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 전체 > Immunology > Immunoprecipitation
조회 3972  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Imunoprecipitation
알찬이  | 2012.02.21 12:19
첨부파일 파일첨부: 제목 없음.png (286 KB)
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안녕하세요 이제 대학원 1학년생으로 실험을 진행하고 있는데 결과가 잘 안나와서 조언좀
부탁드립니다.ㅠ.ㅠ
Ip를 진행 중에 있는데 결과가 자꾸 안나와서 미치겠습니다.
우선 vector 는 pEGFP-C2 에 유전자를 Cloning 해서 Transfection 후에 진행 하고 있습니다.
4 well confocal 은 마쳐서 Transfection 효율은 어느정돠 확인했는데
100 파이 plate 에서 IP trasnfection 후 RIPA 버퍼로 Cell lysis 후 (보통 6-10시간정도 진행합니다.) GFP Anti body 를 6시간정도 반응시키고 A/G agrose bead 6시간 반응후
Ripa 로 2회 washing . PBS 로 2회 washing 후 5X loading buffer 를 넣고 끓인후
SDS page 한 결과 입니다.
GFP 밴드가 나온다면 26Kda 정도에 동일하게 떠야 되는거 같은데 자꾸 45KDa 정도 위치에
동일한 Band가 나타나고 위아래로 잡 band 들이 나와서 .. 왜 이런지 도저히 모르겠습니다.
제가 뭐 잘못한다거나 빠트린게 있는게 아닌지 고수님들 도와주세요

#IP
 
#Imunoprecipitation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리Jake  |  2012.02.21   
우선 vector 는 pEGFP-C2 에 유전자를 Cloning 해서 Transfection 후에 진행 하고 있습니다
-> Do you mean that protein X is fused with GFP such as GFP-X?

If so, IP by anti-GFP results in purification of GFP-X.
The MW of purified protein should be 26 + Y. Here, Y is the MW of protein X.
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