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Q. sampling volume질문드립니다
배양을 할때 24hr마다 sampling을 하려고 생각중인데요. 보통 총 volume에서 몇 프로 까지만 sampling volume을 할수있는건지 알수있을까요? 100ml은 culture할때 sampling할수 있는 량은 몇ml정도 까지인지 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 분자생물학도  |  12.08
Q. tissue fixation
조직을 prep한 뒤에 2주 정도 30% sucrose에 보관했다가 4%PFA에 하루 두었는데 다시 30% sucrose에 1주일 정도 보관할 수 있을까요? 원래 4% PFA 먼저 하루 둔 뒤에 sucrose에 넣는걸로 알고있긴 한데...
회원작성글 별헤는밥  |  12.08
Q. Knockout mouse breeding(mating) 방법 잘 아시는분? 도와주세요!
안녕하세요? 최근 Crispr-Cas9을 이용한 gene Knockout 마우스를 구매했습니다. 이 마우스 breeding과 관련해서 몇가지 질문이 있습니다.  1. 이 마우스는 B6/N의 ES cell에 바로 Crispr를 사용해서 만든 KO으로 알고 있는데요, 이렇게 되면 기존 KO 방법으로 만들어지는 hybrid가 아니기 때문에 backcross를 안해도 되는건가요? 2. 그리고 KO을 얻어내는 breeding setting시에 hetero x hetero 교배가 정석이겠지만 KO x KO으로 사용해도 괜찮을까요? 3. 2번 질문에 이어서, 기존 KO 제작 방법의 hybrid로 만들어진 경우엔 아무리 backcross를 거쳐도 100%의 inbred 가 아니라서 WT x WT , KO x KO 으로 pup을 얻어내면 genotype간에 KO gene 외의 유전적 동질성이 흐트러지기 때문에 WT을 대조군으로 쓸수 없는 것으로 알고 있습니다. 그래서 hetero끼리 얻어진 littermate을 사용하는 것으로 배웠는데요, 현재 이 마우스는 hybrid가 아니고 KO gene 만 타겟팅 된 것이기 때문에 나머지 유전자들은 inbred와 동일하다고 볼 수 있을까요? 유전학, 수의학, 분자생물학 등등 전문가님들의 고견 부탁드립니다!  
회원작성글 귤여섯개  |  12.08
Q. 농도 계산 (희석)
현재 8mg/mL의 puromycin을 가지고 있고 이것을 media와 희석을 해서 4ug/mL puromycin으로 만들어서 dish에 넣어줘야 합니다. 그리고 제가 필요한 total volume은 40mL입니다. 그러면, 8mg/mL = 8,000 ug/mL이니깐 dilution factor = (stock solution / final solution) = 8,000 / 4 = 2,000 Volume stock = (final volume / dilution factor) = 40mL / 2,000 = 0.02mL = 20uL 그래서, 39.98mL (=40 - 0.02) of media + 20uL of 8mg/uL puromycin = 40mL   이렇게 계산을 했는데 맞게 계산했는지 확인해주시면 감사하겠습니다! 
회원작성글 avocaddo  |  12.08
Q. SDS-PAGE 실험 결과 해석 부탁드립니다. 첨부파일
첨부한 사진은 SDS-PAGE 실험 결과입니다. 이 실험을 처음 해서 결과를 어떻게 해석하는지 모르겠습니다. 자세하게 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 펭귄뒤적  |  12.08
Q. 샘플 처리 전 pbs 워싱
Cell을 seeding 하고 나서 24 시간 뒤에 샘플을 처리하는데,  샘플 처리 전에 PBS 워싱을 하는 것이 더 좋을까요? 
회원작성글 오이가싫어  |  12.08
Q. siRNA를 이용한 transfection 문제 해결 방법 방안에 대하여 부탁드리겠습니다.
현재 aml12cell으로 siRNA를 이용하여 transfection 후 knowdown 확인을 진행 중입니다. 하지만 rtPCR을 이용하여 유전자를 분석한 결과 40% 가량 효율이 나오는 것으로 보아 knockdown이 제대로 이루어 지지 않은 것을 확인 할 수 있었습니다.. protocol은 1. anti가 없는 media에 Lipofectamine mixture를 주입하고 6h 후 배지를 첨가하여 24h 동안 배양합니다. (media는 opti-MEM이 아닌 normal media를 이용하였습니다.) (Lipofectamine 2000을 이용하여 6well 기준 4uL/well 로 실험을 진행하였습니다.) 2. 그 후 FBS와 anti가 media로 change 한 후 24h 동안 추가로 배양합니다. 3. 마지막으로 sample을 처리하여 24h 동안 배양 후 rtPCR 및 western을 진행하고 있습니다. 여기서 문제점은 Lipofectamine을 주입하고도 cell이 damage를 받지 않는 다는 점에서 transfection에 문제가 있지 않나 싶습니다. 선배님들의 조언을 부탁드리겠습니다. 감사합니다.
회원작성글 졸업을위하여  |  12.08
Q. saturated picric acid 만드는 방법 첨부파일
안녕하세요. Tissue 고정액으로 bouin solution을 쓰기 위해 만드려고 하는데요. Bouin solution에 saturated picric acid가 필요하다고 하는데, 실험실에 picrid acid liquid form (sigma 197378) 으로 시약이 있습니다.  이 시약으로 어떻게 saturated picric acid로 만드는지 방법을 몰라서 여쭈어봅니다.   답변 부탁드리겠습니다
회원작성글 히록스  |  12.08
Q. 동물실험 관련 질문
안녕하세요,  현재 신소재 단열 패치를 제작하는 연구를 하고있는데, 단열 성능을 검증하는 파트에서 실제 생명체를 이용하는 실험을 설계하고있습니다. 동물(햄스터)을 적외선 투과가능한 케이지에 넣고 케이지 외부에 단열패치의 부착 유/무에 따른 적외선 카메라에서의 동물 감지 유/무를 관찰하려고 하는데요. 실험에 활용할 햄스터에게 어떤 물리적 피해도 주지 않으며, 혈액을 검사할 필요나 혹은 신체를 해부할 목적도 없습니다. 실험은 간단한 관찰에 불과하며, 동물 유입 경로는 근처 L마트 애완동물 코너에서 분양하고, 실험이 끝난 뒤에는 지인에게 재분양하고자 합니다. 이러한 경우에도 동물실험에 대한 허가 및 신고 절차가 필요할까요?        
회원작성글 고민되네  |  12.08
Q. EO이 DMEM에 잘 녹이는 방법
안녕하세요    ESSENTIAL OIL(=EO)로 실험을 진행중인 대학원생입니다. EO와 DMEM을 녹이려고 하니 잘 녹지가 않습니다. 관련 논문을 찾아봐도 자세히 어떠하다 나와있지도 않습니다.     DMEM은 수용성일테고, EO은 지용성일텐데 그렇다고 계면활성제를 임의로 넣을수도 없고 어떻게 해야할까요?    
회원작성글 AD석사생  |  12.08
Q. 웨스턴 밴드 사이에 세로선 질문입니다 ㅠㅠ 첨부파일
안녕하세요..! caco2 cell로 웨스턴 분석 후 밴드 사이에 저렇게 칸막이 처럼 세로선이 생겨 내려오는데 따로 이유가 있을까요?  같은 조건의 다른 샘플도 p-stat6 분석 결과가 저렇게 칸막이쳐서 나오네요..  p-stat6 분석한 결과이고, Tris-glycine 10% 젤을 사용했고,  2x SDS sample buffer 사용하여 protein 얻은 후  소니케이터 -> 98도에 끓여 보관된 샘플을 20ul 로딩했습니다 ㅠㅠ ... transfer 후 blocking 은 2시간 상온 -> 1차 ab overnight 4도씨에 진행하였고 이후 wash 는 5분씩 3번 했습니다..ㅠㅠ 원인이 무엇일까요?...
회원작성글 mingudam  |  12.08
Q. 안녕하세요 % 단위를 IU/ml 로 환산하는 공식을 알고싶습니다.
응고인자 검사중에 %로 표기되는 장비가 있는데, 저희는 IU/ml를 사용합니다.   이 때 단위환산을하고 싶은데, 공식이 어떻게 되는지 잘 모르겠습니다.   도움부탁드려요.
회원작성글 Hippo90z  |  12.08
Q. 토끼 CO2 안락사로 인한 폐 조직 손상에 대한 문의
CO2 가스를 이용해서 토끼를 안락사 후 실험을 진행하고 있는데요, 최근까지는 괜찮았는데, 어제 부검 진행 한 일부 토끼의 폐에서 붉은 반점이 확인이 됩니다. 추가로 배양 및 바이러스 검사는 별도 진행 예정인데, 일반적으로 고농도 CO2 가스로 안락사를 할 경우 자연적으로 발생 할 수 있는 일인지 궁금합니다.
회원작성글 KARANG  |  12.08
Q. protein boiling
1. protein purifiction했고 SDS-PAGE 하기위해 Protein sample boiling할 때 95c- 5분하는데 80c -10분,  70c- 15분 이렇게도 괜찮은걸까요? 2. 그리고 boiling후 바로 젤 런 못할경우 보관은4c 와 -20c 어느게 적당한지요? 감사드립니다.
회원작성글 BBlue  |  12.08
Q. IL-2 없이 NK cell culture
안녕하세요. 혹시 IL-2 없이 NK cell culture가 가능할까요? 저는 현재 LPS를 이용한 자극을 생각해보고 있는데, LPS로 IL-2를 대체 가능할까요?
회원작성글 dj_hwn  |  12.07
Q. 트리졸이 휴대폰에 쏟아졌는데 계속 써도 괜찮을까요…?
안녕하세요. 실험중 휴대폰에 트리졸과 클로로포름이 섞인 용액이 쏟아졌는데 기능상으로는 이상이 없지만 알콜스왑으로 몇번씩 닦아도 트리졸 냄새가 빠지지않네요 스피커 주변에 쏟아진거라 안쪽에도 스며들어서 잘 안닦이는것 같은데 기다리면 냄새 빠지나요? 서비스센터 가봐도 내부세척은 안해준다고 하는데 이 휴대폰 계속 써도 괜찮을지 모르겠네요 비슷한 경험 있으신 분들 어떻게 해결하셨는지 궁금해서 글 남깁니다
회원작성글 nkn  |  12.07
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