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실험 Q&A는 연구 활동 중 생겨난 궁금증을 지식 나눔을 통해 해소하고 함께 성장하는 공간입니다.
3회차 우수답변자 결과
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오늘 14
Q
염모제의 주성분확인시험건으로 시험 의뢰 기관에 여러 컬러의 염모제를 요청했는데요, 그 중 한 컬러에서 1개의 주성분만 불검출 되었다고 연락이 왔습니다. 시험은 KFCC 방법에 따라(첨부파일 참고) TLC로 진행했습니다. 전개용매 (KFCC) 발색제 (KFCC) 이소프로필에테르•아세톤•이소프로판올혼합액(10:1:1) 초산에칠•벤젠•초산혼합액(10:10:2) 초산•벤젠혼합액(1:1) p-디메칠아미노벤즈알데히드•묽은염산용액(0.5 → 100) ※ 확인해야 될 성분 : 4-NITRO-O-PHENYLENEDIAMINE(p-니트로-o-페닐렌디아민) (같은 성분이 다른 컬러에서는 검출이 확인되었습니다. 워낙 함량이 적어서 검출이 안 된건가 싶기도 합니다.) 본사가 일본인데 일본 시험 기관에서는 염모제의 주성분확인시험을 LC로 한다며 구체적인 제시를 할 수는 없지만 아래와 같은 대안을 말해줬습니다. ● 전개 용매 : 전개 용매에 알코올계를 조합해봐라(에탄올이 또는 메탄올). 사용하고 있는 유기 용매와는 약간 성질이 다르기 때문에 분리할 수 있는 가능성이 있다고 생각된다. ●발색제 : 요오드로 바꿔봐라. Q1. 대안에 따르면 전개용매는 알코올계를 조합해보라고 하는데 기존 전개용매를 참고해 어떤 조합 및 비율로 하면 좋을까요? Q2. 전개용매는 그대로 놔두고 발색제만 바꿔도 검출이 될 확률이 높은가요? Q3. 이외 다른 방법이 있을까요? 직접 실험을 하는것도 아니고 의뢰기관에 전개용매 또는 발색제를 명확하게 제시해줘야 하는 상황인데 제가 이쪽으로 아는 것이 없어서 검색하던 중 이곳에 문의하게 되었습니다. 혹시 조금이라도 도움을 주실 수 있는 분 계실까요?...
24.03.29
안녕하세요. 제가 현재 Enzyme을 활용하여 실험 중 biotin과 ATP가 결함되어 형성되는 biotin-AMP의 형성을 추출하여 LC-MS 분석을 통해 관찰하고자 하는 실험을 진행중인데 잘 진행이 되지 않아 관련 실험에 대해 질문하고자 글을 올립니다. enzyme의 반응 과정 중 intermediate인 물질인대 해당 step에서 quenching하여 LC-MS 분석 및 추출을 위한 실험에 대해 해보셨거나 reference를 아시는 분 계신가요..?
안녕하세요 두개의 gel을 동시에 로딩하고 각각 B-actin과 FYN항체를 붙여보는 실험을 진행 중 입니다. 분명 Transfer와 blocking, 1차 항체 처리까지 잘 된것을 확인하고 2차 항체를 처리했습니다. 그런데 중간에 잘 되고 있나 확인하기 위에 shaker위에 있는 membrane이 담긴 통을 열어보니 membrane 끝까지 잘 내려가 있던 마커가 이렇게 쪼그라져 있었습니다. 뭐가 문제인걸까요.. las기계에서 detection은 문제 없을까요??
안녕하세요 MTT assay 중 질문이 있습니다. 해당 실험 중 Control의 경우 drug treat 대신 drug을 녹였던 용매를 넣어줘야 하는 걸로 아는데, 제가 샘플들을 녹인 용매는 DMSO로 10mM으로 stock을 제조한 후 media로 serial dilution 해서 사용하고, well에는 10uL씩 로딩입니다. 이때, control에는 어떤 농도의 DMSO를 drug 대신 넣어줘야 하는지 궁금합니다. 추가적으로 sample: cell o / drug o / MTT o blank: cell x / drug x / MTT o control: cell o / dmso o / MTT o 상단에 있는 부분도 맞는 지 확인해주시면 감사드리겠습니다. 감사합니다.
안녕하세요. 클로닝을 진행해보았고 그 결과가 실패가 나와서 원인을 분석하는 것이 중요하다고 생각이 되어서 조심스럽게 글을 작성해봅니다. 1. insert DNA의 값이 잘못된 것이다. - 저는 현재 promega의 T-easy vector를 이용하고 있습니다. 설명서의 3.B. Optimizing Insert:Vector Molar Ratios를 보게 된다면 ng of vector * kb size of insert ___________________________________ * insert:vector molar ratio = ng of insert 라고 알고 있습니다. kb size of vector 그래서 50ng * 1723bp(집어넣을 프라이머의 사이즈입니다) __________________________________________________ * 3(3/1인데 편하게 3이라 작성하겠습니다) 하게 된다면 85.7ng이 나오게 됩니다 3015bp (T-easy vector의 크기) 그래서 나노드랍으로 찍은 값인 42.9를 위의 ng of insert 값인 85.7로 나누었고 그 값인 0.5를 Insert DNA로 설정하였습니다 Ligation은 DW 2.5 ul, T-vector 1ul, Insert DNA 0.5ul, 2X ligase buffer 5ul, ligase 1ul 총 10ul의 volume으로 진행하였습니다. 2. Amp의 양이 잘못되었다. - LB broth를 500ml를 넣게 되면 0.5ml의 Amp를 넣으면 된다고 알고 있습니다. (10mg/ul 농도로 만들었습니다) 500ul가 아닌 50ul를 넣어서 배지에서 제대로 나오지 않은 것이다라는 생각이 들었습니다. 3. Ligation 16시간, 배지를 하루 상온에 굳힌 이후에 4도의 냉장고에 냉장보관을 하루정도 해서 나오지 않은 것이다. - 바로 진행을 했어야 했는데 shaker를 누군가 사용하고 있어서 빠르게 진행할 수 없어서 냉장보관을 해도 괜찮다는 글을 보게 되어서 그래도 진행했습니다. 4. Shaker에 잘못 끼워둬서 그런 것이다 - 사실 shaker를 처음 사용하다보니 기울여서 집어넣었는데 결과적으로 1시간 30분 뒤에 확인했을 때는 그물망 아래에 제가 만든 compent cell sample이 제대로 작동을 안했을 것이라고 생각이 들었습니다. 5. transformation을 진행할 때 E.coli에 ligation 용액 2ul를 첨가 후 flicking을 하라는 저희 랩실의 방식이 있습니다. flicking을 할 때 튜브에 붙어있는 시약을 내리고자 기계를 약간 돌리긴 했습니다. 그 과정에서 제작된 ligation 물질이 깨진 것이 아닌지 의심이 들었습니다. 6. 위의 1~5번까지의 문제가 없다면 분주의 문제가 아닐까 생각이 들었습니다.(IPTG, X-Gal, pellet 도말) pellet을 충분히 풀어주는 것은 flicking을 진행하였습니다. 따로 기계를 돌려서 pellet에 영향을 주는 행동은 하지 않았습니다. 제가 생각하는 이번 클로닝의 실패 부분을 작성해봤습니다. 정말로 잘못된 부분은 바로 잡아서 제대로 된 진행을 해보고 싶습니다. 가르침을 주신다면 열심히 진행해 보겠습니다.
안녕하세요. LPS를 처리한 세포로부터 RNA를 추출하여 RT-PCR을 진행해 target gene의 mRNA 발현 변화를 알아보는 실험을 수행 중입니다. 근데 제 결과에서는 계속해서 발현 변화가 없는 반면 제가 합성한 cDNA를 가지고 선배님께서 PCR을 하였을 때는 처리에 따른 변화가 뚜렷하였습니다. 제 PCR 과정에 문제가 있는 듯한데 어떤 부분이 잘못 된 것 인지를 몰라 질문글 올립니다. PCR 과정은 다음과 같습니다. 1. primer mixture 만들기 { primer(10pmole) F 1ul + primer(10pmole) R 1ul + DEPC water 6ul } * (sample 수 + 1) 2. Premix tube(제품)에 primer mixture 8ul, cDNA 2ul 씩 분주 3. spin down 후 PCR - 94도, 5분 - 94도, 30초 / 65도, 30초 / 72도, 30초 - 72도, 7분 물도 새로 따서 쓰고, primer도 새로 희석하고, 다른 파이펫을 사용해보고 다른 장소에서 분주하여 PCR하여도 제 결과는 계속 동일하게 나옵니다.ㅠㅠ 읽어주셔서 감사합니다.
안녕하세요. 저는 일반인이고 관련지식이 없어서, 게시판 주제에 맞는 글이 아닐까 조심스럽네요 FT-IR 분석의뢰를 맡기고 자료를 받았는데 연구소에서 주신 자료는 해석은 없고 시험 검사 그래프정도만 받을 수 있어서 일단 받았는데 혼자 파악해보려해도 해석에 어려움이 있어서 여기까지 찾아왔어요.. A알약(항암제) B알약(항암제or가짜약) 이 동일한 알약인지 파악하고싶은데 우선 그래프는 99프로 흡사합니다. 하지만 연구소에서 검사하시기 전에 미리 부형제들은 다 같이 나타나겟지만 검사한다고 해도 유효성분은 알수없다는 의견을 받았어요 혹시 FT-IR 자료를 보고 유효성분도 함께 들어가는 동일한 알약인지 해석해주실 수 있으신 분께 의뢰를 드리고싶은데 숨고나, 크몽같은 곳에서는 전문가분이 없는듯하여 여기에 글을 씁니다. 사례금은 원하시는 금액 맞춰 드릴 수 있을 것같은데 이런건 어디서 의뢰드릴수있을까요? 사람인 같은곳에 올려야할지요 ㅜㅜ..
band가 깔끔하게 안뜨고 밑에가 이렇게 좀 일렁거리는? 뭐가 흘러내리는 것 처럼 계속 결과가 나오네요.. 결과 자체는 잘 나왔는데 band 모양 퀄리티를 좀 높히고 싶습니다. 6% acrylamide gel 이고 비율은 19:1 acrylamide 사용해서 만들었습니다. 100V 에 size 원하는 거 확인 될 때까지 내렸구요. sample 은 PCR product 입니다. acrylamide 로 DNA는 처음 내려보는지라.. 당연히 깔끔하게 나올 줄 알았는데 생각이랑 너무 다르게 나와서 고수분들의 조언 구해봅니다 ㅜㅜ
Deciphering the biodesulfurization pathway employing marine mangrove Bacillus aryabhattai strain NM1-A2 according to whole genome sequencing and transcriptome analyses 라는 논문으로 실험을 해보고자 하는데 이 논문에 나온 control CK medium 이 무슨 배지를 말하는 것인지 잘 모르겠습니다. 미생물학에서 CK로 축약되는 말이 너무 많아 대조군에 무슨 배지를 사용한 것인지 모르겠어서 질문 드립니다!
단백질 발현 관련 실험을 진행 하고 있습니다. 최근에 단백질 발현량이 기존 실험보다 적게 나오고 있습니다. 원인을 찾고 있는 과정에서 IPTG induction관련 글을 보았습니다. 저는 1M IPTG를 0.1M 로 희석해서 incubator에서 20℃/150 rpm/ 24hr 진행하고 있습니다. 정제후 elution 한 sample 정량한 값과 buffer chnage 한 sample 값이 상당히 적게 나오고 있습니다. 자료를 찾아보니 induction시 온도와 시간을 줄여보라는데... 얼마나 줄여햐 하는지 알려주시면 감사합니다.