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phospho-protein과 kinase의 결합을 보려 하더라도..
IP는 phospho-protein의 total form으로 한뒤 WB를 phospho-Ab로 해야하는거 아닌가요??
그래야 그 protein에 붙어있는 kinase뿐 아니라 그 단백질의 phosphorylation 상태도 확인해볼 수 있을것 같은데..
확실치 않지만..지나가다 남겨봅니다.
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가나다라
(비회원)
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11.04.24 16:51
아, 그것때문에
산타크루즈에 phosphoprotein에 대한 bead가 있어서
그것을 사용했습니다.
혹시 그래도 해당 단백질을 IP하고,
WB을 phosphoform과 kinase를 같이 봐야 하는지요.
IP를 해본적이 없고 이번에 처음 해보는 거라서용.
조직내에 존재하는 phosphoprotein이 굉장히 다양하게 많을텐데....phosphoprotein resin으로
pull down 을 하면 제 생각에는 여러가지 단백질이 다 딸려올테고...여기에 특정 kinase 가
딸려온다 쳐도 substrate 가 무엇인지 말할 수는 없을텐데...
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가나다라
(비회원)
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11.04.25 13:36
그럴수도 있겠네요. 그 kinase가 그 단백질만 phosphorylation 시킨다는 보장이 없으니_
그럼,
IP할때 phospho 레진에 phosphoprotein에 대한 antibody를 먼저 붙인 후에,
extracted protein과 반응시키면 어떻까요?
그런데 왜 다른 논문이나 protocol들에서는 bead와 extracted protein을 먼저 반응시킨후에
IP할 antibody를 반응시키는 거죠?