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엘피스바이오텍
(비회원)
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12.06.28 16:00
"혹시 이런 상태로 단백질을 발현시켜보면 억제시키려는 단백질이 나올까요?"
억제시키는 단백질? 기능이 없는 단백질이겠죠?
그리고 발현된 단백질은 stop까지의 아미노산만을 포함하는 작은 조각입니다.
단백질 발현의 문제가 아니라 기능의 문제입니다.
만약 stop을 넣어준 앞부분이 활성을 갖는 부위라면 stop까지 발현된 작은 조각도 활성을 가질 수 있습니다. Met을 ser으로 바꾼다고 해도 앞이나 뒤에 frame이 맞게 ATG codon이 존재한다면 발현에는 문제가 없을수도 있습니다.
domain에 따른 그리고 아미노산의 위치에 따른 활성 테스트는 전체적인 관점에서 serial mutant나 또는 구조예측을 통한 주요 아미노산의 change 작업을 통해 이루어져야 합니다.
엘피에스바이오텍님 답변 감사드립니다.
제 질문이 제대로 전달되지 못한것 같네요
정상적으로 발현되는 단백질은 기능을 갖고 있는 것입니다.
약 100개의 아미노산으로 구성되어 있는데 위의 질문에 있는 것처럼
start codon과 N-terminal 부분쪽에 stop codon을 넣어줘서 단백질 발현은 못하게 하는 것입니다.
이미 다른 논문을 통해 검증된 것이라 저는 그것을 재현해보고자 하는 것입니다.
글이 너무 어렵네요...
결국 중간에 stop은 넣었다.
처음에 Met 이 Ser로 변환시켜야 한다.
그럼 앞쪽 primer를 Ser로 변환해서 PCR을 진행하면 되겠네요...
Point Mutation은 Overlapping PCR로 아주 손쉽게 할수 있습니다.