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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 7905  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 site-directed mutagenesis vs site-saturation mutagenesis ?!
심심이  | 2013.04.16 09:12
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
QuickChange Site-directed mutagenesis를 2003년도 이용했을 때는
5'-phosphorylated primer 짜고, PCR한 후, Dpn I 처리하고, PCR product를 T4 DNA ligation 등등 했는데, 2004년  이후부터는 site-saturation mutagenesis가 등장했습니다.
Pfu polymerase로 template plasmid를 PCR하고, Dpn I 처리한 후, 합성된 nick circular plasmid 를  바로 transformation하는 방식이더군요.

그런데 용어 site-directed mutagenesis와 site-saturation mutagenesis 의미 차이가 뭔지 잘 모르겠습니다. 왜 이런 이름을 붙였는지 혹시 아시는 분 계세요???
#site-directed
 
#site-saturation
 
#mutagenesis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리엘피스  |  2013.04.16   
site-directed mutagenesis는 하나의 아미노산 잔기 또는 nucleotide를 다른 것으로 바꿔주는 과정으로서 Ligase를 사용하건 아니면 최근의 방법들 처럼 nick overlapped plasmid PCR product를 바로 transform하여 endogenous recombination 기작으로 mutant construct를 만들건 여러 방법이 소개되어 있습니다.

site-saturation mutagenesis는 한부위 또는 여러부위에서 다른 아미노산 잔기를 가지는 contruct library를 만들므로서 기능상의 변화가 있는 clone을 찾고자 하는 목적에서 사용하는 방법이며 그 실험방법은 site-directed mutagenesis 방법과 동일합니다. 하지만 한부위의 아미노산을 정해진 다른 아미노산으로 바꾸는 것이 아니라 불특정한 다른 아미노산으로 바꾸는 것입니다.가령 primer에 NNK 서열을 넣으면 NNK는 20개 아마노산의 어떤 것도 될 수 있으며 이로부터 얻은 clone들의 mix는 다양한 아미노산으로 구성된 (그 부위에) library가 됩니다. 이중에서 기능적으로 뛰어나거나 아니면 다른 기능을 하는 clone을 찾아나가는 것이 그 다음 과정이 됩니다.

방법은 같지만 목적은 다릅니다.
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