실험 Q&A Immunology > Immunocytochemistry
IHC 에서 HIER 관련 질문입니다
IHC... (비회원)
mouse 1' Ab 와 Dako envision kit 를 사용하여 IHC 시행하는 중입니다.
금일 bone marrow 에서 Anti-CXCR4 Ab 를 이용해서 IHC 를 시행하였는데 DAB stain 이 전혀 되지 않았습니다. false negative 로 판단하고 있습니다.
1) Ag retrieval 은 microwave 사용하고 있습니다. citrate pH 6.0 사용하고, buffer 온도 92~95'c 정도로 15분 돌리고 있습니다. 온도가 너무 낮아 retrieval 이 잘 되지 않은 것일까요? boiling 에 의해서 검체가 떨어지는 것이 무서워 retrieval temperature 를 조금 낮추었는데 이것이 원인이 될 수 있을 지 궁금합니다.
2) Dako envision kit(k5007) 이용하시는 분께 질문입니다. 설명서에서는 DAB 가 strong light 에 노출되게 하지 말라고 되어있던데 형광등 아래에서도 DAB 이 반응을 안할 수가 있을까요?
3) 2일 전 만든 DAB solution 을 사용하였는데 그것이 좀 걸립니다. false negative 의 원인이 될 수 있을까요?
이 사태의 원인이 무엇일지..ㅠ 고수분들의 답변 부탁드립니다. 감사합니다.
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