real time PCR을 하고 있습니다.
흔히 쓰지 않는 primer를 3개 정도 주문을 해서 qPCR을 했는데, ct값이 34 이상이 나오네요 ;;; 허걱...
질문이요..
1. 이 때 primer 를 더 넣어주면 ct값이 내려 갈까요?
F & R primer를 100 pmol 로 만든 후에 tube 1개에 DW 80ul에 F & R primer 각 10ul 넣어서 만들어 놓습니다. F & R primer 1ul cDNA 1ul DW 18ul 해서 PCR를 합니다.
2. 그럼, 혹시 cDNA dilution을 더 높은 농도로 하는게 좋을까요? 이건 당연하다고 생각하는데, 3개의 primer 중 1개는 ct값이 20 정도가 나오는데, 다른 2개는 30이상이 나옵니다. (35이상도 ;;;) 이건 primer 를 다른 부분으로 다시 짜야하는 것일까요??
3. 혹시 qPCR 할 때 중요하게 꼭 check 해야하는 것들이 있을까요? 힝....
--------- 비가 옵니다. 다들 실험 열심히 하시구요... 비오니까 실험하기 시러요~ ㅋㅋㅋ 수고하세요!!! 모두들!!! |
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