제품번호 : 50494

LSM- Lymphocyte Separation Medium

사용목적 :

 peripheral blood 로부터 lymphocytes를 분리할 때 사용 (mononuclear lymphocyte 분리)

배경 :

초기 leukocytes를 분리하는 방법은 특정 compound를 blood에 섞어서 erythrocytes를 응집시키는 방법으로 진행되었으며, 원심분리 진행 시 erythrocyte는 density 증가로 인해 pellet으로 가라앉고 leukocytes만 튜브의 상층액 부분에 분리되어 수거하는 방식으로 사용됨.

Boyum 은 Ficoll-sodium metrizoate solution으로 원심분리 하는 방법을 사용하여, 좀더 편리하고 빠른 분리방법을 소개함. 희석된 혈액을 Ficoll-sodim metrizoate solution의 상부에 첨가하고, 낮은 속도로 짧은 시간 동안 원심분리하게 됨. Erythrocytes 와 granulocytes는 튜브의 바닥에 침전되며, mononuclear cells (lymphocytes) 와 platelets은 두 층 사이의 경계면에 모이게 됨

Reagent 특성 :

LSM은 sterile filtered solution으로 100ml 당 6.2g의 Ficoll과 9.4g의 sodium diatrizoate 로 구성됨

Density는 20°C에서 약 1.07700.1-1.0800g/ml 임

실험방법 :

1.    LSM을 사용 전에 잘 섞어줌

2.    무균상태에서 LSM 3ml을 15ml centrifuge tube로 옮김

3.    Defibrinated 또는 heparinized blood 2ml을 physiological saline (ex. PBS) 2ml 과 섞어줌

4.    희석된 blood 를 LSM 3ml 이 들어있는 centrifuge tube로 조심스럽게 옮김 ( 섞지말것)

5.    실온에서 400Xg로 15-30분간 원심분리.

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