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BioLab 이은열 교수
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Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. Low copy plasmid를 lb broth에서 형질전환해도 될까요
Low copy plasmid를 형질전환할때 soc를 가지고 리커버리 했는데 이번엔 soc가 없고 만들 시간도 없어서 부득이하게 lb로 하려고 합니다. 그런데 soc로 실험할때도 가끔 콜로니가 안 뜰때도 있었는데 그보다 영양 성분이 적은 lb로 리커버리하면 균이 잘 자랄까 걱정되네요. lb broth 양이랑 리커버리 시간을 늘리면 되는건가요? 평소에는 soc 200ul에 리커버리는 대략 1시간 정도 합니다
회원작성글 란란루  |  09.19
Q. ODS gel 세척 하는법 꿀팁 전수부탁드립니다
ODS gel 세척하고 있는데 아세톤으로도 여러번 했는데 색이 너무너무 안빠져요 ㅜㅜㅜㅜㅜ 혹시 세척 꿀팁좀 알려주세요 ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 뚭ㅎ  |  09.19
Q. 진균 TSA 배지 배양할 때
모니터리용으로 TSA를 이용해서 배양 조건만 다르게 해서 세균과 진균을 동시에 보고자합니다. 또 배양된 세균과 진균을 TSA에 계속 순수 분리를 하려고 하는데요.. 제 계획은 같은 TSA 배지에 세균은 37℃ 1~2 DAY, 진균은 28℃ 3~5 DAY 조건으로 순수 분리될 때까지 반복하는 거였습니다.   근데 진균 배양배지는 증류수를 첨가하면 pH때문에 안자랄 수 있다는 글을 봐서요.. 그래서 PDA배지에 주석산을 첨가해서 사용하던데,  PDA말고 진균을 분리할 수 있는 배지랑 방법이 있나요? ㅠ
회원작성글 iklou  |  09.19
Q. Buffer exchange 시
안녕하세요  보통 Buffer exchange 시  1/1000로 희석하는 걸로 알고 있는데  1/1000에 대한 근거 자료 같은 것이 있을까요???? 찾아봐도 찾기 힘들어서 질문 올립니다ㅠㅠ
회원작성글 유니유니_  |  09.19
Q. SDS page 밴드 번짐? 첨부파일
안녕하세요  SDS-PAGE실험 중 궁금한게 생겨서 질문남깁니다.  이전에는 이런경우가 거의 없었는데 최근에 젤 러닝 후 염색하면 항상 레인 밖으로 번지듯이 내려오는게 보여서요  혹시 원인이 뭔지 아시는 분 있으신가요? 그리고 저렇게 내려온 경우 western blot 과정에서 문제가 생길 수 있나요?
회원작성글 ㅇㅎㅇㅎ  |  09.19
Q. Transformation DNA 농도
Transformation 실험을 하는데, DNA plasmid 500ng/10ul 이 있는데,  Complete cell에는 DNA plasmid를 1pg-100ng 첨가 하라고 되어 있는데,  10pg를 첨가할려면 농도를 어떻게 희석 해야 할까요? ㅠ   또, DNA plasmid가 TE bfr에 담겨 있다는데, 희석은 DW로 해도 될까요? 
회원작성글 dhehfl  |  09.19
Q. 나노드랍 이용한 RNA 측정 때 구아니딘 ITC
안녕하세요, 현재 병원성미생물로부터 RNA를 추출하여 cDNA를 합성하고, 그 cDNA를 RT-PCR 돌리는 과정을 하고 있는데요.   나노드랍 찍으면 가끔 Impurity 1 에 Guanidine ITC가 표기되고, Impurity 1 A260 및 Impurity 1 %CV 값과 그에 따른 Corrected (ng/uL)가 나옵니다.   이렇게 나오는 경우에는 RNA를 다시 추출하는게 맞을까요 아니면 그냥 보정된 Corrected 농도로 cDNA를 합성해도 별 문제가 없을까요? 그리고 Guanidine ITC가 나온다는건 washing이 덜 되었다는걸 의미하는걸까요?
회원작성글 촉새  |  09.19
Q. GC 기기의 Split ratio 관련 질문 드려요.
GC 기기 사용 도중 Capillary(주입구) 부분 설정시  Split ratio 부분에 대한 의문이 들어서 질문 올립니다. 이론적으로 예를 들면 Split ratio 를 1/5로 설정시  Split Mode를 Split Mode에 비해 Splitless Mode가  Area(면적)값이 5배가 되어야하는데 2.5배만 결과적으로 나왔습니다. 이는 어떤 문제점이 생긴건지 파악을 하지 못하여 질문 올립니다. 많은 답변 드립니다.
회원작성글 됴엥  |  09.19
Q. 미생물(유산균) growth curve 그리는 방법
미생물의 growth curve를 그릴려고 하는데요, 96 well plate를 이용해서 kinetic mode로 1시간에 한 번씩 측정 전에 shaking 하여 총 24시간 동안 찍으려고 합니다.   여기서 질문은, 1. O.D 600nm에서 흡광도 0.8~1.0 이상이면 값이 정확하지 않아 희석하여 측정해야 한다고 하는데 예비로 실험해봤을 때 stationary phase에서 최고값이 2.5 가까이 나옵니다. 그러면 이럴 때는 중간에 플레이트를 꺼내서 희석하거나 할 수가 없는데 어떤 방법을 사용해야 하나요? 96 well plate를 쓰지 않고 큐벳을 써서 1시간에 한번씩 측정하는 방법 밖엔 없나요??   2. 시간에 따른 흡광도와 log 값의 관계를 보기 위해 0h부터 3시간마다 plating도 동시에 진행할 예정인데, 예전에 0h를 plating 했던 결과를 보면 균 수가 9log 정도가 됐는데 그러면 각 시간별 plating 희석 배수는 어느정도로 하는 것이 적당한가요?  밑에 제가 예비로 실험한 growth curve 그래프를 첨부하겠습니다. 참고로 제가 실험한 방법은 1. glycerol에 1:1로 mix된 균 스탁을 10mL MRS broth에 접종한다. 2. 24h 배양 후 200uL를 따서 새 MRS broth 10mL에 접종한다. 3. 새 MRS broth에 접종하자마자 200uL씩 따서 96well plate에 분주 후 kinetic mode로 24h동안 흡광도를 측정한다. 4. 그동안 새 MRS broth에 접종한 때를 0h로 하여 3시간 마다 plating한다. (plating 할 때는 접종된 broth에서 100uL를 따서 1X PBS buffer 10mL에 희석한 후 거기서 다시 1mL을 따서 다시 새로운 PBS 9mL에 희석하는 방식으로 serial dilution하여 희석한다.)   답변 기다리겠습니다... 감사합니다..!!
회원작성글 니가가라하와이  |  09.19
Q. 중학교 학생입니다. 세균 배양 배지를 어떻게 처리하면 좋을까요?
중학교 1학년 학생 입니다. 소독제 사용 전후를 대조군으로 삼아서 한천 배지에 세균을 배양할려고 하는데요, 처리가 걱정입니다.  학교에는 오토클레이브 등의 고압멸균기도 없어서 선생님께서는 한천배지를 알코올 램프 위에 놓고 가열해 처리하는 방법을 제시하셨는데요....  압력솥에 찌는 방법도 고려해보았는데, 마찬가지로 학교에 압력솥도 없어서요... 동아리 부원 개인이 집에서 찌라고 하기에는 위생상 걱정이 됩니다.  그리고 배양 접시가 플라스틱이라 처리할려면 유리 샬레로 옮겨야 될 것 같은데 그 과정에서 포자가 퍼져서 문제가 될 것 같아 걱정입니다.  어떻게 처리하면 되나요? 
회원작성글 nayunkim  |  09.19
Q. 해열성분분리 실험
헥세인과 아세트산에틸로 전개 용매를 만들었습니다. 농도를 각각 2:8 5:5 8:2로 진행을 했습니다. 분석하고 싶은 약의 종류가 극성이고 아세트산에틸도 극성이기 때문에 아세트산에틸이 많은 2:8의 비율로 실험을 했을 때 전개가 가장 많이 되는 것이 맞나요? 또, tlc의 전개 원리가 극성무극성으로 인해 생기는 것이 맞나요?
회원작성글 ㄱㅇㅂ  |  09.18
Q. 세포 에너지학 전공서
세포 에너지학을 상대적으로 자세하게 다루는 분자생물학, 또는 세포 생물학 전공서를 알 수 있을까요? 목차만 비교해서는 다룬다는 사실만 알 수 있지 그것을 얼마나 심도 있게 다루는지 알기 어려워 질문 남깁니다.
회원작성글 sa06003666  |  09.18
Q. RT PCR Rna추출 과정에서 pellet이 보이지 않습니다..
안녕하세요. 현재 6well에 Raw cell을 seeding해 RT PCR을 진행하고 있는 학생입니다.  밑에 첨부한 사진과 같은 프로토콜로 진행하고 있는데, 세포가 많은 상태에서 진행함에도 불구하고 Rna isolation 과정에서 pellet이 거의 보이지 않으며, nano drop 260/280결과, Nucleic acid 농도도 굉장히 낮아 cDNA 합성을 진행할 수가 없는 상태입니다 ㅜㅜ.  (나노드롭 결과를 따로 정리한 파일입니다. )  rna 추출을 8번 이상 진행했는데도, 제대로 결과가 나온적은 한 번밖에 없습니다. ㅠㅠ 제가 RNA 추출 과정에서 세포를 죽이는 것 같은데, 아무리 생각해도 뭐가 문젠지 모르겠어 질문을 올리게 되었습니다.  모든 실험은 클린벤치에서 진행하고 있고, 지금까지 에탄올을 첨가할 때 조심스럽게 넣지 않았는데 그것이 문제인건지..? 아니면 트라이졸 피펫팅 과정에서 20번을 넘게 하기 때문에 세포가 죽어버리는건지 ..? 모르겠습니다 ㅠㅠ  미리 답변 감사드립니다!   
회원작성글 규규궁  |  09.18
Q. protein induction이란게 뭔지 잘 이해가 안됩니다..
cell에 IL-1b or LPS 처리 후 con에 비해 변화한 western blot band를 두고 선배들이 induction이 잘 된 것 같다고 설명하더라구요. induction과 expression의 차이가 있나요? cell에 IL-1b나 LPS를 처리하면 염증성 사이토카인등이 분비될 것이고.. 그럼 염증 마커들을 확인했을때 마커 두께가 두꺼워 질 것이고..그렇다면 발현이 증가한 것 아닌가요..? induction이라는게 정확히 이러한 실험에서 어떤 상황을 이야기하는 것일까요...?  
회원작성글 gamja  |  09.18
Q. DPPH ASSAY 흡광도 값이 과도하게 작게 나오면
안녕하세요! 고등학생입니다.  항산화 실험을 하는 과정에서 녹차를 사용했는데요, 미숙해서 그런지 시료가 색이 진하게 나와버렸습니다. 잘 모른 상태로 흡광도를 구하였는데 너무 작게 나와버렸습니다. 시료의 색이 실험에 영향을 줄 수 있다고 하네요. 이유가 궁금해서 찾아봤는데, 시료 색이 진하면 파장이 길어져 그렇게 나오는 것이 맞나요?? 혹시 아니라면 이유가 무엇인가요??
회원작성글 Scherzer  |  09.18
Q. OD가 낮다는 것을 어떻게 해석해야될까요
세포를 키우면서 중간중간 OD로 growth curve를 확인하는데요 curve는 당연히 exponential에서 급격히 올라가고 stationary 에서는 평평한 모습으로 다 비슷하게 나오지만 그 정도가 다 다르게 나오게 되는데요 (약물 처리를 다르게 했기 때문) 예를 들어서 같은 시기에 OD를 측정해보면 A 약물을 처리했을 경우 B 약물을 처리했을 경우보다 A의 OD가 B보다 높게 나옵니다. 이럴 경우에는 B의 growth가 억제된다고 생각하면 되는건가요?? 저걸 측정했을 시기는 stationary phase의 시점이고요  OD가 같은 측정시기에 다른거에 비해서 낮게 나온다는 것을 어떻게 해석하는것이 정확한지가 궁금합니다. 단지, 세포의 생장이 느린것으로 봐야되는 것일지 아니면  그만큼 많은 세포가 죽어있다고 봐야될지
회원작성글 브르르르릭  |  09.18
Q. phosphomimetic mutant에 관해서 질문이 있습니다.
안녕하세요, 논문을 읽으면서 공부하고있는 대학생입니다. 다름이 아니라 논문을 읽으며 phosphomimetic mutant, phosphoinhibitory mutant 같은 용어가 많이 쓰이는것을보게 되었습니다. 그런데 논문을 읽으며 보니phosphomimetic 돌연변이가 있으면 인산화가 잘일어나지 않는다고 하는 것을 보게 되었는데요, 실험에서는 이 돌연변이가 이미 인산화되어있는 상태처럼?기능을 하는 것 같아서요ㅠㅠ 대체 이 두가지 돌연변이가 정확히 무엇인지 알 수 있을까요?
회원작성글 lkdjf  |  09.18
Q. Skim-milk 배지에서 미생물 protease 실험하는데 결과가 이상해요
skim-milk 배지에서 키웠는데 오른쪽에 한 녀석이 하얀색 원을 형성하더라구요 자세히 보니까 균이 퍼진 것도 아니고 원래 퍼지면서 자라는 친구도 아니거든요... 모든 plate에서 같은 형상이 나오니까 무슨 작용이 있는 것 같은데 아무리 구글링해도 투명환만 나오고 하얀색원에대한 부분은 없더라구요 skim-milk배지에서 white zone이 나오면 어떻게 해석할 수 있는건가요?
회원작성글 Seoki  |  09.18
Q. Spotting이 무엇인가요?
일반생물학실험 레포트를 쓰는 중인데 spreading, spotting 가 주제입니다. Spotting이 spreading, streaking과 다른 것인가요? 신입생이라서 아직 잘 모르겠습니다.
회원작성글 에용  |  09.18
Q. 농도계산
함량이 30mg인 약물을 100mM으로 stock시키려면 약물 3g넣고 용매에 녹이면 될까요..??
회원작성글 엄청난초짜  |  09.18
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