mouse whole brain을 '4% PFA -> 15% sucrose -> 30% sucrose' 후 OCT 하여 -80'c에 보관하였습니다.   이제 cryosection(24um)하여 슬라이드에 붙인 후 IHC-IF를 진행하려고 하는데.. 하여야 하는 IHC antibody 종류가 많다보니,  section 후에 slide 상태로 보관 후에 IHC를 진행하려고 합니다. 질문은 다음과 같습니다.   (1)아래와 같이 진행해도 괜찮을까요? 어떤 분은 slide에 올린 뒤 그냥 바로 -80'c에 넣어도 된다고 하시고,,, 조언부탁드립니다. 1) 자른 section을 slide에 올리기 2) PBS wash (5min X3) 3) Cold acetone (10min Fixation) -> 다 증발하면, deep freezer 보관     (2)보관 후 brain 붙은 slide 사용할때, 아래와 같이 사용하면 될까요..? #RT에 놔두고 온도 안정화 à PBS wash (5min X3) è PAP PEN è 4%PFA로 고정    (3)딥프리져에 slide 보관 후, 이후에 다시 사용할때  60도 dry oven에서 1시간 baking하고 사용하는 것이 좋다고 하는데.. 이것에 대한 의견도 궁금합니다.   바쁘신 시간 내어 글 읽어주셔서 감사합니다.

제가 RT-PCR을 하려고 RNA을 뽑았습니다. 6-well에 6*10^5 cell/ml 로 시딩하고 처리하고 RNA를 뽑는 과정에 pallet이 매우 적어서 걱정을 했습니다. cDNA 합성전에 RNA 농도를 측정하였는데 전에 동일한 조건으로 뽑았는데 400~600ng/ml 대로 나왔습니다. 그리고 cDNA 합성할때 농도를 1ml에 맞춰서 계산합니다.   근데 이번에 RNA 농도가 none이 77이 나오고 처리한 것들도 300ng/ml가 나왔습니다. 머가 문제일까요?.... cDNA 합성하게되면 계산을 해보니 none은 13ul를 넣어야하더라고요... 이렇게 해도되나요?... 아니면 다시 처음부터 해야되나요ㅜㅜ  

JASPAR등과 같은 사이트에서 특정 gene에 대한 특정 Transcription factor의 binding을 prediction하면, 어떤 T.F A같은 경우에는 promoter 기준 전후로 굉장히 많은 prediciton site가 나오고 또 다른 T.F. B는 prediction site가 많지는 않지만 promoter 바로 앞부분에 위치한 prediction site가 나오는데요. 기초적인 것일 수도 있는데 문득 이런 의문이 들었습니다. 그렇다면 A가 이 gene에 더 potential한 T.F일지 혹은 B가 더 강력한 inducer일지가 궁금해졌습니다. 경우에 따라 다를 것 같긴 하지만, 둘 중 어느 것이 더 potential하다고 봐야할까요? 

안녕하세요    WB 할떄 1차 , 2차 안티바디 구분하는 법이 어렵습니다. ㅜㅜ   항체, 항원에 대한 개념과 1차 2차에 대한 개념이 있다고 하기엔 부족하고 없다고 하기엔 있는거 같습니다. 1차 항체 : A라는 동물에 target 단백질을 주사해서 만든 Ab   - 2차 항체 : B라는 동물에 A라는 동물의 IgG를 주사해서 만든 IgG       어떤 원리로 어떤 방법으로 1차 2차를 붙히는지는 알겠지만  예를 들어 actin을 확인하고자 하면 1차 안티를 anti- actin antibody in Rabbit 이라고 하면 2차 항체로 Rabbit lgG (HRB) 를 쓰는데  그러면 1차에 Rabbit를 쓰고 2차를 goat를 쓰면 안되는건가요??   1차를 rabbit을 쓰면 2차도 rabbit을 써야하는지 아니면 goat를써도 되는건지에 대한 개념을 못잡겠어요 ㅜㅜ  매번 누구한테 이렇게 쓰면 되냐고 물어볼수도 없고 공부할수 있는 좋은 방법이 없을까요?

cDNA 합성 시 gDNA를 제거하는 이유가 무엇인가요?  

현재 세포독성실험만 10번은 진행했는데 흡광도가 자꾸 0.7~1.3 정도로 나옵니다ㅠ L929셀을 96well plate에 1×10⁵개/well씩 깔고 다음날 검액 교체했습니다. 그리고 24시간 후에 EZ-cytox(WST assay) 10ul 처리해서 1시간 동안 CO2 incubator에 넣어뒀다가 흡광도 측정하는데요.. 사수분은 항상 흡광도가 0.9~1.1 사이로 나왔고 실험실 프로토콜 상으로도 그 정도 범위에 들어가는 흡광도로 나와야 하는데 저는 암만 해도 그 정도로 안나오네요ㅠ 몇 번이나 실험 말아먹는 중인데 어떻게 해야 흡광도값이 일정하게 나올까요ㅠㅠ

저희 실험실에 NAD 시약 (Molecular Weight:663.43) 250mg이 있습니다. 저희가 필요한 stock의 농도는 100mM 인데 계산을 어떻게 해야 하는 지 질문 드립니다.... 1M NAD로 만들어서 100mM로 만들면 되는건가요?

ammonium acetate를 0.5M이 되도록 methanol에 녹인 용액이 있는데요, 이를 필터해야해요.. 어떤 필터지를 써야 필터지가 안녹고 필터가 될까요?ㅠㅠ PTFE mambrain filter는 ammonium acetate에 녹는거같고, membrane filters mixed cellulose ester는 메탄올에 녹는거같은데.. 찾아봐도 사용한 필터지 종류는 안나와요ㅠ UPLC에 쓸거라 0.2um로 필터하는데, 다른 논문들도 그냥 0.2um 필터지를 사용했다고만 나오고 정확한 종류가 안나온거같더라고요 제가 못찾은걸수도 있긴 하지만...ㅠㅠ

전기 영동 후 밴드를 잘라서 EP tube에 넣고 냉장고에 보관 후 약 20시간 후에 gel purification을 시작해도 될까요?

저희 랩에서 세포 실험, 박테리아 실험, 클로닝 등등 다양한 실험을 합니다. 여러 실험에서 serological pipette을 사용하고 있습니다. 교수님께서 cell 실험 외에 멸균된 새 serological pipette을 사용하지 말라고 하시더라고요. cell 실험 외에는 pipette washer를 사용하여 세척된 serological pipette을 사용하라고 하십니다. 저는 세척된 serological pipette을 사용하면 contamination이 일어나지 않을까라는 걱정이 있습니다. 혹시 바이오 실험에서 pipette washer를 사용하여 세척된 serological pipette을 사용하신다면, contamination이 잘 일어나지 않는지 궁금합니다. 참고 URL pipette washer: https://www.fishersci.se/shop/products/pe-pp-automatic-pipette-washers/10040991 pipette washer 사용 영상: https://www.youtube.com/watch?v=28b7VTQw_-s

제목과 같이 assay를 하려고 할 때 staining solution volume과 wash 해주는 용액의 volume을 똑같이 해야한다는데 따로 이유가 있는건가요?

promega genome dna purification 키트 사용해서 진행했는데 프로토콜에서 protein precipitation solution 넣고 ice에 넣고 centrifuge 돌린후에 상등액 옮겨서 isoprophenol 넣고 centrifuge 돌리면 pellet이 생겨야하는데 아무리해봐도 pellet 없습니다.. cell양이 적은가해서 양도 늘려서 해봤는데 pellet이 다운이 안되는데 제가 놓친 부분이 있을까요..?

protoplast를 추출하고 hemocytometer로 계산하고 있습니다. 계산해야하는 샘플의 양이 많아서 현미경을 오래 보고 있기 힘들더라구요. 혹시 세포를 넣은 hemocytometer 사진을 찍고, 다른 프로그램으로 자동 계수하는 방법이 있을까요? Image J 나 기타 프로그램으로 할 수 있는 방법 알려주시면 감사하겠습니다!

실험을 진행하기 위해 기구들을 EO gas 멸균을 해야하는데 마땅한 업체를 찾는게 어려워서 문의드립니다.    광주/전남 지역에서 소량으로 EO gas 멸균 맡길 수 있는 업체가 있을까요?  아시는 분들은 꼭 답변 부탁드립니다 ! 

파는 시액도 있던데, 식품공전에 folin 시액을 만들어서 사용하라고 해서 만들어야합니다 !   온도는 나와있지않아 문의드립니다. 혹시 해보신 분 계실까요 ? 10시간동안 몇도에서 끓여야할까요 ?

필요한 1차 항체를 몇가지 찾다가   source에 rabbit과 rabbit IgG 가 구분되어서 적혀 있던데,   둘 다 2차 antibody를 rabbit으로 사용하면 되는건가요?   아니면 rabbit IgG에 맞는 2차 antibody가 있는건가요? 구분해서 붙여야 하나요?