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| 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning |
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cloning 질문 |
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답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의) |
Insert 와 Vector를 ligation 해서 mapping 까지 끝냈습니다.
그런데 insert가 들어간 E 로 짤랐을때는 원하는 사이즈가 나오는데
insert 내의 E와 vector 내의 E로 자르면 안짤립니다.
pKs-I-TRAF에서 I-TRAF을 잘랐고 (bgl2-hind3)
pDsRed1-N1에서 MCS부위중 bgl2-hind3를 잘랐죠
그런후 gel extraction을 한후에 ligation -->TF--> prep후 젤내려서
cloning 된것을 찾았죠
그후에 정말 cloning이 된것인지 확인하기 위하여
(bgl2-hind3, EcoRI single cut, xho1-not1 cut) 했죠
이것은 insert 내의 enzyme과 vector의 enzyme을 따져서 이렇게 잘랐죠
문제는 여기서 부터입니다.
bgl2-hind3로 자르면 insert와 vector밴드가 나옵니다.
하지만 다른 enzyme으로 자르면 잘리지 않습니다. 분명히 Enzyme site가
있는데도 말이죠 ........
미치겠습니다... 원할한 답변좀 구해보아요 ㅜㅠ |
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1. 그 다른 enzyme들, active한 거죠? control로 확인했나요?
2. TF 후 colony 몇 개나 찍어보셨나요? 이삼십개 이하였다면 프랩 한 판 더 권장.
3. 프랩한 DNA 에 문제가 있을 수도 있습니다. 원 모어 타임.
"Cloning에는 왕도가 없다."
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insert gene seq. 분석을 함 해보심이.. 첨부터 뭔가 잘못 된 놈은 아닐런지. |
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엔자임은 이상이 없었고요
아무래도 님이 지적하신 3번이 맞는것 같아요 ㅋ
2번같은 경우는 셀프랑 라이게이션 콜로니가 비슷하게 나왔지만 그래도
이왕한거 프랩하여서 20개중2개를 찾았죠..
아... 답변 감사합니다. 결과적으로 님이 지적하신 3번
DNA가 이상한것 같습니다...
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