현재 electorphoration을 통한 cloning을 세팅중인 대학원생입니다.
그런데 실험이 잘 되지 않아 cloning을 잘 아시는 분들께 질문합니다.
처음엔 DH5-alpha cell을 이용해 vector를 10ng 정도 넣고 electric shock을 줬는데
colony가 안뜨더라구요.
한가지 vector만 쓴게 아니라 3종류의 pcDNA 3.1(+) vector를 사용했는데 3개 모두 실패했습니다.
Data sheet를 보니까 DH5-alpha가 electrophoration 용이 아니라고 해서
DH10-beta라인의 electrophoration 전용 cell을 구매해서 다시 실험을 했습니다.
이때는 총 5가지 vector를 사용했는데(gene sequence가 들어있는 vector 3개, 공 pcDNA 3.1, cell을 샀을 때 들어있던 control vector) 회사측에서 제공한 control vector를 제외한 나머지 vector 들은 모두 colony가 생성되지 않았습니다.
이때 사용한 vector의 양은 약 1pg에서 2pg 정도 입니다.
다른 실험실에서는 원래 cloning 할때는 1pg 정도의 아주 적은 양을 사용한다고 하고
(오히려 vector의 양이 너무 많으면 안좋다고 하셨습니다.)
저희 실험실에 있는 친구는 배울 때 10~50ng의 vector를 사용했다고 하는데
두 방법 모두 colony가 생성되지 않아서 무슨 문제가 있는 건지 잘 모르겠습니다.
cloning에 대해 잘 아시는 분들, 실험하고 계신 분들
vector 얼마정도 넣어서 실험하시나요? |
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