제가 돼지 난자에서 ICC 를 하고 있는 학생인데요.
결과가 잘 안나와서요.. 저의 실험에 문제점을 잘 모르겠어서
한번 봐주세요.
1. Fixation : 4% PFA , RT 20min
2. Washing : 0.1% PVA+PBS 3times, 10min
3. Permeabilization : 0.5% Triton-X + PBS, 39'C 20min
4. Washing : 0.5% Triton-X + 0.5%BSA + PBS 3times
5. DNA denaturation (1st Ab: 5mC) : 4N HCl, RT 30min 이 과정은 안티바디 특성상 꼭 필요하기 때문에 HCl 처리를 함
6. Blocking : 1% BSA + PBS, 39'C 1h
7. Waching : 0.5% Triton-X + 0.5%BSA + PBS 3times
8. 1st Ab 4'C overnightt
9. Blocking : 1% BSA + PBS, 39'C 1h
10. 2nd Ab 39'C 1h
11. Washing : 0.1% PVA+PBS 3times, 10min
이렇게 하고 mounting 을 하는데 나중에 형광을 확인해보면 전혀 detection이 되지 않아요..
이 프로토콜로 원래 잘됐었는데 안티바디도 원래 쓰던걸로 새로 주문했는데
왜 염색이 안되는지 궁금합니다..
ICC 많이 해본 분들 도움좀 주세요 ㅜㅜ |
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