을 하였을 때, 컨드롤(scrambled control)에 비해 B의 증가량이 C, D의 증가량에 비해 매우 크다는 것은 무엇을 의미하나요? [질문2] 위 질문의 연장선으로,, Q단백질을 knockdown시킨 cell lysis에서 B 단백질을 Immunoprecipitation 후, A,C,D 단백질에 대한 antibody로 western blot을 하였을 때, 위의 질문결과와 다르게, A,C,D의 증가량이 유사했다는 것은 무엇을 의미하나요?
회원작성글 옹듸  |  02.04
Q. western blot band 개선 좀 부탁드립니다 ㅠㅠ
western blot을 진행하고 있는데 아래사진처럼 dot 처럼 나오는 문제의 원인을 파악하지 못해서 이렇게 질문드립니다.... 단백질 사이즈 ; 14,16kDa 15% SDS-PAGE, Bio-rad 사용 Running ; 100volt, 2h 30min   Transfer ; 100volt, 1h 일단 이런식으로 dot으로 나오는 게 아래의 작은 size 단백질만 그렇고 GAPDH나 다른 사이즈 단백질은 크게 문제 없이 나옵니다.... 작은 사이즈의 단백질에 대해서 해당문제를 해결하려면 어떻게 해야하는지 도움부탁드립니다..
회원작성글 뚜둥  |  02.04
Q. qPCT Tm값
안녕하세요. qPCR을 처음 해본 학부생입니다. qPCR 진행 후 Tm값 결과를 얻었는데, PCR mixture가 약간 부족했던 튜브만 Tm값이 살짝 다른 위치에 나왔는데 Tm값과 PCR mixture volume이 어떤 관계가 있는건지 궁금합니다!! PCR mixture 양이 아주 달랐던건 아닌데 이거 말고는 원인이 없는거 같습니다… 너무 궁금해서 계속 찾아봤는데, 구글링해봐도 잘 모르겠습니다ㅠㅜ 아직 부족한 부분이 너무 많습니다. 너그럽게 이해해주시고, 알려주시면 정말 감사하겠습니다 !!
회원작성글 영혼가출중  |  02.04
Q. 실험하다답이안나와요
1번 100pmol primer를 10pmol 로 희석을하고 10pmol에서 3.2pmol을 만들려면? 2번 PCR밴드가 끌리면? 어떻게 해야하죠?
회원작성글 콩콩콩콩  |  02.03
Q. 푸른곰팡이 배양 및 streaking 질문입니다
제가 푸른곰팡이를 배양하려 하는데 귤껍질이나 상한 음식에서 푸른곰팡이가 자라나면 포자를 루프로 때어내서 바로 배지에다가 접종시기면 될까요..?
회원작성글 란울  |  02.03
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