안녕하세요, 저는 생물 관련 전공자는 아니고, 제약시설/생물학실험실 기기 및 소모품 업계에 관심이 있는 대학생입니다. (문과입니다..) 해당 업계에 관심을 가져서 작년즈음 코엑스에 전시회에 다녀오게 되었는데, Media에 대하여(특히 CHO cell culture media) 조금 더 깊이있게 알고싶어 질문을 드리고자 합니다.  기본적으로 CHO cell 을 media가 들어있는 바이오리액터에 넣어서 세포주를 배양하고, 배양한 세포주를 통해서 항체를 생산하는 것이 바이오 제약 배양 과정의 중점적인 부분이고 media의 주된 쓰임이라고 알고 있습니다. 근데 워낙 바이오 실험실도 거의 안가봐서 어떤식으로 이용되는지, 혹은 제가 받아들인 정보가 맞는지 재확인을 하고 싶네요. 질문내용은 이하와 같습니다.  ------------------------------------------------------------ 1. Cell culture media 중에 CHO만이 아닌, 다양한 Cell line(MDCK, VERO, BHK, ST, PK-15, HEK-293 등)에 모두 적용 가능한 배지가 존재하는데, 이보다 전용 Media를 이용하는 것이 더 유리한가요? 이용하던 Media 를 바꿀 경우 재조합치료단백질(RTP)의 생산성에 큰 영향을 받는가요?   많은 CHO cell culture media들이 동물유래 성분이 없다/ 혈청이 포함되지 않았다 는 점을 강조하는데, 이점이 강점인건가요? 동물유래 성분이 있으면 나쁜가요?  연구/ 세포주 개발에 이용되는 CHO cell culture media와, 바이오제약의 배양과정에 이용되는 media에 있어서 선호도가 다른지 알고 싶습니다.  주로 산업용 배양인 유가식(fed-batch) 배양법에 이용하는 media를 연구용 회분식(batch) 배양법에 이용하는 경우도 많은지 .. 산업/연구용 상관없이 같은 배지를 쓰는 경우가 많은가요?  Bioreactor에 따라서 특정 media와의 최적화 정도가 다른지 / 큰 차이가 있는지 알고 싶습니다.  제약 생산의 배양 과정에 있어서 항체/RTP의 생산성을 끌어올리기 위하여 Media 커스터마이즈를 주로 하는 편인지, 아니면 그냥 쉽게 구할 수 있는 배지를 이용하는 편인지 (생산성이 많이 차이가 있는지) 알고 싶습니다. CHO cell culture media 제품을 회사별로 사용해 보신분들은 어땠는지에 대해 간략하게 알려주시면 감사하겠습니다 고객입장에서 cell culture media를 용액으로 만들고, 이용할때 특히 불편한점이 있나요? 용액으로 만드는 과정이 쉽다거나, 안전성이라던지 생산성 외적인 부분이 많이 중요하다고 생각하시나요? - Bioreactor 제조사에서 media를 같이 판매하는 판촉도 많이 진행할것같은데, 만약 Bioreactor 제조사가 자신회사의 media를 이용하지 않고 배양을 할때에 고장이나 오류에 대한 책임을 지지않는 면책문구등이 있을까요? (우리 회사 배지만 이용하라는 강제성이 있는 문구?)   질문 내용들이 두서가 없고, 표현이 부적절한 부분이 있을 수도 있는 점 양해부탁드립니다.   해당 내용 제가 잘 몰라서 이상하게 써서 읽기 힘든 부분도 많겠지만, 보시고 알려 주실 수 있는 부분이 있으시다면 도와주시면 정말 감사하겠습니다.   

DLS 이용해서 particle size volume distribution을 3반복 측정해서 구했는데요, 이를 평균내서 하나의 곡선 그래프로 그리고싶은데, 3반복 data에서 x값, y값이 둘다 제각각이라 이를 어떻게 평균내야할까요?   1반복 d(nm)       f(1/nm)    2반복 d              f          3반복 d               f

cDNA를 합성한 후 5ng/ul의 농도를 일괄로 맞춰 qPCR을 진행하고자 넣어야 하는 물의 양을 샘플별로 기록해놨었는데, 실험하다 정신을 놓았는지 모든 샘플에 일괄로 많은 양의 DW를 넣어 터무니 없이 낮은 농도로 희석된 상황입니다 ^^;    흔히들 사용하는 speedvac은 연구실에 없어 사용하기 힘들 것 같습니다 혹시 55~70도 정도의 dry oven이나 RT에서 자연건조시킨 후 다시 물에 녹여 사용하는 방법으로 qPCR을 진행하면 실험에 문제가 생길지 질문드리고 싶습니다 ㅠㅠ  

블락킹할 때 저희는 skim milk에 membrane을 담궈서 shaker에서 돌리는데요 이걸 빠르게 하면 블락킹이 잘 안될까요?

Wash, prep buffer, DEPC를 사용해주었는데 Wash buffe는 불순물 제거, Prep buffer는 RNA를 column에서 분리, DEPC는 무슨역할을 하는건가요?  각각의 역할도 맞는지 궁금합니다. 도와주세요 선배님들! 

안녕하세요 이번에 Crispr cas9 으로 특정 유전자를knock out 하려고  crispr cas9을 디자이닝 하려고 합니다.   문제는 논 모델 종이라 해당 유전자 서열이 NCBI를 포함 어디서도 찾을 수가 없습니다. 하지만 해당종이 포함된 종의 Protein 서열은 모두 100% 동일 하지만 nucl 서열은 조금씩 차이가 있습니다. nucl 데이터가 100% 동일해야만 해당 유전자가 낙아웃이 되는 건가요?    

논문 중에 이렇게 적혀있습니다. The agitation speed increased sharply to 600 rpm at 20–30 h of fermentation, which was superimposed effect of the oxygen demand for microbial growth and glutaric acid synthesis. 교반속도는 실험자가 설정하기 나름인거 같은데 균에 성장이나 대사산물에 의해 교반속도에 변화를 주는 영향을 미칠 수도 있나요??  

안녕하세요. cell viability가 줄어드는 것을 확인하고, 그 약물로 웨스턴 블롯으로 p-p38 경향을 확인하고 있습니다. 근데 p-p38이 계속 증가하는 경향으로 나타납니다.  p-p38은 원래 줄어드는 경향이 맞는 것 아닌가요? 같은 샘플을 확인했는데, p-ERK와 p-JNK는 줄어드는 경향이 나타났습니다.   원인이 뭘까요.. 제가 잘못알고 있는걸까요? 조언부탁드립니다.

안녕하세요~ 항상 정말 큰 도움 주셔서 감사드립니다. A라는 protein이 B라는 유전자의 프로모터에 결합해서 transcription을 조절하는지 여부를 조사하기 위해 luciferase assay를 계획하고 있습니다.   B의 프로모터에 해당하는 genomic DNA 서열에서 protein A가 결합할 수 있을 법한 binding site를 몇 군데 찾았는데요, 그 중 한 곳이 B의 mRNA 서열 안에 존재합니다. mRNA 서열이 시작하고 약 100bp 정도 downstream에 존재하는데요, 이곳도 promoter로서 기능할 수 있나요? 아니면 그냥 배제해야할 지.. 고견을 부탁드립니다. 감사합니다!

안녕하세요ㅠㅠ  western blot으로 고생중인 학생입니다...   detection을 하게되면 VC만 진하게 나옵니다 cell line은 C2C12이고 housekeeping gene은 GAPDH로 잡고있어요.. housekeeping gene이 일정하게 나오지는 않지만 그래도 VC랑 나머지 샘플들이랑 비슷하게 나오는데,,왜그럴까요??  특히 토탈폼찍을 때 저렇게 나와요 포스포폼은 나름 경향이 보이고 밴드가 찍히는데 말이죠..  VC / muscle atrophy유도 / muscle atrophy유도+샘플처리 1, 2, 3 -> 토탈폼  VC / muscle atrophy유도 / muscle atrophy유도+샘플처리 1, 2, 3 -> GAPDH 뭐가 문제인지 감도 안잡혀서 질문드려요ㅠㅠ 제발 답변 부탁드립니다!!

hl-60 세포를 이용하여 neutrophil-like cell로 분화 후 실험을 진행 중인 석사생입니다.. DMSO 1%로 4일간 분화 후 FACS로 CD11b 발현 차이를 확인한 후 분화 조건을 잡았는데요 문제는 분화 후 물질의 netosis에 대한 효능을 확인하고자 SYTOX GREEN으로 염색 후 multi-reader로 형광을 확인했을때입니다,, 분화 후 cell wash - count - sytox green 염색한 cell을 black plate에 seeding - 20min incubation - PMA 및 물질처리 - KINETIC 형광측정 순서로 진행했는데(전부 HBSS buffer 사용하여 진행) 형광 측정 초기에는 분화한 Non-stimulated cell CTL에서 NETOSIS가 강하게 일어나서 PMA와 비슷하다가 2시간부터 두 군의 차이가 나타나기 시작해 4시간에는 명확한 차이가 보였는데요 그런데 효능을 봐야하는 물질처리군에서 초기부터 KINETIC 마지막까지 Non-stimulated cell CTL보다 훨씬 낮은 수치입니다,,  도대체 이유를 모르겠습니다,,ㅠㅠ 조건을 조금씩 바꿔봐도 같은 경향이어서요,,  혹시,, HL-60이 dmso로 분화만 시켜도 netosis를 강하게 일으키나요? 제가 찾았던 논문에서는 아니었는데,,, 정말 답답해요 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ    첨부한 사진은 DATA TEST 결과입니다 4시간대 위로 올라간게 PMA 처리군, 그 아래가 Non-stimulated cell CTL, 제일 아래가 물질처리군입니다,, 

안녕하세요 western blot을 할 때 몇 % gel을 쓸지와 하나의 well 당 몇 ug/ul의 protein을 넣을지 는 어떻게 설정하는건가요? 현재 보고자 하는 항체의 사이즈가 37, 72, 151 kDa이고 가지고 있는 단백질 총 volume이 30~50ul 정도인데 단백질의 농도는 1~5 ug/ul 정도로 낮아서 몇을 넣어야할지 고민입니다.. 

순도와 시퀀스도 분석이 가능한 곳이 있다면 견적 메일 주실 수 있을까요? 2개의 시료고 하나는 22k 다른하나는 7k 의 분자량 입니다. rndtradeco@gmail.com

washing을 오래하긴 했는데 membrane에 같이 넣은 마커는 보이는데 전기영동 시 단백질 위치 알게 포함된 bromophenol blue가 흔적도 없이 사라졌는데 혹시 워싱 과정에서 단백질이 떨어져 나갈 수 있는지 궁금해서 올려봅니다. 

자료를 찾아봐도 아직은 너무 초보라 결과 해석이 어려워 문의드립니다 TRIzol 이용한 RNA 추출 실험 결과입니다 (A260/A230 2.182, A260/A280 1.939, Concentration 2.000) 수치상으로 보면 추출이 잘 된 것 같은데 밴드 보는 방법을 모르겠습니다 21조 밴드 결과 해석 부탁드립니다      

답변주신 전문가님들 감사드립니다.^^ 1번. 질문 학생들이 어떤 제품에 들어있는 Triclosan이 엠피실린 내선을 유발한다고 하는 연구논문을 봤는지 FDA에서 쓰지 말하고 한 Triclosan이 함유된 손소독제나 청결제품을 좀 구해서 대장균을 키운후 엠피실린을 접종한뒤 살아남은 부분이 많은 배지를 고르더라구요.. 의미가 있는 실험인가 해서요 돌연변이는 이루어 질수 없는 기전이라 어떤 의미를 찾아야 되는지 질문입니다.   2번질문 다른실험관련입니다. Trypan blue용액으로 어떤 죽은 세포와 살아있는 세포를 Haemocytometer Cell Counting을 할때 고체배지에 있는 세균을 씻어낼때 trypsin-PBS로 씻어내듯 해서 하는 건가요? 고체배지에 큰 균을 어떻게 작은 샘플통에 넣을지부터 막막해서 여쭤봅니다.