제가 이걸로 석사 학위 논문 썻습니다.
frame shift mutation을 일으킬 때 중요한 것은 ATG(start codon)이 적은 것을 택하는 것이 중요합니다. sequence를 보시고 엄한 product를 생산하지 않는 것이 중요할 것 같군요...발생하는 ATG codon에 mutation을 주어 mutant primer를 주문해 쓰십시오.
3번을 강추합니다. sequence를 알고 있을 때, 단계의 정확성이 보이고 손이 많이 가긴하지만... 확실한 방법입니다. 킷은 elution할 때 약간 사용합니다.

대부분 그냥 primer 짜서 합니다.
primer 짜서 PCR 하시고, self ligation 하는 방법 강추합니다.
molecular cloning 책을 참고하세요

두분 답변 감사 드립니다,,
책보고 공부 더 해봐야겠어요 ^^

vector의 크기, mutation의 정도에 따라서 정하는것이라 생각합니다.

vector의 크기가 크지 않다면, 또는 vector형태가 아니라면 primer를 이용하시는 방법이 효율이 좋겠지만, vector자체에 mutation 을 주어 vector을 얻으실 생각이라면 mutagenesis kit가 도움이 되겠죠?

또 궁금한게 있는데요,,pcr이용한 mutation을 할때,, DPN1은 처리해주지 않아도 상관없는건가요??

MUTATION이 생겼는지 확인하는 방법으로 어떤 방법을 사용하는지?/
시퀀스 맡기는거 밖에 없는건가요?

제가 할때는 DPN1 사용 안했는 데... 오래되서 잘 모르겠습니다...

mutation의 확인은 PCR이 원하는 base로 뜬다면 mutation을 포함하고 있다는 것이며,
최종확인은 Target gene이 expression 되는 지를 확인하면 됩니다.

원하는 것을 얻으려면 single colony를 얻어 적절한 assay를 실행하여, 최대한 원하는 수치의 colony를 얻고, 또 spread 시켜서, 또 assay를 하여 섞이지 않은 균주를 얻을 때까지 계속 반복한 후, sequencing을 통해 확인합니다...