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BioLab 이은열 교수
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Q. 마우스 단백뇨 측정
마우스 단백뇨를 측정하려고 하는데 BCA측정법으로 측정이 될까요?? 대부분 어떻게 측정하시나요..?
회원작성글 짱짱  |  09.26
Q. E.coli K-12 MG1655에 사용 가능한 플라스미드 서칭..
안녕하세요,    E. coli K-12 MG1655에 돌연변이 단백질 서열을 과발현 시키는 실험을 하고 있습니다.    플라스미드에 서열을 삽입하여 inducible 한 형태로 만들어야 하는데, MG1655에 적합한 expression vector를 찾는 게 쉽지 않네요...  primer 종류, ori 종류 등을 다양하게 고려해서 찾아보았습니다만 적절한 발현 벡터를 못 찾았습니다. addgene에서 expression vector라고 소개하는 것들은 전부 다른 strain에서 사용 가능한 것 같이 보이고.. 사실 vector에 대한 설명을 읽어보아도 어떤 용도로 사용할 수 있는지, 왜 vector 내에 그러한 구성을 가지는 지에 대해 알기가 힘드네요  ㅜㅜ..  이런 실험 설계 시 플라스미드 선정/혹은 제작을 할 때, 어떤 방식으로 서칭을 하는 게 좋을 지 팁을 좀 알 수 있을까요? 
회원작성글 joceanil  |  09.26
Q. western blot reprobing 관련 membrane
western blot membrane을 교체하려고 고민중이라  관련된 질문 남기려고 합니다!   기존 PVDF를 사용하고 있었는데 strip이 전혀 되지 않아서 한번만 사용 후 매번transfer까지의 과정을 다시 진행했는데요 !   PVDF의 경우 Reprobing이라는 과정을 따로 진행하는 것으로 보이는데 이 과정이 Stripping과는 별개인가요 ?    현재 NC로 변경하여 stripping을 하여 사용하려고 찾아보던 중이였는데 reprobing 과 stripping의 차이점을 모르겠어서요 ㅠ  답변부탁드립니다. 
회원작성글 랄리  |  09.26
Q. 실험데이터 이해가 안됩니다 제발 도와주세요...!
안녕하세요. 제목 그대로 실험 데이터가 이해가 안됩니다ㅠㅠㅠㅠ 지금 target siRNA로 cell에 KD을 시켜서 Real Time PCR결과를 보면 mRNA expression이 증가하는 반면 같은 cell을 KD시켜서   western blot 을 하면 protein level이 감소한걸 확인 할수 있습니다. 혹시 왜 이렇게 되는지 아시는 분 있으면 제발 도와주세요ㅜㅜㅜ 
회원작성글 살려주세요  |  09.26
Q. Miseq 타겟 프라이머 조건
Miseq 으로 해양환경시료의 Metagenome 을 분석하고자 합니다. 18S V3-V4 region 을 타겟으로 하며 Miseq분석회사에 custom primer 진행으로 타겟 시퀀스 프라이머 합성까지 맡길 예정인데   "해당 primer로 라이브러리를 제작하게 될 경우 제공해주셔야 할 정보는 Primer 서열, Target size(bp), PCR 조건(annealing 온도, pcr 사이클 수 등) 입니다." 라고 분석회사에서 요청한 것에 대해 질문이 있습니다.   18S V3-V4 region의 universal primer 서열과 그에 따른 타겟 사이즈는 알겠습니다만, ** 이때 PCR 조건은 무엇을 의미하나요?   타겟 시퀀스에 대한 프라이머에 대한 PCR 조건을 알더라도, 결국 library 제작 시에는 (overhang sequence + 타겟 프라이머) 조합으로 1차 PCR, 2차로 index PCR이 진행될텐데, 그렇다면 overhang sequence 까지 더해진 타겟 프라이머의 Annealing 온도는 달라지는 것 아닌가요?
회원작성글 사과농약  |  09.26
Q. western detection 문제 첨부파일
<사진첨부>   웨스턴 detection을 하였는데 왼쪽부분은 밝고 오른쪽 부분은 검게 배경이 나왔습니다... 혹시 이거 왜 그런걸까요ㅜㅜ 카메라 문젠가도 생각해 봤는데 같은 카메라로 다른 학생이 찍을 땐 안 그러는데 제것만 이렇게 뜨네요,,    그리고 전체적인 background도 까매서 밴드가 잘 안보이는데 이건 왜 그런걸까요,,,,,,, loading control이라서 잘 보여야 정상인데 ㅜㅜ
회원작성글 쿵쿠따리쿵쿠따  |  09.26
Q. 식품의 밀봉 여부 확인 방법
안녕하세요 혹시 식품의 밀봉 여부를 확인할 수 있는 방법이 있을까요? 식품공전을 보면 밀봉은 40)‘밀봉’이라 함은 용기 또는 포장 내외부의 공기유통을 막는 것을 말한다.라고 되어있던데 조금 애매한것 같아서요 ! 밀봉 여부를 확인하는 방법이 있을까 해서 문의드립니다~
회원작성글 지민쨩  |  09.26
Q. 총균수 측정
물시료에 대한 총균수가 헷갈려 질문드릴려합니다. PCA 배지에 미지의물시료를 (멸균수 9ml + 시료1ml)를 희석하여 5승까지 보려고합니다. 세균 곰팡이 할것없이 총균수를 보려구 합니다.   Q1.PCA 배지에 물시료를 깔아두 될까요.(다른배지도 추천해주십쇼) LB,NA,R2A 등등   Q2.희석한 시료를 10 5승까지 깔때 spreding 방식을 쓰면될까요. Q3.희석한 시료를 몇ml씩 spreding 하면될까요..?
회원작성글 쌍카  |  09.26
Q. 농도 기본적인질문ㅠㅠㅠ
기본적인 질문하나만 하겠습니다... 막 실험시작한 학생입니다.   20ug짜리 사이토카인을 구매하였습니다 protocol을 보니 1mg/1ml로 희석해서 사용하라고 되어있었습니다. 그럼 몇 50ml에 희석하면되는것 맞나요?   그리고 희석하고나서 400ng/ml로 사용하려고하는데 그럼 몇번사용할 수 있나요?
회원작성글 123456789  |  09.26
Q. FACS antibody 질문 드립니다.
안녕하세요    CXCR4 expression 을 확인하기 위해 FACS를 진행하려고 합니다. target cell line 은 mouse cell line 이고  1차 ab는 CXCR4 Polyclonal Antibody host:Rabbit / isotype: IgG  human,mouse,rat  2차 ab는 F(ab')2-Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, PE, eBioscience™    이렇게 사용하면 되나요?   negative ctrl 은 2차 ab만 붙이면 될까요?
회원작성글 민토링  |  09.26
Q. Native gel 양쪽으로만 세게 염색되는 현상 첨부파일
기존 bio-rad precast gel 4-15%을 사용하여 Native gel 단백질을 분석하는데 실험 비용을 줄이고자 동일한 스펙에 다른 회사 Precast gels을 사용했는데 밴드가 예쁘게 나오지 않고 저렇게 양쪽으로만 세게 염색이 됩니다. 혹시 무엇 때문인지 알 수 있을까요? 참고로 Marker는 동일하게 잘 내려갑니다.
회원작성글 외계인눈깔아왱  |  09.26
Q. L929 cell 성장 형상 문의 첨부파일
세포독성 시험 도중 용출물로 교체해주고 나서 2일 후 세포 계수를 위해 현미경으로 확인했을 때 L929 cell의 성장한 형태가 아무 규칙 없이 무작위로 빽빽하게 자라는 control과 다르게 약간 벌집처럼 모양을 잡고 뭉쳐 자라있어서 혹시 어떤 경우에 해당 모양처럼 자라는지 아시는 분이 있을까 해서 올립니다.
회원작성글 demiann  |  09.26
Q. 유산균 배양
안녕하세요, 현재 원하는 플라스미드를 넣기 위해 L.plantarum (유산균) competent cell을 만들고 있습니다. OD값을 바꾸거나, electroporation 조건을 바꾸거나 여러가지 시도를 해보았으나 콜로니가 안떠서 답답한 마음에 질문 올립니다. 대부분의 프로토콜 상에서 buffer에 KH2PO4가 들어가길래 주문해서 buffer 조성도 바꿔볼 예정입니다.   혹시 유산균 competent cell을 만들어보셨거나, L.plantarum 다뤄보신 분 있으시면 프로토콜 공유해주시면 감사하겠습니다.. +electroporation 조건도 함께 공유해주시면 계신 곳으로 절하겠습니다...
회원작성글 슴비  |  09.26
Q. 타액 내 포피린 농도 계산 법
현재 의공학과에 재학중인데 바이오센서 관련하여 실험을 하게 되었습니다. 알고 싶은것 : 사람의 타액 1ml당 포피린 여기서 포피린은 p.gingivalis의 대사산물입니다. 따라서 논문들을 찾아보았고 아래 2가지 사실을 알게되었는데 여기서 이제 어떻게 계산해야하는지 모르겠습니다. - 타액 1ml당 p.gingivalis 평균 = 10^5 CFU - p.gingivalis 내 포피린 214ng/g 이 정보만으로는 구하기 어렵다 판단하여, 몇마리의 p.gingivalis가 1g인가 알아야한다고 생각했는데, 이 정보를 찾기는 어렵더 군요.. 위의 두 정보 모두 다른 논문에서 찾았고 2번째 정보는 HPLC-ms/ms크로마토그램으로 실험한 것입니다.    어떻게 하면 될까요? 도와주세요!!
회원작성글 smart toil..  |  09.26
Q. gram-staining을 했는데 양성인지 음성인지 잘 모르겠네요 첨부파일
도말을 할때 좀 더 신경을 썼어야했는데 처음이라 잘 못했네요.. gram-staining을 했는데 양성인지 음성인지 잘 모르겠습니다. 보라색 같기도 한데 살짝 붉은기도 도는것 같고 모르겠네요.
회원작성글 빈가루  |  09.26
Q. Lugen sci 사의 sensi-Q2000 chemidoc 사용하시는 분 계신가요
안녕하세요 현재 western blot을 처음 해보는 초보 대학원생입니다. 저희 실험실에 Lugen sci 사의 sensi-Q2000 chemidoc 기기가 있어 western blot의 band 확인을 하려고 합니다.  기존에 저희 실험실에서는 저 기기를 DNA 전기영동 이미지를 찍는데에만 사용했어서 western blot 이미지를 찍을 수 있는 설정 및 조건을 전혀 모르겠습니다 .. 업체에서는 더이상 생산되지 않는 제품이라 담당자가 없다고 하시구요 혹시 사용하시는 연구실 있으시면 이미지 촬영 설정 및 조건에 대해 알려주실수 있으실까요..? 부탁드립니다 ㅠㅠ
회원작성글 ㅇㅎㅇㅎ  |  09.26
Q. GC-MS hydrocarbon 분석 관련 질문
안녕하세요, 저는 실험실에서 GC-MS를 이용하여 hydrocarbon 분석을 진행하고 있습니다.알케인을 분석하며 C10-C30 까지를 분석하고있습니다. 헌데 첨부 된 사진과 같이 C20 이후부터의 피크가 intensity가 낮아진 것을 확인할 수 있습니다. (이전 실험과 대비 했을때 동일 농도에서 50%이상 줄어듬) 앞의 C10에서 C20 까지의 알케인들의 intensity는 거의 동일한 것으로 보아 조제가 잘못 된 것은 아닌거 같은데 해당 문제가 컬럼 문제인지 장비의 문제인지 도움 주시면 감사하겠습니다!  
회원작성글 도시돼지  |  09.26
Q. Transfection 조건
안녕하세요 현재 293T pei transfection 과정 중 고민이 있어 남깁니다. 저는 원래 예전 박사님께 배운대로 Cell을 10cm dish에 3x10^6cells를 깔고 dna 18 ug pei 72 ug (1:4)로 사용중이였는데, 새로운 들어온 선생님께서는 10ug도 많이 쓰는 거라고 하시면서 cell을 2.2x10^6cells(50~60% confluency) 깔고 dna:pei=1:3을 쓰신다고 하더라구요.. 교수님은 둘 중 맞는 조건을 쓰라고 하시는데 전자는 선생님 말씀대로 dna도 cell양도 너무 많은 것 같고 후자 조건을 참고하여 2.5x10^6 cells dna 7 ug 으로 사용중인데도 cell이 좀 많이 죽거나 48시간 transfection 후에도 50~70퍼 confluency밖에 안되더라구요.. Gfp나 형광으로 transfection 후 형광 현미경으로 확인하려고 하는데, 교수님께서 저희가 사용하는 현미경 카메라 감도가 너무 좋아서 의미가 없다고 하시더라구요.. 혹시 다들 transfection 조건 어떻게 하시는지 알 수 있을까요ㅜㅠ? 참고로 media change는 오히려 cell이 washing 중 쓸려나가는 것이 더 안좋을 것 같고 293T pei transfection 상에서는 체인지 안해도 괜찮다는 의견이 많아 진행하지 않고 있습니다..!
회원작성글 냥뮹  |  09.26
Q. tRNA cloning 질문
cloning 할때 tRNA를 넣어준 vector map들을 몇개 보았는데요. 이론적인 tRNA의 뜻은 알겠는데 cloning에 tRNA를 넣어줬을때 무슨 역할을 해서 넣어주는지 알수있을까요?
회원작성글 겨율까지  |  09.26
Q. hydroxyl assay를 할 때, 2-deoxyribose 대신에 2-Deoxy-D-ribose를 사용해도 괜찮은가요?
hydroxyl 라디칼 assay를 할 때,   2-deoxyribose 대신에 2-Deoxy-D-ribose를 사용해도 괜찮은가요?
회원작성글 녹나무  |  09.26
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