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Q. 세포 seeding 양 계산
세포를 seeding 할때요 카운팅을 하고 seeding을 하면 양이 파악이 되는데... 카운팅 안하고 예를 들어 10cm dish에 1:9로 seeding 한다고 하면 배지 9ml에 cell 현탁액 1ml 넣으면 되는걸로 아는데, 응용이 잘 안되서요... 예를 들어 1:4로 seeding 한다고 하면 배지를 얼마, cell 현탁액을 얼마나 넣어야 하는지 계산법 좀 부탁드리겠습니다... 
회원작성글 medi92  |  11.18
Q. 세포 배양 및 카운트에 대한 질문드립니다.
안녕하세요. 세포 계대하려고 세포 카운팅을 했는데요. HepG2 cell line을 카운팅 해서 4칸에 550개가 나왔고요. 27T Flask에 0.8 x 10^6으로 seeding 했는데요. 계산하면 27.5 x 10^6이고요. 0.8/27.5로 계산해서 30 ul을 5ml 배지에 첨가 했는데 맞나요? 그리고 10cm Dish에는 유지용으로 seeding을 했는데요. 10ml 배지에 200ul을 첨가 했는데 이건 몇대 몇으로 깔았다고 봐야하나요?... 추가적으로 HepG2 cell line doubling time이 48 H이라고 하는데 48시간 동안 더블링이 된다는건지 설명 부탁드립니다. 감사합니다. 
회원작성글 medi92  |  11.18
Q. 3D-DART DNA structure modeling 설치 관련 질문입니다. 첨부파일
3D-DART라는 DNA structure modeling을 설치하려고 합니다. https://github.com/haddocking/3D-DART 위의 사이트에 설치 관련한 방법이 나와있는데 파이썬으로 설치해야하는 것 같아 파이썬을 아는 IT 관련 지인에게 설치해달라고 했는데 어렵다고 하시네요 ㅠㅠ 혹시 이 프로그램을 사용하시는 분 계시면 설치하는 방법에 대해 알려주실 수 있을까요 ㅠㅠ !
회원작성글 Woneee  |  11.18
Q. 1:9 9X를 1X를 만드는법?
9X를 1X로 만들경우 1:9 로  160㎕를 만들었을경우 여기서 16㎕를따면 1X가 되는게 맞나요,,?  몇㎕를따야지 1X가 되나요  1:9 이게 9X중에서 1X로만드는것과 같은건가요?   
회원작성글 choheec  |  11.18
Q. Transformation 계산 방법이 잘 이해가 안됩니다.
안녕하세요. Bacterial transformation 실험에 주력하고 있는 학부생연구원입니다. Transformation efficiency를 다른 논문에서 참고해서 계산을 하려고 하다보니, 대부분의 논문이 CFU/ug를 단위로 쓰더라고요. 이 단위의 뜻이 주어진 양의 competent cell에 DNA 1ug을 transformation 했을 때 생성되는 colony의 수라고 하는데, 다른 분의 의견으로는 Transformation efficiency면 사용된 competent cell의 전체 수에서 transformation된 세포의 수를 말하는 것이니까 transformation 후 spreading할 때 한 샘플을 selective plate와 항생제 없는 배지에 따로 키워서 항생제가 있는 배지에서 자란 콜로니 수를 항생제 없는 배지에서 자란 콜로니 수로 나눠야하는 것 아니냐는데, 그 말도 맞는 것 같아서요. 사실 transformatinon efficiency 정의를 봤을 때 잘 이해가 안되기도 하고요. 혹시 이것과 관련해서 이 공식이 어떻게 transformation efficiency를 설명하는 것인지.. 왜 CFU/ug을 unit으로 쓰는지 알려주실 분 계실까요?ㅜㅜ
회원작성글 dndb1303  |  11.18
Q. 구강정상상재균
미생물 실험 중 병이 없는 사람의 구강에서 도말 후 Gram stain 한 현미경 1000배율 사진입니다. BAP배지, MAC 배지 중 BAP 배지에서만 자랐고, 비용혈, 포도알균으로 보이는데 정확히 무슨 균인지 알 수 있을까요?
회원작성글 콩이콩이  |  11.17
Q. cell에 약물처리
안녕하세요.  cell에 약물처리를 하려고 합니다. 물에 안녹는 약물이라 dmso에 녹여 100x stock을 만든 후에 배지에 희석하여 사용하려 합니다. 저는 cell 배양 배지를 DMEM +10% FBS + 1% AA를 사용하고 있는데, 이때 궁금한 것은 배지에 희석할때, 생 배지를 사용하는 것인가요? 아니면 CELL을 배양한 배지를 사용해서 희석을 하는 건지 궁금합니다.   또한 target 시약이 잘 working되려면 DW보다 배지에 녹이는 것이 더 효과적인지 궁금합니다. 제가 사용할 시약은 dexamethasone입니다.
회원작성글 똑똑해지자  |  11.17
Q. 액체배지 배양에서 항생제 사용
안녕하세요 고등학교 2학년 재학 중인 학생입니다. 정말 물어볼 곳이 없어서 죄송하지만 실례를 무릅쓰고 여기에 질문합니다ㅠㅠ 제가 세균에 항생제를 사용했을 때 항생 속도를 측정하고 싶어서 액체배지에 대장균을 배양한 후에 뿌옇게 됐을 때 항생제 처리를 하고 투명해지는 경과를 관찰하려고 합니다. 그런데 이미 세균이 자랐을 때 항생제 처리를 하면 투명해지는 게 가능한가요??? 항생 속도를 관찰하려고 했을 때 제가 생각한 방법은 이거밖에 안 떠올라서요... 조언 부탁드립니다...!!
회원작성글 할수있땅  |  11.17
Q. DNA 관찰 UV 파장
DNA, RNA 등을 EtBr과 유사한 SafeView로 염색해서 agarose gel에 로딩해 관찰하고 있습니다. UV transilluminator를 구매하려고 하는데, 모델이 365nm랑 312nm로 두 가지가 있습니다. 두 모델 가격 차이도 좀 나는데, 두 파장 중 어떤 것이 더 맞는지 잘 모르겠습니다. 사용하는 SafeView는 흡광 파장이 490~265nm입니다.  
회원작성글 차몬드  |  11.17
Q. 80%glycerol 보관기간
stock 만들 때 80%glycerol을 사용하는데요, 3월달에 만든걸 써도 괜찮은지 궁금합니다. 상온에 계속 보관했습니다.
회원작성글 김세은1  |  11.17
Q. 에테르 감압이 궁금합니다
감압 농축기 이용하여 에테르 감압하려고 하는 중입니다. 에테르 감압 시 항온수조 온도 40도로 설정 중인데, 항온수조에 플라스크 담기기도 전에 아스피레이터 키고 작동하면 플라스크 주변이 어는 현상이 발생하는데.. 왜 이러는 걸까요? 이대로 진행해도 될까요? 참고로 조지방 실험중입니다. 추가로, 감압 후에 항량될때까지 건조기에 넣는게 맞나요?(105도)
회원작성글 jooooooo  |  11.17
Q. Transformation 질문 부탁드립니다!
DH5a comp.cell에 transformation을 진행하다가 실수로 42도씨 heat shock 이전에 LB media를 먼저 1ml 넣어버렸습니다. 프로토콜상으로는 Heat shock 이후에 LB media를 넣고 recovery time을 줘야하는데 순서를 ㅂㅏ꿔 진행해버렸는데, Transformation efficiency에 크게 영향을 미치나요..?ㅠㅠ  
회원작성글 쪼꼬만먼지  |  11.17
Q. NO는 반응이 있는데 ELISA(IL-6, TNF-a)에서 반응이 없어요.
안녕하세요! 항염증 관련 실험을 하고 있는 사람입니다. 저는 NO assay를 통해서 염증반응이 완화되는지 1차 스크리닝을 하고 ELISA 실험을 진행하고 있습니다. 그 이유는 TNF-a나 IL-6같은 사이토카인이 iNOS를 통해 NO를 형성하기 때문입니다. 그런데 NO assay에서는 sample에 의해 농도의존적으로 NO가 감소하는 반면,  ELISA(IL-6, TNF-a)에서는 농도의존적으로 떨어지지 않고 감소하다가 올랐다가 다시 감소하는 모습을 보입니다. (IL-6와 TNF-a의 경향성은 동일합니다.) 동일한 sup.으로 NO와 ELISA를 2회 반복 실험했음에도 동일한 결과를 보여 혹시 이런 경우를 본적이 있으신 분이 있을까하여 글을 남깁니다. 혹시 이런 경험이 있으신 분이 있다면, trouble shooting을 어떻게 하셨는지 답변 부탁드립니다. 현재 저는 기존 24well에서 6well로 변경하여 재실험을 진행하고 있습니다. 긴글 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 지농  |  11.17
Q. 분광광도계 큐벳 사용 시
분광광도계 사용시 큐벳의 거친면이 빛을 향하게 되면 흡광도가 정상일 때와 비교했을 때 감소하는게 맞나요?
회원작성글 접니다  |  11.17
Q. 수용성 성분과 지용성 리포좀이 물에 녹아있을 때 UV
수용성 성분과 지용성 성분을 포함한 리포좀이 물에 함께 녹아있을 때, 각각의 성분 함량을 UV로 측정하려 합니다. (흡수 파장은 두 물질이 아예 다릅니다) 기존 논문에서 지용성 리포좀 내부 물질 함량 측정 시 유기 용매로 리포좀을 깨고 UV를 찍던데, 이 경우에는 용액(물+수용성물질+지용성리포좀)에 유기용매를 넣고 바로 UV를 찍으면 될까요? 제가 아직 실험 초보라 ㅜㅜ  너무 쉬운 질문이지만 답변 부탁드리겠습니다..!!
회원작성글 공돌공돌  |  11.17
Q. lysis buffer 거품
Lysis buffer로 cell을 lysis 한 후 4도씨 냉장고에 10-30분 정도 둔 다음,  13000rpm, 10분에서 centrifuge를 한 후 sup만 따서 새로운 e-tube에 놔둡니다. 실험이 추후에 진행할 시 냉동고에 얼린 후  다시 녹여서 vortex를 진행하는데, vortex 한 후 spin down을 해도 거품은 사라지지 않았습니다.  혹시 거품을 최소화하고 정확하게 정량 하는 방법이 있을까요 ㅜ 
회원작성글 카스테랑  |  11.17
Q. HPLC prep 후
prep HPLC로 peak의 fraction을 받아와서 동결건조를 시켰는데, 이 단백질을 최대한 오래 보관하면서 처리 실험에 사용하려면 보통 어떤 식으로 보관하나요? prep HPLC를 했던 조건의 용매로 녹여도 괜찮은건가요 (비슷한 단백질을 정제한 논문의 HPLC 조건임) ? 아니면 추출시 사용한 유기용매에 녹여둬도 되나요..? 그 단백질이 안정한 버퍼 조건을 찾아봐야하나요? 단백질을 주로하는 랩이 아니라 조언이 필요합니다 ㅠㅠ
회원작성글 ziw  |  11.17
Q. Hoechst, PI 실험 결과 해석 중 궁금한 것이 있습니다. 첨부파일
첨부한 사진 속 화살표가 가리키는 덩어리가 왜 생긴 것인지 궁금합니다. 교수님께서 아마도 염색 시약이 제대로 녹지 않아 덩어리진 것이라고 하셨습니다. 정확하게 레포트에 작성해야 되는데 덩어리가 왜 생긴 것인지, 해결방안은 무엇인지 알려주시면 감사하겠습니다. 실험은 DAPI대신 hoechst를 사용했고 PI는 그대로 사용했습니다.
회원작성글 펭귄뒤적  |  11.17
Q. 초보 학부연구생 cell seeding 도움 부탁드립니다
안녕하세요. Cell seeding 계산을 하는 데 어려움이 있어 질문 드립니다...! 우선 cell counting을 했을 때 2.8*10^6개/ml로 나왔습니다. 이 cell을 100 mm dish에 100개 seeding하려고 하는데 어떻게 dilution해서 얼마나 깔아야 할지 모르겠습니다... Media는 5 ml 넣으려고 합니다. 알려주시면 감사드리겠습니다!!
회원작성글 eunseuli  |  11.17
Q. Fat accumulation 시 Palmitic acid를 녹이는 방법
안녕하세요. 현재 HepG2 cell 에서 fat acuumulation을 유도하기 위해 oleic acid 와 palmitic acid를 녹여 FFAs를 제작하려 합니다.   EtOH와 isopropanol 중 어떤 것에 더 잘 녹을까요???
회원작성글 도망딜레  |  11.17
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