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Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
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Q. 특정 Colony만 plasmid yield가 낮게 나올 수도 있나요?
안녕하세요. DH5-alpha cell에 FLAG vector를 넣어 transformation 시킨 후, 배지에 키워 콜로니가 생겼고 거기서 약 5개정도의 colonly를 따서 각각 50ml tube에 10ml LB + Ampicillin을 넣고 overnight하였습니다. 이후 가장 잘 자란 놈만 골라서 glycerol stock을 만들고 그 놈을 다시 LB culture 하여 miniprep을 하였는데 DNA 농도가 50ng/ul밖에 되질 않네요... PLKO 등의 벡터를 예전에 뽑았을 땐 200ng/ul정도는 나와줬는데... 특정 Colony만 plasmid yield가 낮게 나올 수도 있는 걸까요 아니면 해당 벡터가 원래 수율이 낮은걸까요..?
회원작성글 대학원생1122  |  01.30
Q. 몰수 계산 (초보) 제발 도와주세요
85% phosphoric acid 가 있는데 질량은 98g/mol입니다. 볼륨은 15ml있습니다 85%가 몇 M인지 알 수 있을까요?
회원작성글 yyyyyy  |  01.30
Q. 계대배양
오버나잇한 컬쳐를 50ml에 od=1.8당 1ml 희석하라고 하셨는데 od값이 1.6 나왔습니다 그럼 0.8ml 접종을 하면 되는게 맞는지.. 여쭤봅니다. 오디값이 더 낮게 나왔으니 더 많이 접종해야 할 것 같은데 계산을 잘 못하겠네요 ㅜ 실험이제 처음 시작한학부생입니다 ㅜ
회원작성글 바바12  |  01.30
Q. TLC관련 문의!! 부탁드려요
두 곰팡이를 co-culture 한 배양액중에 tannic acid가 생성되었는지 확인하기 위한 목적으로 TLC실험을 진행하였습니다. 우선 tannic acid의 분자량은 1,701.19g/mol입니다. 아세톤으로 추출을 진행하였으며 농축한뒤 첫번째 이동상(CH3 Cl: ethyl acetate: formic acid=5:4:1)으로 tlc를 내려보았더니 거의 전개가 되지 않은것을 볼수있었다.그래서 이동상을 바꾸어 보았다.                             두번째 이동상은 에틸 아세테이트: 포름산: 아세톤: DW= 100: 11: 11: 27를 이용하였으며 그 결과 이전보다는 전개가 되었지만 실리카겔의 위쪽까지 전개되지는 않았다. 맨 왼쪽은 dw에 희석한 standard tannic acid이고 맨 오른쪽은 acetone에 희석한 tannic acid 이다. 질문사항은 1. 두개의 standard 중 어떤 용매에 희석한 standard가 더 적합한지?  2.sample이 전개되지 않은 이유가 이동상이 적합하지 않아서 인지, 분자량이 커서 인지 아니면 제가 따로 정제 과정을 거치지 않았기 때문인지 궁금합니다. 3.스탠다드와 샘플이 다른 속도로 전개된 이유에 대해서도 궁금합니다 4. 스탠다드의 농도 설정을 어떻게 해야될지  궁금합니다.
회원작성글 김소현이다  |  01.30
Q. Mixture를 만들때 농도에 따른 용량
안녕하세요. 농도에 따른 물질 혼합물을 만들려고 하는데요. 각 물질을 혼합하면 농도가 달라질거 같아서 계산을 하려는데 이해가 잘 안가서 질문을 드리게되었습니다. 혼합하려는 물질 stock 농도가  VEGF-A (100ug/ml) 특정 물질 (80nmol 동결건조 상태 -> PBS 80ul를 추가하여 80nmol/80ul로 만들어서 1mM) 제가 Mixture를 4ml 만들기 위해 VEGF-A와 특정물질을 특정 농도가 되게 만들려고하는데요. 4ml을 만들기 위해 DW에 VEGF-A는 100ng/ml농도가 되게, 특정물질은 33nmol이 되게 DW에 혼합을 할건데 각각 얼마나 넣어야 하는지 계산을 잘 못해서 질문을 드립니다... 꼭 좀 도와주시면 감사드리겠습니다. 
회원작성글 medi92  |  01.30
Q. 랫드, 마우스 케이지 관리 리스트
안녕하세요, 동물실험실에서 일하고있어요. 랫드랑 마우스 케이지 청소 등 할 때 관리 리스트 작성해서 관리하시는 분들 있으실까요? 리스트 어떤식으로 이루어져 있는지 알려주시면 감사하겠습니다..!
회원작성글 콩콩삐  |  01.30
Q. 논문 그래프에서 *의 의미가 무엇인가요
논문 그래프에서 ***, **, *가 무엇을 의미하나요
회원작성글 감귤서리범  |  01.30
Q. Water saturated n-butanol 제조
TLC전개를 위해 Water saturated n-butanol을 제조하고자 합니다. n-butanol과 3차증류수를 1:1비율로  혼합한 후 분리된 수층 제거 (해당 과정 2회 반복)하여 맨위층의 용액만 회수하였으나 용액이 saturated 되지 않은 것처럼 보입니다. 제조 결과는 아래와 같습니다.    무슨 문제때문인지 아시는 분 계실까요 ㅠㅠ
회원작성글 Levilactob..  |  01.27
Q. 토양에서 배양한 미생물입니다. 이런 실타래 morphology를 가지는 균은 어떤 균인가요?
유전자 분석 맡기기에는 가치가 조금 떨어지는 것 같아 먼저 여쭤봅니다. 하루만에 이렇게 자라는 균은 거의 바실러스균으로 보여지는데요. YPG배지에 Cycloheximide를 적당량 첨가하여 항생배지를 만들었는데 하루만에 바로 저런 형태의 균이 자라네요. 동그란 형태는 바실러스로 추정되는데, 실타래는 궁금해서 여쭤봅니다.  
회원작성글 제약생명공학과  |  01.27
Q. centrifuge tube 용량 질문
안녕하세요! 질문 하나 드립니다..! centrifuge conical tube 최대 어느 정도 용량으로 넣고 사용 가능할까요? competent cell 제조하려 하는데 50ml conical tube에 50ml을 넣고 원심을 해도 될지 의문이어서 여쭤봅니다.. tube 용량 꽉 채워 원심 해도 되는지 궁금합니다 답변 기다리겠습니다 감사합니다!    
회원작성글 오아이  |  01.27
Q. phspho protein 웨스턴 블럿 잡band
phosphorylated protein 웨스턴 블럿시 nonspecific band가 찾고자하는 band를 구분할 수 없을만큼 많이 생기면 어떻게 해결해야하나요..? phospho protein이라 skim milk를 사용할 수 없어서 5% BSA로 blocking, 항체처리를 하고 있는데 blocking 시간을 늘려보기도 하고 항체 농도를 바꿔봐도 진전이 없습니다ㅠ
회원작성글 Labtor  |  01.27
Q. 웨스턴블롯 젤이 너무 안굳어요
그전까지는 이런적 없는데 stacking gel을 넣고 한10~15분뒤에 보면 다 사라져 있어요.. 분명 그전이랑 똑같이 만들었는데 최근에 계속 이런 일이 생기는데 왜그런걸까요ㅠㅠ? 혹시 아시는분들 알려주세요..
회원작성글 고고씽  |  01.27
Q. 안녕하세요 Campylobacter를 배양하려고 하는데요 질문이 있습니다
현재 저희 실험실 deep freezer에 캠필로박터 stock이 있어서 이걸로 배양하려고 하는데요 실험 하기전에 동정 맡겨보려고 합니다  제가 궁금한 것은 식품공전을 보니까 modified campy blood free 한천 배지, abeta-hunt blood 한천배지, preston 한천배지 등등에서 분리배양한다고 되어있는데 NA배지에 배양하면 안되나요..?  NA 배지가 대부분의 미생물 배양할 때 사용한다고 하는데 캠필로박터는 호염성이고 미호기성세균이라 좀 까다로워서 안될지 궁금해서 여쭤봅니다  
회원작성글 초보원생  |  01.27
Q. cell cycle 분석을 위한 PI staining시 control에 sub G1 문제
제가 cell cycle stage분석을 위해 PI staining을 하는 중인데, 문제가 G1 peak 왼쪽에서 대조, 실험군 모두 균일한 20%의 population을 보이고 있습니다. 처음에는 제가 cell 관리를 잘못하여 실제 sub G1 population인가 하였지만, brdu-7aad kit로 염색하였을 때에는 sub G1 population이 보이지 않는 것으로 보아서는 실험단계중에서 문제가 생긴 것 같은데 도저히 모르겠어서 질문합니다..  일단 프로토콜은 1. trypsin으로 cell harvest 후 PBS wash ( 1200 rpm, 상온 ) 2. cold PBS 500 ul로 resus. 3. -20도에 보관해둔 75% 에탄올 3ml을 vortexing하면서 (기계에 따라 강도가 다르지만 가장 약한 세기로 합니다) 떨어뜨려 fix 후 4도씨에 최소 2시간 incubation 4. 에탄올 원심분리로 제거 후 cold PBS 2ml로 wash * 2 ( 1500 rpm, 4 도) 5. RNase A가 들어있는 PBS 500 ul (100 ug/ml)로 resus 후 37도 water bath에서 30분 incubation 6. PI가 들어있는 PBS 500 ul (50 ug/ml, 최종농도 25 ug/ml) 추가 후 상온에서 15~30분 incubation 후 바로 detection 입니다. 추가로 결과 첨부하겠습니다. FSC-A/SSC-A, FSC-H/FSC-A gating 후 PE channel에 대한 histogram입니다. 고수분들의 도움을 요청합니다.. 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 jsjsjs1212  |  01.27
Q. 세포해동
학부생입니다. ㅜㅜ오늘 교수님이 세포 해동 하시는걸 보여주셨는데, 너무 훅 지나가서 스스로 정리 해봤습니다. 이상하거나 틀린 부분이 있나요? 1. HaCa T 8&9 cell을 tank에서 꺼낸다 2. water bath에 packing이 물에 잠기지 않게 cell을 녹여준다 3. media 소분 해주기50ml 4. HaCa T세포 와 media를 15ml 튜브에 1:3 or 1:4로 넣는다 - cell stock 안에 보존액과 불순물을 washing 하기 위해 (배지 만들기)DMEM 에 fbs 10퍼 항생제 1퍼 45:5:0.5 4. 세포를 푼 15ml 튜브를 centrifuge 돌린다. 1분 1500rpm 5. 그동안 배양할 dish에 해동날자와 세포이름 계대횟수를 적어준다. 6. 15ml 튜브를 suction 하여 cell만 남긴다.(거품부터제거한다) 7. pellet에 media를 넣어 섞어준다. 8. dish에 9ml media 를 넣는다 9. 7에서 섞은 cell들을 1ml dish에 옮긴다 10. 뚜껑에 튀지않게 잘 섞어준다
회원작성글 몽몽뭉뭉  |  01.27
Q. JNK 질문이요
안녕하세요   p-JNK를 보고 JNK를 확인하려니 JNK1 안티바디와 JNK2 안티바디가 각각 있네요  이럴땐 어떤걸로 토탈을 확인해야할까요?    고맙습니다
회원작성글 졸려요  |  01.27
Q. 시퀀싱에서 점돌연변이가...
시퀀싱보낸 plasmid서열에서 점돌연변를 발견했는데 CGG가 AGG로 바꼈습니다. 워블법칙덕분에 아미노산이 둘다 아르기닌으로 번역되는 걸로 확인해 운이 좋았지만, 이 plasmid안의 insert DNA는 codon optimization을 진행했던거라서 번역과정에서 영향이 있지는 않을까 걱정되는데..... 그냥 써도 되나요?
회원작성글 대학원생(진)  |  01.27
Q. 금나노 합성 실험 첨부파일
항산화 효과가 있는 식물자원을 우려서(속슬렛 추출법) 염화 금산을 환원시키는 실험을 했습니다. 원래 생성된 금나노입자가 크면 푸른빛, 작으면 붉은빛으로 알고 있는데 이 사진에서 그 중간 색깔은 아직 입자가 생성되지 않은 건가요? 아님 아주 미세한 입자인 건가요?
회원작성글 다시말미잘  |  01.27
Q. H2O2농도별 IC50
안녕하세요  질문이 있어서 이렇게 글을 남깁니다.   IC50값을 구하고 western 해보려고 H202 treat하고 cell harvest해야하는데   어떻게 양을 맞추엇 만들어야할지를  몰라서요 ㅠㅠ   lM stock solution (1ml) : 102ul + 898ul   0 / 0.1 / 0.5 / 1 / 10 / 30 / 100 / 300 / 1000 (uM) 입니다....   어떻게 구하면 될까요?ㅠㅠ  
회원작성글 Skskghfh  |  01.27
Q. 뿌리에 흰 솜털 같은 것이 나는데 곰팡이 등에 의한 오염인지 알 수 있을까요? 첨부파일
사진은 감자인데 감자 외 식물에서도 간간히 보입니다. 꺼내어 만져 보니 따로 분리가 되거나 하진 않는 듯 한데 모든 감자에서 보이는 것은 아니고 20개 중 1개 정도 꼴로 발견되고 선인장에서도 발견됩니다
회원작성글 S21df1  |  01.27
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