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immunocytochemistry 가 잘 안되요 ㅠㅠ |
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지금 brain을 culture하고 있는데요...ㅠ
컬쳐하고 한 일주일쯤 있다가 세포염색을 해 봤는데
특정 세포를 보고 싶어서 (purkinje cell) 특이항체인 calbindin으로 염색을 했거든요.
그런데..모든 세포에서 시그널이 뜹니다;;
negative로 background는 완벽하게 잡았구요, 조건 맞춰서 찍는데
사진에서 보이는 것처럼 모든 세포에서 시그널이 뜰 수가 없는데..;; 자꾸 모조리 다 떠요;
그리고 황당한 건 astrocyte 마커인 GFAP도 역시 주루룩 다 뜬다는 거예요;
안티바디 간섭인가 해서 슬라이드 하나당 안티바디는 한종류만 썼구요.
왜 그런 걸까요;? 지금 1: 500으로 염색을 했어서 이걸 1:1000이나 이렇게 써볼까 하는데
좋은 해결방법이 있으신 분 알려주세요 ㅠ
전 블락킹은 goat serum으로 상온에서 2시간 하구요, 1차는 4도 overnight 2차는 1:1000으로
상온 한시간 붙입니다.
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#immunocytochemistry #calbindin #primary culture |
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