band가 예전처럼 나오지 않아서요.

위에 band가 기존에 결과 이고 아래 band가 요즘 결과 입니다.

기존 조건과는 모두 같구요.
하물며 모든 buffer 역시도 기존에 stock한걸 희석해서 사용한거라..분명 같은 조건이면 같은 band가 나와야 하는데 요즘 모든 실험 결과가 엉망입니다ㅠㅠ
처음에는 Ab를 의심했는데 다시 만들어 새로 실험해도 역시나 같은 결과 입니다.

지금 의심되는건 혹시 Gel 만들때 Tris buffer의 PH를 의심해서 다시 만들까 하는데...정말 모르겠습니다. 
그리고 감이라 하면 좀 이상하지만  Ab를 구매한지 5개월 정도라 Ab 이상은 아닐거라 생각되지만 현상 할때 발현이 좀 덜된다는 느낌이 있습니다. 즉 기존에는 20sec씩 16회를 찍었는데 지금은 20회 이상으로 찍어야 해서요.

전체적인 실험 step은
gel(7.5%, ~30uL loading )--3hr running--1:20 Transfer--1hr blocking--1회 washing--1 Ab(상온 1:20 혹은 O/N)--5분간 3회 washing--2 Ab(상온 40min)--5분간 5회 washing-detection 입니다.