[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
이엔셀
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioWave  Vol.25, No.2 (2023년 2월) 오픈
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. 단백질 농도 측정에 대하여 질문드립니다.
농도계산법 : 흡광도 측정 값 ⅹ희석비율(%)ⅹDNA 측정 상수 값 (50) /단위 ㎕로 환산. DNA 를 총 500 ㎕를 맞췄다. 그리고 5 ㎕ DNA 를 1,000 ㎕ 물로 희석하여 비율은 200 이다. A 260 = 0.064 과 A 280 = 0.039 이다. DNA 의 농도와 순도는? 0.064 x 200 x 50 = 640 ㎍/ml = 0.64 ㎍/㎕ x 445 ㎕ = 284.8 ㎍을 갖고 있다. 순도(Purity)는 0.064/0.034 = 1.88 이다. 그러므로 단백질 등의 오염 순도가 높다. 여기서 445 는 대체 왜곱하는건가요?
회원작성글 알토  |  2022.06.13
Q. Mouse로부터 gDNA를 추출해 genotyping하는 실험 중 입니다
Mouse의 꼬리로 부터 gDNA를 추출해 genotyping하는 실험 중 궁금한 것이 생겨 질문 드립니다. Proteinase K를 사용하고 하루동안 incuvate 시켜놓은 샘플에다가  50ul의 saturated NaCl(6M)을 첨가하였고 원심분리 후 상층액을 취하여  DNA를 얻어냈습니다. 그런데 왜 포화 NaCl을 첨가했을때 DNA만 용해되고 나머지 물질은 불용성 물질이 되는지 궁금합니다. 또한 genotyping 한 결과 정상 밴드와 KO된 밴드를 제외한 밴드는 HT에서만 나오는 이유는 무엇일까요? 이 밴드를 줄이려면 어떻게 해야할까요? 도와주시면 정말 감사하겠습니다  
회원작성글 델라웨어유학생  |  2022.06.11
Q. DNA농도를 높이려고 하는데 조언좀 부탁드립니다.
이미 정제되어있는 500ng/ul 정도의 DNA 샘플들이 있습니다. 하지만 저는 더 높은 농도의 샘플을 원하기때문에 이 샘플들을 합쳐서 높은 농도로 만들려고 합니다(ug수준). 어떤 방법이 좀 더 손실이 적고 효과적인가요? column을 이용해서 할려니 column의 수용력? 에는 한계가 있어서 안될것같고… 샘플들을 합쳐서 에탄올 침전법으로 침전시킨 뒤, 다시 elution하는 방법을 이용하면 제가 원하는 농도만큼 얻어낼 수 있을까요?? 조언좀 부탁드립니다.
회원작성글 놀고싶다  |  2022.06.10
Q. phylogenetic tree 계통수 신뢰도와 질문 첨부파일
Query of 1w2. Full 뭔뜻인가요...
회원작성글 꼬꼬닭이이  |  2022.06.10
Q. DNA extract kit autoclave 돌려야할까요??
DNeasy PowerSoil Pro Kit 로 토양 sample을 뽑았는데 아무래도 테이블에서 열어서 사용을 하다보니 다음에 사용할 때는 오염이 되어있을 것 같아서요   handbook이랑 여기저기 구글링을 해도 kit를 오토클레이브 돌린다는 말은 없고 solution에서 자라버린 미생물들이 나중에 데이터에 나올까봐 두려워요...   자세한 성분도 표기되어 있지 않아서 알아낼 방법이 없네요 마지막에 사용하는 용액이 10mM Tris 라는 것 밖에는....   혹실 실험하시는 분들은 kit관리 어떻게 하시는지 궁금합니다!!
회원작성글 Seoki  |  2022.06.03
Q. 동결건조시 sample이 overdry된 경험이 있으신 분 계신가요?
안녕하세요, 저는 특정 DNA를 HPLC로 purification하여 DNA sample을 분취한 후 동결건조를 진행하는데요. 가끔씩, 동결건조를 하면 DI water에 녹여도 잘 안녹는 문제를 겪곤 합니다. 혹시 여기 선생님들은 실험하시면서 어떤 sample(단백질, DNA,RNA)이든 동결건조를 하고나서 sample을 다시 녹일 때, overdry때문에 sample이 잘 안 녹는 문제를 경험해 보셨는지 궁금하고 어떻게 해결하셨는지 궁금합니다!
회원작성글 공부하자공부  |  2022.06.02
Q. 토양 DNA pooling을 해야할까요??
이번에 토양에서 DNA를 뽑았습니다. DNA를 뽑기 전에 토양을 잘 섞어서 뽑기는 했습니다만... 문득 드는 생각이 "3반복" 이었습니다. 1개의 토양sample에서 DNA를 3번 뽑아서 섞어야하나... 라는 생각이 들었습니다.   혹시 어떻게 생각하시는지 궁금해서 글올립니다. 감사합니다.
회원작성글 Seoki  |  2022.06.02
Q. 전기영동관련 궁금한 사항 - 중간에 멈췄다가 다시 내리면 안되나요?
DNA 추출해 전기영동하다가 중간에 멈추고 잘 나오는지 UV 확인해보고 덜 진행된 것 같아서 다시 전기영동 더 내렸는데 괜찮은건가요? 문제가 될까요?
회원작성글 상량  |  2022.05.29
Q. 토양DNA extract kit 사용할 때 질문있습니다!
저희 랩이 신생랩이라... 실험실에 kit 사용해본 사람도 없고 DNAwork 할 줄 아는 사람도 없어서 물어볼 곳이 없네요... 아무리 찾아도 정보가 잘 안나와서 그런데 kit 사용할 때 질문 2개만 부탁드려요!   1. kit에 읽어보니까 토양 0.25g 넣으라고 되어 있던데 토양을 채로 쳐서 0.25g을 넣어야 겠죠?? 혹시 실험실에서 보통 몇 mm 채를 사용하는지 알 수 있을까요??   2.  맨 처음에 homogenizer로 시료를 분쇄하던데 protocol에는 액체질소로 동결하라는 말이 없던데.... 찾다보니 액체질소로 동결하고 분쇄하기도 하더라구요 혹시 액체질소로 동결하는건 꼭 해야하는건가요?? 아니면 액체질소로 동결하고 DNA 뽑으면 결과가 더 좋다거나...
회원작성글 Seoki  |  2022.05.26
Q. Dneasy power pro soil kit 롤 DNA뽑을때 액체질소 필요한가요
처음에 bead tube에 토양 샘플 넣고 homogenizer에 30 초 돌릴 때 누구는 열이 발생하기도하고 분쇄를 위해 액체질소에 얼린 후 돌려야한다는 말을 하던대... 제가 protocol에 찾을 때는 액체질소에 넣으라는 말이 없는 것 같아서요.. 식물 sample은 얼려야 분쇄가 잘 될 것 같긴한데 토양sample도 액체질소로 얼리고 homogenizer 해서 DNA 뽑아야 하는건가요??
회원작성글 Seoki  |  2022.05.25
Q. plasmid dna 추출
 고등학생입니다. plasmid 추출 실험을 준비 중입니다. 실험 과정에 대한 여러 글을 보며 생긴 의문이 있습니다. 추출 이전의 과정인 대장균 배양 과정 중 1.액체 배지에 항생제를 주입하는 이유와 1000:1 비율의 이유,  2. 배양기에 넣고 200rpm으로 회전시켜 주는 이유, 3. 굳이 배양하지 않고 실험 재료 판매 사이트(생물나라)에서 구매한 대장균을 추출에 직접 이용해도 되는지가 궁금합니다. 답변해주시면 감사하겠습니다^^
회원작성글 sa06003666  |  2022.05.24
Q. edta tube에 있는 혈액에서 dna 추출하려할때 edta tube 보관방법
edta tube에 있는 혈액에서 dna 추출할려고 할때 edta tube 혈액 보관방법이 궁금합니다.
회원작성글 으노짱  |  2022.05.24
Q. OD값잴때 큐벳에 LB넣어주는이유?
안녕하세요 단백질 발현시키는 과정에있습니다. OD값잴때 큐벳에 LB넣어주는이유? 찾아보니까 blank값 넣어주라는데 굳이넣어주는이유가 뭔가욥 ㅠㅠㅠ 
회원작성글 choheec  |  2022.05.24
Q. OD 값이 높거나 낮으면 안되는 이유?
OD값이 높으면 세포 수가 많아져 빛을 튕겨내어 농도가 높다는건 알겠는데, 세포 수가 많은게 나쁜것인가 라는 의문이 생겨 질문드립니다!
회원작성글 생명학도  |  2022.05.19
Q. Gel extraction시 260:230 값 너무 낮게 측정되는 것 어떻게 해결하면 좋을까요?
PCR을 돌리고나서 증폭된 Band를 Gel extraction kit를 사용해서 DNA를 추출하고 있습니다. Gel을 자르고, 잘라낸 gel과 binding buffer를 1:1 비율로 섞어주고 heating block에서 약 10~15분정도 녹여준 뒤에, gel extraction kit의 protocol을 따라가면서 진행을 하고 있습니다. Gel extraction을 하고나서 nanodrop으로 DNA를 측정해보면, 260:280 값은 1.8 ~ 1.9 정도의 값이 꾸준하게 나오는데, 자꾸만 260:230값이 0.1 ~ 1.2 로 전체적으로 값이 낮고 변동이 큽니다. 해당 지표는 주로 buffer를 덜말려주는 것이 원인이라하여 washing buffer, elution buffer를 사용한 뒤 dry 시간도 충분히 늘려주고 했는데도 결과는 계속 이렇습니다 ㅠㅠ  혹시 해당 문제에 대한 원인을 아시거나, 제가 놓치고 있는 Gel extraction시 주의해야할 사항이 있을까요...?!  그리고 혹시 kit 에 포함된 elution buffer 대신에 nuclease free water를 사용하는게 더 나을까요??(사용해도 되는건지 잘 모릅니다만..)
회원작성글 moble  |  2022.05.17
Q. 가장 간소화된 mini prep kit
24개 샘플을 mini prep 으로 DNA 를 뽑을라하니 거의 3시간이 걸리더군요 물론 좀 빠르게 할려고 S1 buffer를 많이 넣어 spin column이 넘치게 되면서 한번 다시 돌리면서 시간이 늘어났긴 했지만 이게 flow-through 를 제거하는 시간이 의외로 많이 걸리네요.. 혹시 mini prep kit 중에 시간을 많이 단축가능한 것이 있는지 알려주실수 있는지요? (현재는 코스모진텍 labor pass 사용중입니다.)    
회원작성글 오미자랩  |  2022.05.16
Q. DNA extract kit 사용할 때 멸균환경에서 해야하나요??
이번에 마이크로 바이옴 분석 연구 진행하면서 토양 DNA를 추출해야하는데 저희 대학원생 선배는 아마 안해도 될 것 같다고 말을 하더라구요. 메뉴얼에도 멸균환경에서 진행하라는 말도 없고... 보통 멸균환경에서 진행하나요 아니면 별 차이 없다고 판단하고 밖에서 그냥 진행하나요??
회원작성글 Seoki  |  2022.05.16
Q. 학교에서 진행할 구강상피세포 dna 추출 실험 검토해주세요
안녕하세요 학교에서 구강상피세포 dna 추출 실험을 진행하게 된 고등학생입니다. 전문적인 지식 없이 인터넷의 다양한 사이트에서 정보를 조합해서 저희 학교에서 실험을 진행할 수 있게끔 정제하다 보니 올바른 실험 과정인지, 생략된 과정은 없는지 검토를 받고 싶습니다.      실험 과정입니다. ⑴ 컵에 생리식염수 1mL를 담고 조와 실험 조원 이름을 기재한다. ⑵ 45초 동안 입을 강하게 헹궈준다. (이때 더 많은 세포를 얻기 위해 뺨 안쪽을 살짝 씹어준다. - 피가 나지 않게 주의) 끝난 후 다시 컵에 뱉는다. ⑶ 피펫1을 이용하여 입을 헹군 식염수를 멸균처리된 뚜껑이 있는 튜브로 옮긴다. ⑷ 식염수가 담긴 튜브에 1mL의 Lysis buffer를 넣는다. ⑸ 피펫2을 이용하여 Proteinase K(단백질 분해효소)를 5방울 정도 넣고 뚜껑을 닫고 튜브를 잘 섞어준다. (Vortex Mixer 사용) ⑹ 잘 섞어 준 튜브를 56℃에서 10분 동안 배양해준다. ⑺ 배양된 튜브를 실온에 5분 정도 둔다. ⑻ 튜브를 45도 정도 각도로 잡고 피펫3을 이용하여 튜브 측면에 차가운 에탄올을 1mL 흘려준다. ⑼ 튜브랙에 꽂아둔 뒤 실온에 5분 정도 둔다. ⑽ 튜브 안의 용액의 표면에서 DNA가 보이는지 확인한다. 일부 DNA는 짙은 회색으로 보이거나 거품이 생길 수도 있다. ⑾ DNA가 들어 있는 튜브에 스포이드를 이용해 Flash blue™ solution 1방울 정도 넣어 DNA를 염색한다.     많은 조언과 지적 부탁드립니다.
회원작성글 ㅇㅅㅇ59  |  2022.05.14
Q. plasmid를 추출해야하는데 choromosomal dna isolation을 했는데 plamid를 정제하는 방법이 있을까요?
제가 정신을 놓고 있다가... plasmid를 E.coli transformation하고, plasmid를 추출해야하는데, choromosomal dna isolation을 해버렸는데 이 dna에서 plamid를 정제하는 방법이 있을까요? 혹시나 해서 첨언하자면 저희 랩에서는 plasmid 추출은 kit를 사용합니다. choromosomal dna isolation protocol은 하기에 적혀있는대로 시행했습니다.. 도움 주시면 감사하겠습니다 ㅠㅠ 14ml round-bottom tube에 YPD media를 3ml 넣고 single colony를 o/n culture. EP tube에 1을 1.5ml 따서 넣고 13000rpm 10min centrifuge 후 supernatant(sup) 제거. 50ul STES buffer와 50ul acid washed 0.4mm glass beads를 넣어준다. * Tip을 이용해서 glass beads가 cell pellet보다 아래로 내려갈 수 있도록 섞어줌 * STES : 0.5M NaCl, 0.2M Tris-HCl (pH 7.5), 0.01M EDTA, 1% SDS Vortexing 5min with multiple microtube mixer (TOMY). Add 200ul TE (pH8.0) Add 200ul phenol/chloroform/isoamyl alcohol (pH8.0) Vortexing 2min with TOMY. Centrifuge 13000rpm 10 min 후 sup (TE층 170~180ul)을 새 EP tube로 옮김. * 하층액이나 흰색 막이 섞여 들어가지 않도록 주의 -> PCR 효율을 저해할 수 있음 Add 17 ~ 18ul(0.1X volume of 8) 3M Sodium Acetate Add 500ul 100% EtOH (2~3X volume of 8), and -20℃ 30min incubation Centrifuge 13000rpm 10 min, discard the sup. Add 1ml 70% EtOH and vortexing (RT, 10min) Centrifuge 13000rpm 10 min, discard the sup. Dry in an oven for 20 min or RT 1hr 30min Dissolve it into 50ul~200ul 1X RW (restriction buffer containing 20ug/ml RNaseA)
회원작성글 수박고구마  |  2022.05.12
Q. E coli stock 만들때 팁이 있을까요??
콜로니 접종해서 미니프랩으로 dna 를 확인하기 전에 접종된 배지를 1ml 정도 stock 화 시켜두는데 문제는 미니프랩으로 dna 를 확인했을때 제가 원하지 않는 dna 일경우 해당 스탁을 모두 폐기해야합니다 이런 과정을 조금 최소화시키고자하는데 여러분들의 노하우가 있을지요?? 조언을 구합니다 그리고 스탁할때 글리세롤 20퍼정도 넣고있는데 이걸 넣을필요가 있는지 궁금한데 안넣어도 되는지 궁금합니다
회원작성글 오미자랩  |  2022.05.12
이전  01 02 03 4 05 06 07 08 09 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크 광고