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ICS는 cell 안에서 생성된 cytokine이 cell 밖으로 못나게가 막은 후에 (brefeldin A나 monemsin같은 golgi transport inhibitor를 사용하여) cell안에 accumulation된 cytokine을 Ab로 잡는거임. cell 안에 있는걸 잡아야 하니 fix, perm 단계가 필수적.
cytokine secretion assay라는게 정확히 뭘 말하는지 모르겠는데, Miltenyi등에서 나오는 kit를 말하는거라면, cell을 fix, perm해서 죽이지 않고, 살아있는 cell을 직접 분리하는게 목적임. 즉, 특정 cytokine에 대한 antibody를 미리 cell surface에 거꾸로 붙인 다음에 (bispecific antibody라서 CD45같은 surface에 한 쪽이 붙고, cytokine binding site는 free 상태) secretion되는 cytokine이 여기에 붙게 내버려 두는거임. 다 cytokine이 secretion되고 나면 detection antibody를 다시 붙여서 이를 이용해서 MACS separation이나 cell sorting이 가능해짐.
샌드위치 ELISA랑 유사하다고 보면 됨. 즉, plate bottom이 아닌 cell에 capture antibody를 붙이고 나중에 detection ab를 넣는거임. 왜? 살아있는 cell을 분리하려고. ICS한 cell은 detection후에 다죽음거임.