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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
조회 19742  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 cell count &seeding 확인요~~
알cell라인  | 2010.05.18 12:02

cell count로 고민하고 있습니다.
cell count하는 방법은 알았는데
cell seeding하는 계산으로 헤매고 있습니다.

cell seeding하는 계산법이 여러가지 있나요?
각각 다른 대답이 나오더라구요,
제가 아는 것은 [(최종농도)/(현재농동)]*용량입니다.

즉, cell count했을 때 1*10^7/ml이고
96well에 1*10^5의 농도로 200ul씩 분주할 경우
[(5*10^5)/(1*10^7)]*20ml = 1000ul
-> 배지 19ml에 1*10^7/ml인 것을 1ml 섞어 200ul씩 분주한다.

이 방법이 맞나요?

만일 틀렸다면 수정해주세요.
머리에 쥐가 내릴 것 같네요.

고수님들의 답변 부탁드립니다.

#cell count
 
#seeding
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
써니  |  2010.05.18    

예 맞습니다...
계산 잘 된것 같습니다.

개구리karu  |  2010.05.18   
질문 내용중에 1*10^5으로 seeding한다고 했는데
계산에는 5*10^5으로 되어 있네요
계산하는 방법은 맞으나 결과는 1/5이 되어야 하니깐
200ul이겠네요
그러니까 19.8ml에 0.2ml을 넣고 잘 섞어주신 다음
깔아주시면 되겠네요..
cell라인  |  2010.05.18    
1*10^5으로 seeding하는게 well당 농도구요,
well당 200ul가 들어가니까
ml로 계산하면 5를 곱해야 하는 것이 아닌가요?
저도 이 부분이 좀 애매해서..
보통 96well은 이 정도 농도로 까는 것 맞죠?
게스트  |  2010.05.18    

만약 1*10^5/well이라면 맞게 계산하신거고
1*10^5/ml로 seeding 하는거라면 19.8ml의 배지와 200ul의 cell희석액을 넣는게 맞는겁니다~
보통 저희 실험실에서는 cell의 자라는 속도나 크기에 따라 차이는 있지만 대게 5~7*10^4/ml로 seeding합니다~

개구리karu  |  2010.05.18   
어떻게 설명을 해야할지...
제가 말씀드린 것은 19.8ml에 0.2ml의 세포를 희석하는 것인데
이것은 [(1*10^5/1*10^7)]*200ul로 계산하면 2ul가 됩니다.
따라서 님께서 필요하신 양(20ml)을 만들려면
100을 곱해주면 되기에 결과 값에도 100을 곱해주면 200이 됩니다.
어떻게 계산하던 써야할 양은 0.2ml이 되는 것이지요.
 저는 보통 이렇게 해서 실험을 하는데 님 말씀처럼 계산을 하면
저에 경우는 5배를 사용하는 것이 되는거라서
한번도 그렇게 생각을 해본 적이 없어서 헷갈리네요
방법은 1*10^5이 적당한 세포수라면 직접 seeding 해보는 방법 밖에는
없겠는데요.
그리고 모든 세포가 동일하지는 않습니다. 세포마다 seeding 해야할
세포수가 달라집니다. 그래서 먼저 어느 정도가 적당한지를 테스트를
해봐야 합니다.
여러 세포를 키워본 경험이 있으시다면 비슷한 크기의 세포를 전에 어느정도
깔았는지를 생각해보시면서 하시면 됩니다.
저에 경우는 세포가 작은편인데 24 well에 1.5*10^5의 세포를 깔아줍니다.
개구리처음처럼  |  2010.05.19   
글쓴분에 따르면,
cell은 1*10^7 cells/mL의 density를 가지고 있는데,
96-well에 1*10^5 cells으로 200 uL를 넣고 싶다.......
이는 1*10^5 cells/200 uL라는 얘기죠. 즉 5*10^5 cells/mL의 density이므로,
글쓴분의 계산대로 20배 희석하여 쓰면 됩니다.
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