96well에 2*10^5 cell/ml로 100ul씩 seeding 하라는 말이..
well 당 2x 10^4 cell/well 맞나용?
추가질문:
1. 제가 셀을 seeding하고 , plate를 좌우 앞뒤로 툭툭툭툭 쳐서 셀이 잘 퍼질 수 있도록 쳤는데요,, 현미경을 보니 중앙에 몰렸어요 ㅠㅠㅠ 너무 세게 쳐서 그런가요?ㅠㅠ
seeding 후 셀이 골고루 잘 퍼질 수 있는 방법은 무엇인가요?ㅜㅠ
2. 96well에 seeding할때, 셀을 골고루 깔기 위해서 vortex 5 , 1ml 피펫믹스, 튜브 믹스 하여, 100파이 dish에 부은 후 상하좌우로 믹스하고, 멀티피펫으로 96well plate 한줄 seeding하고,
또다시 100파이 dish를 믹스하여 한줄한줄 채워가는 방법 괜찮은가요?
3. plate well수 당 권고하는 세포수 도표 같은것이 있는지요?? (제가 48well plate에 1x10^4/well로 한다니까 적다고 안된다고 하시는 분이 계서서요 ㅠㅠ아직 96well에 1x10^4/well밖에 안해봐서 잘 모르겠습니다 ㅠㅠ)
4. 미디어를 suction 제거하여 pbs 워싱을 할때, suction 제거기보다 피펫으로 미디어를 제거하는 것이 더 좋은가요? 그리고 pbs 워싱 후 셀이 모두 없어졌습니다. 어떻게 pbs워싱을 하는 것인가요?
5. wst-1할때 투명배지 위에 10ul wst-1을 첨가하면, 잘 안섞이는가요?
미디어를 제거한 후에 PBS+ wst-1용액을 첨가해야하는 것이 더 좋은방법인가요?
method도 그렇고, 저는 되도록이면 셀을 건드리지 않으려고 미디어에 바로 wst-1용액을 첨가하고 싶은데, wst-1용액이 배지와 잘 안섞일 수 있다고, 배지 제거하고 첨가하라는 말씀이 있으셔서요 뭐가 맞는지 모르겠습니다.ㅠㅠㅠㅠ
6. 48well에 seeding할때, 멀티피펫으로 못하니까 cell을 vortex 5 , 1ml 피펫믹스, 튜브 믹스 하여, 1ml피펫으로 300ul 취한 후, 3개 well에 주입하고, plate를 상하좌우로 믹스하고, 셀이 들어있는 튜브를 믹스하여, 1ml피펫으로 위와 같은 방법으로 seeding하는데요, 제가 하고 있는게 맞는건가요?ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ (가운데로 셀이 몰려있어요,,,)
모든 질문에 답변은 어려운 것 알고있구요, 답변주실 수 있는 것만이라도 답변부탁드립니다 ㅠㅜ
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