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 카테고리: 전체 > Immunology > ELISA
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Q. 투고할 학회지 추천부탁드립니다
In vivo test 유세포분석기로 NK, T, B cell 분석 Cytokine 측정 ELISA법으로 Immunoglobulin 측정   위의 내용으로 실험했구요. IACUC 통과하지 않고 한 실험 결과인데, 투고할 학회지가 있을까요? 제가 찾은 학회지들은 IACUC 승인번호 넣게 되어있어서요..도와주세요  
회원작성글 rael  |  2021.01.21
Q. Sandwich ELISA에 대해 질문이 있습니다! 첨부파일
안녕하세요. ELISA에 대해 공부하고 있는 고등학생입니다.  ELISA의 종류를 공부하던 중 Sandwich ELISA에서 궁금증이 생겨질문을 하게 되었습니다. Sandwich ELISA를 도식화한 그림들을 보니 대부분의 그림들은 2차 항체와 HRP같은 효소가 결합된 3차항체를 붙혀서 되어있는데 가끔 가다 조금씩 보이는 그림들은 2차 항체에 바로 효소가 붙어있는 그림이 있더라고요.. 그래서 3차항체를 안붙이고 2차 항체에 효소를 부착해서 사용해도 되는 건가요? 그리고 Direct ELISA의 signal이 약한데 Indirect ELISA는 2차 항체를 사용하여 signal을 증폭한다고 하는데 왜 2차항체를 사용하면 signal이 증폭되는 건가요...?
회원작성글 Hms  |  2021.01.15
Q. elisa 관련해서 질문이 있습니다.
elisa에 대해 공부를 하고있는데, culture sup과 serum을 이용해서 실험을 진행한다는것을 보았습니다.  culture sup보다는 serum에 더 다양한 cytokine이 존재하기때문에, 더 다양한 cytokine을 보고자하면 serum을 이용해서 elisa를 진행하는건가요/?? 아니면 사용하는 상황이 서로 다르기때문에 이용하는것들이 달라지는건가요??
회원작성글 뿡빵스  |  2021.01.14
Q. Albimin 정량용 ELISA 셋팅과정에 있습니다.
ELISA 이론만 알고있고  실제로 실험을 셋팅하는 과정에 있습니다. target은 Albumin이며 Albumin을 capture할 Antibody가 있는 상황입니다(Antigen albumin도 있음) 1. Ab와 antigen이 있는 상황이므로 kit를 사는것 보다는 secondary ab과 솔루션등을 구매하는것이 비용이 적게 들까요? 2. albumin이라는 단백질이 세럼이나 미디어등 워낙 많은 단백질이라고 들었는데 그때문에 blocking solution도 BSA를 사용하면 안된다고 보았습니다. 때문에 Hammersten grade Casein(추천)이나 FSG(Fish skin Gelatin)을 사용하고자 하는데 맞을까요?   첫 실험 셋팅이라 암것도 몰라서 기초적인 질문 죄송합니다. 기존에 브릭에 있는 질문들과 답변들을 참고해보았지만 뭔가 명쾌하지가 않아서 직접 질문글을 올려보아요. 
회원작성글 noriring  |  2020.12.28
Q. Raw264.7 cell , NO assay 문의드립니다.
안녕하세요, 항상 NO assay 진행시의 문제가없었는데  금번 문제가 생겨 질문드립니다. 본래 LPS(-), LPS(+) 로 처리하여 흡광값 측정하는데  LPS(-) 즉 Control의 경우 항상 흡광값이 평균 0.040정도 나왔는데, 이번에 0.411 정도로 측정되었습니다. LPS(+)도 유사한 수준으로 측정되었습니다. 시료처리에서도 각각 만들었기 때문에 LPS 처리군을 넣은 것은 아닌것 같고, 96well에 옮길때도 well에 혼동은 없었습니다.  실험은 Griess assay 사용하여 진행했습니다. 따라서 현재 원인파악이 불가능하여 비슷한 현상을 겪으신 분들이 계시다면 조언을 얻고자 합니다.  
회원작성글 니나노44  |  2020.12.23
Q. Der f 1 ELISA kit 발색 안됨
Der f 1 ELISA kit를 사용해서 실험 중인데  발색이 안되네요 ㅠㅠ Kit나 시약 문제인가 싶어서 시약은 다시 제조하고 Kit도 새로 구입해서 사용했는데도 발색이 안되네요 ㅠㅠ 샘플도 STD 도 전부 발색이 안되는데 뭐가 문제일까요?? 기존 사용하던 프로토콜 대로 진행해서 발색이 되어야하는데  어떤 문제가 있을떄 발색이 안되는지 문의드려요  
회원작성글 또몽  |  2020.12.02
Q. IL-류 사이토카인들 ELISA 할 때 면역세포랑 co-culture 없이 해도 상관없나요?
논문들 보면 그냥 세포 상층액(배지)에서 ELISA 해서 보던데요 면역세포가 아닌 일반적인 다른 cell line이나 조직에서 자극에 반응해서 IL 사이토카인들이 원래 잘 분비되나요?  
회원작성글 adfgqw  |  2020.11.05
Q. HepG2 cell에 LPS 처리했을 때의, CXCL8(IL-8) 발현
HepG2 cell을 S.F. Media, 5% Serum Media (DMEM)로 처리도 해보고, LPS를 24시간하다가 18시간으로 처리도 해봤는데요.. 다 값들이 이상하게 나와요,,,   cell의 문제일까요 저의 handling 문제 인지 잘 모르겠어요...   첫 번째 표는, HepG2 cell을 5x10^5 cells/ml 로 seeding하고, 24시간 뒤(cell이 부착되면), 일반 DMEM 으로 바꿔준 후, LPS를 0 , 0.001 , 0.01 , 0.1 , 1 , 10 으로  2 wells씩 처리했어요 (총 12 wells) 그리고 18시간 후에 sample harvest (상층액) 하고, ELISA kit로 진행했어요 (CXCL8)   두 번째 표는 2x10^5 cells/ml로 seeding하고, 24시간 뒤, 5% Serum DMEM Media로 바꿔주고, 위와 같이 농도별로 LPS 처리하고, 24시간 뒤에 sample harvest하고 똑같이 진행했어요   원래같으면 LPS를 고농도로 처리할 수록 CXCL8 발현이 많이 되는 걸로 알고있는데 그래프가 왜 이렇게 나올까요...?    
회원작성글 밍링  |  2020.10.14
Q. cell lysates를 사용하여 ELISA 시행시 house-keeping gene등을 사용하나요
안녕하세요. 실험실에서 cell lysates를 사용하여 ELISA 시행하여 MMP1,2,9의 발현량을 정량하고자 합니다. 이 경우, 각 sample에 사용된 cell의 양이 동일한지(같은량을 loading 했다는 증거)를 확인하기 위하여 사용하는 방법이 있는지 문의 드립니다. Western blott 의 b-actin이나 GAPDH처럼 house-keeping gene의 발현을 다시 확인하여야 하는지, 아니라면 다른 방법이 있는지 문의드립니다. 조언 부탁드립니다. 감사합니다.
회원작성글 jsesn  |  2020.10.05
Q. 염증성 cytokine 발현 실험할때 주로 사용하는 방법과 바이오마커를 알려주시면 감사하겠습니다!!
안녕하세요, 이번에 RAW 264.7 cell에 물질 처리했을때의 염증성 인자 발현이 감소 실험을 해 보려고 합니다. 일단 제가 찾은 바이오마커는 IFN-α, IFN-β, TNF-α, IL-1, IL-6, IL-12 (이게 선천면역 마커라고 하고) IFN-γ, TNF- β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13 (이게 후천면역 마커라고 하고) 추가로 NO, iNOS, COX-2 라는게 있다는 것 까지 찾았습니다. 근데 이 셋은 cytokine이 아닌 것 같으니 제외하고.. 그러면 여기서 cytokine들 중 발현이 좋은 인자는 TNF-α, IL-6 이 둘 이라는 것 같은데, 이 둘 외에도 발현이 좋은 마커를 알려주시면 감사하겠습니다. 아니면 이 인자들의 발현이 어느정도인지를 문헌에서 알아볼 수 있는 방법을.... 논문들에서 이 인자들을 ELISA로 흡광도 찍었을때의 강도가 어느정도인지를 비교한다던가 하면 될까요?? 그리고, 인자의 측정 방법에 대해서도 여쭤보고 싶습니다. ELISA가 초심자인 저에게는 더 간단할 것 같지만, 보통 고수분들은 ELISA를 하시는지, 아니면 RT-PCR로 진행하시는지 알고 싶습니다. 그리고 추가로, RAW 264.7 cell도 이게 처음 키워보는거라.. cell culture에서 주의할 점 등이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다. 좀 바닥에 붙어서 안 떨어진다던가...  
회원작성글 전기영동  |  2020.09.21
Q. ELISA실험법 공부할 수 있을까요..?
인터넷에 검색해봐서 어떤 기작으로 진행되는지 정도만 알고있습니다ㅜ 직접 실험하는건 아니지만, 알아두면 좋을 부서에서 근무중입니다... 어느정도까지의 지식이 요구될지는 모르겠지만 인터넷만으로 공부가 가능할까요..... 여기 Q&A로도 공부가 될까요ㅠ 학부땐 Western blot ,sds-page, 다른 키트를 이용한 효소활성측정만 해봤습니다ㅠ
회원작성글 신입이  |  2020.09.20
Q. ELISA 실험
ELISA 실험을 진행할려고 합니다 Cell을FBS가포함된 배지에  24시간 키운뒤  PBS로 워싱 두번하고 FBS가 안들어있는 배지에 약물 넣고 24시간 뒤에 상층액만 모아서 원심분리 하고 그 상층액으로 할려고 하는대 단계중 잘못된 곳이 있거나 보충해야 할곳이 있나요  
회원작성글 실험어렵다  |  2020.09.09
Q. ELISA의 과정이 맞는지 봐주세요
abcam사의 TNF alpha ELISA Mouse Kit의 프로토콜을 보면서 공부하는 중  입니다. 실험 방법은 어느 정도 이해가 됐는데 원리가 제가 생각한게 맞는지 조언 부탁드립니다. 1. kit에서 제공하는 microplate에 TNF alpha가 코팅 되어 있습니다. 2. 여기에 standard 혹은 sample을 분주하면 TNF alpha에 반응하는 항원이 결합합니다. 3. Biotinylated anti-TNF alpha를 넣어주면 TNF alpha와 결합한 항원에 결합 해서 detecter의 역할을 합니다. 4. Streptavidin-HRP를 넣어주면 Biotinylated anti-TNF alpha와 결합합니다. 5. Chromogen TMB Substrate Solution을 넣어주면 Streptavidin-HRP와 반응해서 발색이되고 흡광도를 측정해서 정량분석을 합니다.
회원작성글 병아리연구원  |  2020.08.18
Q. ELISA 그래프
Elisa standard 그래프 그리는 방법이 BCA standard 그래프 그리는 방식으로 그리면 되는건가요
회원작성글 왕초보연구자입니다  |  2020.08.12
Q. ELISA 스탠다드 그래프
이번에 새로 실험하는 대학원 생입니다 제가 처음으로 ELISA Kit 을 사용해서 실험을 하는대요 Standard물질이 들어 있어서 이 물질을 사용합니다 측정후  그래프을 그릴 때 추세선이랑 R제곱값을 구해서 이 값이0.99이상이 나오면 괜찮은 건가요? 그리고 한샘플당 2well을 사용했는대 이 두 2well의 평균을 구한뒤 각 그룹별로 그래프로 비교하는 건가요? 많은 선배님들의 도움을 부탁드립니다  
회원작성글 왕초보연구자입니다  |  2020.08.07
Q. ELISA 데이터 처리 시 linear vs. 5 parameter logistics
안녕하세요.   현재 BSA를 이용한 BCA assay를 통해 ELISA 연습을 하는 중이고 thermo fisher사의 pierce kit를 이용하여 실험합니다.   동봉된 2 mg/mL의 BSA standard material을 serial dilution에 사용하는데 프로그램상 linear로 계산을 하면 0.5 mg/mL부터 back calculation 값이 0.592 mg/mL로 측정되더니 마지막 0.031 mg/mL의 값은 -까지 나옵니다. 그래서 엑셀로 데이터를 처리하면 recovery가 터무니 없습니다.   그런데 5PL로 계산하면 back calculation 값이 잘나오구요.   이 kit는 이미 2 mg/mL ~ 0.02 mg/mL까지 linearity가 확보된 kit라고 하는데 왜 저는 linear curve와 5PL curve가 일치하지 않을까요? ㅠㅠ   찾는데 잘 안나와서 여쭤봅니다.  
회원작성글 슨배림  |  2020.08.07
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