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 카테고리: 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
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Q. [IHC] 이(본문 속 그림) IHC에 대해 알려주시면 감사하겠습니다.
안녕하세요Muscle 내 proliferated cell을 보고 싶어 BrdU를 detection하려 하는데요위와 같은 staining 은 어떤걸 사용해야 하는지 알려주시면 감사하겠습니다.Laminin과 Dystrophin staining이라고 하네요.두 staining을 한 후에 BrdU를 디텍션하면 위와 같이 나온다고 하거든요
회원작성글 붐붐파우  |  2014.08.28
Q. [IHC] Muscle Fiber를 H&E stain 한 후에 BrdU detection이 가능한가요?
안녕하세요 초보 대학원생인데 잘 몰라서 가르침좀 부탁드립니다.다름이 아니고 제가 이번에 Muscle 샘플을 IHC하여 cell proliferation을 보고자 하는데요각각의 근섬유들이 보이도록 H&E staining을 한 뒤 다시 그 위에 anti-BrdU Ab를 처리하여proliferated cell들을 detection 할 수 있을 가요?아래와 같이 H&E stain을 하면 근섬유들과 섬유에 붙어있는 Nucleus들이 보이잖아요,그럼 저 쌔까만 핵들 중 proliferated 된 cell들을 detection 해야하는데BrdU를 처리하게 되면 어떻게 보이게 될까요?
회원작성글 붐붐파우  |  2014.08.28
Q. 4% paraformaldehyde 만드는 방법~~
샘들~~ 제가 ICC 할려고 하는데여~ 4% PFA/PBS 를 만들려고 하는데, 어떻게 만들어야 하나요??  도와주시면 감사하겠어열~!!
초보자  |  2014.08.07
Q. cell line 으로 immunohistochemistry 질문
안녕하세요`저는 cell line으로 immunohistochemistry 를 하기위해6well plate에 cover slide 위에 세포를 키우고cell fixation 과정을- washing with PBS- 10 min with 10% formalin in PBS (Keep wet)- 5 min with cold methanol, allow to air dry- 5 min with cold acetone, allow to air dry이 과정을 거칩니다.질문 1. cover slide 가 유리이다보니 cold acetone에 넣으면 유리가 dish바닥에 뭍어서 깨지는 경우가 많습니다. 이 과정을 잘 할수 있는 방법이 없나요?질문 2. 안깨진 cover slide를 immunohistochemistry 하고 난 뒤에 맨 마지막 단계인dehydrate step인 95 % EHOH for 2 min, 100 % ETOH for 2 min하고clear in Xylene을 하고 나면 또 cover slide가 바닥에 붙어서 깨집니다.어떻게해야 잘 할수 있나요??도와주세요.
궁금이  |  2014.08.05
Q. 세포염색(ICC) 에 관해서 질문합니다.
안녕하세요~ 세포염색을 막 시작하게된 학생입니다.1차 항체 붙이고 FITC-conjugate된 2차항체를 붙였는데요.저희 현미경이 GFP필터인데 FITC형광 붙여도 확인이 가능한가요?이번에 해봤는데 확인이 안되서 문제점을 찾고 있는 중입니다ㅠ조언 부탁드려요
회원작성글 후니오  |  2014.08.04
Q. ICC(Immunocytochemistry) 방법
안녕하세요 제가 ICC stain 실험을 처음하게 되었는데...혹시 선생님들이 하고 계시는 방법들을 알수가 있을까해서 질문올립니다.^^구글에서도 많이 protocol 찾아보고 하는데, 그래도 직접 선생님들이 하시는 방법을 알고 제가 수정하고 하면 많은 도움이 되지 않을까 싶어 올립니다. 도와주신다면 복 받으실거에여~^^
jh  |  2014.07.29
Q. Satellite cell proliferation을 보기위한 BrdU 에 대하여 질문드립니다
안녕하세요가입하고 처음으로 질문을 올려봅니다.제가 전공이 체육계열인 운동생리학이라 생명과학쪽에 대한 지식이 많이 부족하여 여러 선배분들의 도움을 얻고자 합니다. 잘부탁드립니다. 꾸벅제가 이번실험에서 SD rat에게 Treatment를 가한 후 Muscle내 Satellite cell들의 Proliferation을 보려고 BrdU assay를 해보려고 하는데요근육sample 적출 몇일 전에 BrdU를 inject해야 된다고 하더라구요.Q.1) 정확히 몇일전에 injection해야 sample 적출 후 제대로 된 activated proliferation을 볼 수 있는지 궁금합니다.Q.2) 그리고, 지금 inject하는데 들어가는 제품이 "BrdU Labeling Reagent (15mL) "으로 알고 있는데 맞는지 좀 확인해주시면 감사하겠습니다. 제품 URL은 아래와 같습니다.https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/000103?ICID=search-000103Q.3) 마지막으로, BrdU를 inject할 시 어떤 방법으로 어느 부위에 inject하는지 궁금합니다.
회원작성글 붐붐파우  |  2014.07.22
Q. Acris Ki67 써보신분께 다시 질문 합니다.
답변 감사합니다. 경험자님.ki67를 마우스 소장이나 대장에 사용하신거죠?싸이트 들어가보니 종류가 많던데 혹시 카탈록 번호 알고 계시면 알려주세요.감사합니다.
분생  |  2014.06.26
Q. p
 
게스트  |  2014.06.18
Q. 형광염색할때 blocking 문의
안녕하세요.면역염색할때~ 샘플은 human  조직 슬라이드이고 항체는 mouse anti-human antibody입니다.여기서 non-specific signal을 없애주기 위해 blocking을 하는데요실험에서 normal goat serum으로 했는데 잘못된거 같아서요~normal mouse serum으로 해야하는 것 아닌가요?normal goat serum으로 해도 논리적으로 맞는건지 궁금합니다~
궁금  |  2014.06.17
Q. DAB 염색과 immunofluorescence staining을 동시에 할 수 있나요?
현재 박테리아에서 단백질간 인터렉션을 보기위해 형광항체를 이용해서 더블 스테이닝을 하고 있습니다.그런데 하나의 타겟 단백질과 결합을 하면 다음 타겟 단백질의 항체가 결합하지 못 합니다.첫 번째 항체가 다음 항체의 결합을 방해하는 것으로 판단하여 1차로 결합시킨 단백질을 DAB염색으로 침전만 남긴체 때어내고 다음 과정을 진행하려는 실험계획을 세웠습니다.프로토콜을 찾아봐도 각각의 방법은 있는데 동시에 진행한 방법에대해서는 찾을 수가 없었습니다.그래서 이 방법 자체에 오류가 있는 것인지를 알고 싶고 혹시 이 방법으로 결과를 얻으신 분의 조언이나 이방법이 포함된 논문이 있다면 추천받고 싶습니다.조언 부탁드립니다.
작성자  |  2014.06.14
Q. IHC- IL-1 alpha, TLR-2 실험실에서 하시는 분 계신가요?
기술적으로 여쭈어 볼게 있어서 그런데 답글 남겨 주시면 깊이 감사드리겠습니다 ^^
성현우  |  2014.05.31
Q. 세포 고정 후 pbs에 보관해도 되나요?
cell monolayer로 키운 뒤에 메탄올이나 4% PFA로 fix 한 뒤PBS로 wash하고 PBS 담은 채 4도씨 냉장고에 보관해도 되나요?가능하다면 어느정도까지 보관가능할까요?cell > fixation > 1'Ab 처리 (4도씨 O/N) > 2' Ab 처리실험일정 상 하루 정도 더 밀릴 거 같아서 세포를 보관해야되는데fix 후에 pbs에 보관해도 될지, 아니면 2차 Ab를 혹시 O/N을 해도 될지...고민입니다ㅠㅠ
고정  |  2014.05.08
Q. inflammation 관련 질문입니다 (An-ti inflammation drug)
안녕하세요~항염증제 관련해서 실험을 하려는데요대부분 COX-2를 억제하는 기전의 항염증제가 대부분이더군요AP-1이나 NF-kB등 여러 항염증관련 인자들이있는데 이들을 억제하는 물질을 찾아서 억제한것을 확인한다면 항염증제로 가능성이 있는것아닌가요?왜 주로 COX-2 억제제(아스피린)를 항염증제로 사용하는것인가요?천연물의 특정 성분을 가지고 항염증제 가능 실험을 하려고합니다 이와 관련 실험하고계신분 있으시면 조언좀 부탁드립니다..
회원작성글 질문자  |  2014.04.25
Q. b16 cell로 항암실험 관련 조언부탁드립니다.
현재 b16 cell로 항암실험이 진행중입니다.cell량은 1x10^4으로 s.c injection을 진행 하였으며, tumor grow를 지켜보고 있습니다.대략 1주일 정도가 지나면 tumor의 성장이 보여 그때부터 약물을 경구투여 하고 있는중인데..negative와 차이를 보이지 않습니다.약물의 경우 NK - cell의 활성을 도와주는 약물인데 혹시 b16 cell 말고 다른 항암효과를 볼 수 있는 암세포는 없을까 하여 물어봅니다.
바리  |  2014.04.01
Q. 혈관생성에 관여하는 것들 CD31, vWF, VEGF 등 잘 아시는 분?
Neovascularization, angiogenesis  를 확인하려고 할때제목의 3가지 중 아무거나 하나만 봐도 무방할까요?아니면  어떠한 기작과 path way 에 따라서 봐야할게 다르기에  전부 봐야하는지..일단 VEGF 는 항체가 준비되어 있어서  바로 쓰면 될 것 같은데..나머지 2개에 대한 부분도  같이 확인을 해야할지,  그리고 하나만 한다고 할때 저기서 어떤걸 이요하는게  가장 좋을 지도 (감도가 더 좋다던가.. 좀더 확실하다거나.. 기타 등등)좀 알려주세요.  논문 찾아봐도  뭐가 더 좋다고는 안나오네요..
dd  |  2014.03.28
Q. IHC용 coated slide 추천해주세요
정말 간단한 staining 실험을 하고있습니다. frozen section한 brain  slice를 muto pure chemicals라는 일본 회사에서 만든 silane coating 된 slide glass에 mount 해서 사용했습니다.많이들 쓰더라구요..그런데 상당한 양의 sample을 mount 해서 막상 실험하려니washing 부터 조직들이 떨어져 나가기 시작합니다. 다른 사람들한테 물어보니 coating 된 slide는 조직 절편 올려놓기만해도 절대 안떨어진다는데..전 hot plate에 말리기 까지 하는데도 계속 떨어지네요..심지어 1시간 이상 38도에 말린뒤에도 조직이 떨어져요...사람들이 slide glass 유통기한이 지났거나 불량품일거라고 하는데..당체 겁나서 실험을 못하겠어요..확실하게 잘 붙는 slide 추천좀 해주세요.. 아니면 coating 방법이 있다면 알려주세요..
steinbrane  |  2014.03.12
Q. rat brain으로 파라핀 만드는 방법좀 알려주세요..다른조직은해봤음..
rat brain으로 파라핀 만드는 방법좀 알려주세요..다른조직은 해봤어요장기쪽이랑 대장 피부조직까지 다해봤느데뇌는 첨해보는데뇌할때 주의할점 없나요? 통상적으로 전 탈수시키고 투영화시키고 파라핀 입히고 섹션합니다.뇌도 똑같이하면될까요?뇌할때 관류고정 시켜야하나요 아니면 뇌를 적출시 pbs에 담구고 피가 빠지길 기다려볼까요..연습용이라 생쥐를 죽이긴 그렇고 죽은쥐를 가지고 실험해보려고합니다.꼭 퍼퓨전해야할지요.. 파라핀은 에탄올에 여러번 담구자나요.. 70프로때 빠져나가지않을까 조심스레 추측해보는데 어떤가요?
초보  |  2014.02.25
Q. Microglia marker Iba-1/Ox-6/RT1B/CD11b 의 정확한 차이점이 궁금합니다.
우선. 연구원분들 모두 연말에도 연구에 몰두하시느라 수고가 많으십니다..제가 Rat brain IHC 중 궁금한 점이 생겨 질문을 올리게 되었습니다.Microglia marker 로써 Iba-1/Ox-6/RT1B/CD11b 등 많은 Marker 가 쓰이고 있는데,Microglia 에 발현되는 단백질 중 다른 부분들이라는 것은 알겠는데요..염색시에 나타나는 결과에서 정확한 차이점을 모르겠습니다.혹자는 Iba-1은 발현되는 Microglia 전체를 잡고,Ox-6는 Activation 된 microglia 를 잡는다고 하던데요..논문이나 자료를 찾아보면 Iba-1도 activation 된 microglia를 잡는다고 써져 있더군요..하지만 염색시 나타나는 결과를 보면 OX-6 positive microglia는 Iba-1 Positive 보다그 수가 굉장히 적더군요...그래서... 너무 헷갈리네요..;;각각의 marker 의 정확한 차이를 잘 모르겠습니다.혹시 이 차이를 정확히 (부정확하더라도..ㅠㅠ) 아시는 선배님들 계시다면 도와주세요...;; ㅠㅠ
석사rat  |  2013.12.24
Q. 면역세포(림포사이트)를 이용한 염색을 하려고 합니다~ 제발 도와주세요~
지금 lymphocyte 를 이용한 실험을 처음 접하는 사람입니다.지금 혈액에서 lymphocyte(림포사이트)를 분리한 후 ICC를 실행하려고 준비중에 있습니다.하지만 림포사이트는 둥둥- 부유해서 자라는 세포라서 ICC를 어떡해 해야 할지 감이 안잡히네요.chamber slide에도 림포사이트를 키워봤지만 하나도 붙지 않고,그렇다고 연구실에 cytospin이 있는 것도 아니라서 이용할 수도 없어서요.림포사이트를 coverslip (또는 slide)에 붙일 수 있는 방법을 아시는 분은 제발 알려주세요.더불어 림포사이트를 이용해서 ICC를 잘 할 수 있는 팁도 알려주시면 감사하겠습니다.꼭 좀 도와주세요!ㅠㅠㅠ
히융히융  |  2013.12.19
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