white colony picking 3개 정도 mini prep.해서 double cut 한 결과

insert size에 맞게 들어간 것 보았습니다 이것을 따로 sequencing을 해서 확인을 따로 거쳐야 하나요?

저의 경우이니 참고해주시면 고맙겠습니다.
PCR은 기본적으로 Error를 항시 포함하는 과정입니다.
저는 PCR TA cloning 후에 4개나 3개의 white colony를 따서 LB나 2YT에 키운후에 플라스미드 프랩하고

반드시 시퀀싱을 보냅니다.

시퀀스상에서 에러가 없는 그중에 하나를 선택하여
원하는 엔자임으로 잘라서 최종 벡터에 클로닝합니다.

엔자임으로 자르고 붙이는 과정에서 DNA 서열상의 에러가 발생할 확률은 거의 없기 때문에
PCR과정이 아닌 자르고 붙이는 과정을 확인하는데는 엔자임 커팅& 사이즈 확인으로 클로닝 여부를 확인하고 구지 시퀀싱은 하지 않습니다.

PCR 확인하실때 잡밴드가 너무 많이 뜨신다면
Primer seq가 맞는지
Annealing Temp. 가 너무 낮지 않은지 확인을 해보세요.
그리고 피씨알의 네거티브 컨트롤 (프라이머 둘다 안넣고 물만 넣은경우, 프라이머 한쌍씩만 넣은경우)를 같이 PCR을 해보세요. 네거티브에서 밴드가 안떠야 정상입니다.

Galford 님 감사합니다
annealing temp. 2'c 올렸는데 잡밴드가 사라졌습니다 !

감사합니다!^^